灰毡毛忍冬开花的调控基因及其应用制造技术

本发明专利技术公开一种灰毡毛忍冬开花的调控基因及其应用，涉及植物基因工程技术领域，该灰毡毛忍冬开花的调控基因为

【技术实现步骤摘要】
灰毡毛忍冬开花的调控基因及其应用


[0001]本专利技术涉及植物基因工程领域技术，尤其是指一种灰毡毛忍冬开花的调控基因及其应用
。

技术介绍

[0002]灰毡毛忍冬为忍冬科
(Caprifoliaceae)、
忍冬属
(Lonicera)
多年生常绿灌木或藤本，是中国传统中药“山银花”的主要基原植物之一，其药用部位为干燥花蕾及初开的花，具有很高的药用价值和经济价值
。
普通灰毡毛忍冬抗性差
、
蕾期短
、
易凋谢
、
产量和有效成分含量低；而花蕾型灰毡毛忍冬新品种
‘
龙花
’
、
‘
金翠蕾
’
等，其花期花冠一直不展开，花蕾整齐均呈棒状，花期长达
15
～
25
天，解决了同时段大规模集中采摘困难等问题，为灰毡毛忍冬植物提供了新的优良种质资源
。
为更好的指导实际生产和迎合未来分子育种的发展趋势，研究花蕾型灰毡毛忍冬蕾期长
、
花蕾整齐不开放等现象背后的分子机制则显得十分必要
。
[0003]MADS
‑
box
基因家族是植物中一类生物功能丰富的转录调控因子，参与调控植物的生长发育的各个时期，尤其与花的形态发生密切相关，
MADS
‑
box
基因在调控开花时间
、
花冠展开等花器官发育方面发挥着重要的调控作用
。
目前，
MADS
‑
box
家族基因已从大量不同植物种类中克隆得到，但灰毡毛忍冬
MADS
‑
box
相关基因的报道微乎其微，仅见
AP1、AGL19
基因和蕾期延长相关基因
AGL15
克隆和表达分析以及内参基因筛选等零星报道
。
从现有文献报道来看，调控花蕾型灰毡毛忍冬蕾期长
、
花冠不展开的关键基因尚需进一步挖掘与验证
。
[0004]AGL82
基因是该基因家族中的一员，目前尚未有对其的研究报道；申请号为
201710819491.6
的专利技术公开了一种甘蔗开花调控蛋白
ScFT
‑2及其编码基因，现有技术未从灰毡毛忍冬中克隆得到
AGL82
基因，并以灰毡毛忍冬
AGL82
基因为切入点，通过载体构建
、
遗传转化拟南芥等方法研究灰毡毛忍冬
AGL82
基因的功能及其在植物花器官发育中的应用；因此，基于此现状，迫切需要开发一种灰毡毛忍冬开花的调控基因及其应用，以满足实际使用的需求
。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术针对现有技术存在之缺失，其主要目的是提供一种灰毡毛忍冬开花的调控基因及其应用，其提供了灰毡毛忍冬花器官发育相关的
AGL82
基因及其编码蛋白序列，以及制备
AGL82
基因的方法和制备过程中所需的引物，并通过
AGL82
基因过表达载体的成功构建
、
遗传转化拟南芥等技术手段验证了
AGL82
基因可促进植物开花的功能
。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采用如下之技术方案：
[0007]一种灰毡毛忍冬开花的调控基因，所述调控基因为
AGL82
，其基因序列如
SEQ ID NO.1
所示；所述调控基因的编码蛋白质的氨基酸序列如
SEQ ID NO.2
所示
。
[0008]作为一种优选方案：所述调控基因能够通过
RNA
提取及反转录进行克隆
。
[0009]作为一种优选方案：所述调控基因进行克隆的方法包括如下步骤：
[0010]第一：以灰毡毛忍冬为材料，提取
RNA
，并将提取的
RNA
进行反转录生成
cDNA
第一
链，作为
PCR
扩增的模板；
[0011]第二：将获得的灰毡毛忍冬
AGL82
基因进行序列分析并设计
PCR
反应引物；
[0012]第三：以灰毡毛忍冬
cDNA
第一链为模板，采用
AGL82PCR
反应引物进行
PCR
扩增，
PCR
扩增产物进行
1.0
％琼脂糖凝胶电泳，并按琼脂糖凝胶纯化回收试剂盒回收
PCR
产物；回收
PCR
产物与
pTOPO
载体连接并转化至大肠杆菌
DH5
α
感受态细胞，挑取阳性克隆并测序
。
[0013]作为一种优选方案：所述
PCR
反应引物为
LmAGL82
‑
F
，其引物序列为：
ATGGGACGAGCTAGAGTCAGAA。
[0014]作为一种优选方案：所述
PCR
反应引物为
LmAGL82
‑
R
，其引物序列为：
CATGGCTAATCAGTAATTAATTGAAC。
[0015]作为一种优选方案：所述
PCR
扩增
PCR
扩增的反应体系为：2×
Phanta Max Buffer 12.5
μ
L
，
dNTP Mix 0.5
μ
L
，
SVP
‑
F
和
SVP
‑
R
各1μ
L
，
Phanta Max Super
‑
Fidelity DNA Polymerase 0.5
μ
L
，
cDNA
模板
1.5
μ
L
，
ddH2O 8.0
μ
L
；
PCR
反应程序为：
95℃
预变性
3min
；
95℃
变性
15s
，
60℃
退火
15s
，
72℃
延伸
1min
，
35
个循环；
72℃
彻底延伸
5min
；
12℃
持续
。
[0016]所述灰毡毛忍冬开花的调控基因的应用，所述调控基因用于调控灰毡毛忍冬开花期
。
[0017]作为一种优选方案：本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种灰毡毛忍冬开花的调控基因，其特征在于；所述调控基因为
AGL82
，其基因序列如
SEQ ID NO.1
所示；所述调控基因的编码蛋白质的氨基酸序列如
SEQ ID NO.2
所示
。2.
根据权利要求1所述的灰毡毛忍冬开花的调控基因，其特征在于；所述调控基因能够通过
RNA
提取及反转录进行克隆
。3.
根据权利要求2所述的灰毡毛忍冬开花的调控基因，其特征在于；所述调控基因进行克隆的方法包括如下步骤：第一：以灰毡毛忍冬为材料，提取
RNA
，并将提取的
RNA
进行反转录生成
cDNA
第一链，作为
PCR
扩增的模板；第二：将获得的灰毡毛忍冬
AGL82
基因进行序列分析并设计
PCR
反应引物；第三：以灰毡毛忍冬
cDNA
第一链为模板，采用
AGL82PCR
反应引物进行
PCR
扩增，
PCR
扩增产物进行
1.0
％琼脂糖凝胶电泳，并按琼脂糖凝胶纯化回收试剂盒回收
PCR
产物；回收
PCR
产物与
pTOPO
载体连接并转化至大肠杆菌
DH5
α
感受态细胞，挑取阳性克隆并测序
。4.
根据权利要求3所述的灰毡毛忍冬开花的调控基因，其特征在于；所述
PCR
反应引物为
LmAGL82
‑
F
，其引物序列为：
ATGGGACGAGCTAGAGTCAGAA。5.
根据权利要求3所述的灰毡毛忍冬开花的调控基因，其特征在于；所述
PCR
反应引物为
LmAGL82
‑
R
，其引物序列为：
CATGGCTAATCAGTAATTAATTGAAC。6.
根据权利要求3所述的灰毡毛忍冬开花的调控基因，其特征在于；所述
PCR
扩增
PCR

【专利技术属性】
技术研发人员：刘思思，龙丽君，马英姿，李昌珠，刘汝宽，王晓明，曾慧杰，乔中全，肖静晶，涂佳，
申请(专利权)人：中南林业科技大学，
类型：发明
国别省市：