一种大肠杆菌制造技术

本发明专利技术公开了一种大肠杆菌

【技术实现步骤摘要】
一种大肠杆菌Nissle1917微凝胶制剂


[0001]本专利技术涉及生物医药的
，具体是一种大肠杆菌
Nissle1917
微凝胶制剂
。

技术介绍

[0002]癌症是世界范围内的一个重大公共卫生问题
。CRC
的标准常规治疗方法有手术
、
化疗和放疗，但是这些治疗有许多副作用，如高耐药性
、
高复发率
。
因此，需求更多的替代性和有效的方法来治疗
CRC。
肿瘤免疫疗法是一种被广泛关注的具有较大发展潜力的治疗方法，旨在通过增强机体的免疫功能来治疗肿瘤，包括免疫检查点阻断
、
疫苗和小分子抑制剂，并且免疫疗法在控制
CRC
发生发展中发挥着重要作用
。
[0003]然而，肿瘤微环境中的癌细胞
、
基质成纤维细胞和其他细胞激活
、
释放的转化生长因子
β
(TGF
‑
β
)
，通过对肿瘤相关成纤维细胞和血管生成的作用，促进肿瘤进展和抑制免疫细胞的抗肿瘤活性，从而产生免疫抑制的肿瘤微环境
(TME)
，使肿瘤细胞在某些情况下能够通过多种机制逃避机体的免疫监视，在体内不断增殖，最终形成肿瘤组织
。
[0004]人体肠道内存在大量的微生物，正常生理状态下，肠道微生物将有助于肠道对食物的消化吸收，抵抗病原体入侵和调节肠道黏膜细胞的增殖，但肠道菌群失调会影响肠道内部微环境和功能，并与
CRC
的发病即疾病进展密切相关
。
肠道微生物作为癌症发生发展的参与者，同时可能对提高免疫疗法的敏感性
、
维持稳态和宿主健康方面发挥着重要的调节作用
。
[0005]大肠杆菌
Nissle1917
简称
EcN
，是一种研究最多的多功能益生菌，具有菌株特异性和治疗效果，已经成功用于治疗慢性炎症性肠病，并在临床应用于加强肠道屏障功能
。EcN
不仅对多种肠道致病菌具有拮抗作用，还能调节体内免疫分子的分泌，增强宿主免疫防御能力等功能
。EcN
通过调节肠道菌群，加快肿瘤促炎微环境转变，增强免疫细胞浸润，从而增强抗肿瘤免疫作用
。
但口服
EcN
会面临着被胃肠道环境侵蚀的问题，因此，如何实现
EcN
功能的最大化以及保持
EcN
自主性和动态功能的递送，提高
EcN
在体内的数量与活力就成了急迫需要解决的问题
。

技术实现思路

[0006]为解决上述问题，即解决上述
技术介绍
提出的问题，本专利技术提出了一种大肠杆菌
Nissle1917
微凝胶制剂，具体技术方案如下：
[0007]一种大肠杆菌
Nissle1917
微凝胶制剂，所述微凝胶内主要成分为大肠杆菌
Nissle1917
，凝胶层成分为壳聚糖和海藻酸钠
。
[0008]进一步的，所述壳聚糖的浓度为
125
μ
g/mL。
[0009]进一步的，所述海藻酸钠的浓度为
5mg/mL。
[0010]进一步的，所述凝胶层包封两层
。
[0011]进一步的，所述微凝胶制剂制备方法为：利用壳聚糖和海藻酸钠之间的静电作用，运用逐层组装与氯化钙离子交联技术，构建
Nissle1917
微凝胶制剂
。
[0012]进一步的，所述微凝胶制剂能够增多具有抗肿瘤作用的有益菌
、
减少致病菌实现抗肿瘤作用，能够引发肿瘤细胞凋亡，诱导免疫原性细胞死亡，加快肿瘤促炎微环境转变，即增强免疫细胞浸润的作用，从而诱导强大的抗肿瘤免疫反应，增强免疫治疗药物的抗肿瘤免疫疗效
。
[0013]本专利技术的有益技术效果为：利用壳聚糖
(CS)
和海藻酸钠
(SA)
之间的静电作用，运用逐层组装和氯化钙离子交联技术，构建
pH
响应性口服大肠杆菌
Nissle1917
壳聚糖
‑
海藻酸钠微凝胶
(EcN@(CS
‑
SA)2)
，保护
EcN
免受胃肠液侵蚀顺利抵达肠道；
EcN@(CS
‑
SA)2微凝胶制剂通过调节肠道菌群丰度和肠道微生态结构，增多有益菌
、
减少致病菌的比例来实现抗肿瘤作用；
EcN@(CS
‑
SA)2微凝胶通过上调促凋亡蛋白
Bax
，下调抑凋亡蛋白
Bcl
‑2，从而激活
Caspase
‑3，诱导肿瘤细胞凋亡；通过协调
DCCs
与免疫细胞之间复杂的信息传递从而介导机体激活固有和适应性免疫应答，诱导
ICD
，激活
NLRP3
，驱动炎症因子
IL
‑1β
分泌，加快促炎微环境转变，有利于增强免疫细胞的浸润
。
附图说明
[0014]图1为
EcN、EcN@CS
‑
SA、EcN@(CS
‑
SA)2的扫描电镜显示图；
[0015]图2为
16SrDNA
检测结果，图中
A.
热图
.
每行代表物种，每列代表样本
/
分组，图中用蓝色到红色的渐变色反映丰度由低到高的变化，越趋近于蓝色，丰度越低，越趋近于红色，丰度越高；
B.
分组聚类分析
。
各组在种水平上的物种相对丰度分布图，所占比例越大表示丰度越高；
[0016]图3为不同时间点小鼠粪便中活的
EcN
的定量分析；
[0017]图4为
EcN
对细胞的杀伤作用，其中
A.CCK8
检测
EcN、EcN@(CS
‑
SA)2与
CT26
细胞共孵育5‑
6h
后的细胞的存活率；
B.Calcein
‑
AM/PI
流式检测共孵育后细胞的凋亡情况；
[0018]图5为微胶囊引发
CT26
凋亡，引发
ICD
，其中
A.
不同组与细胞共孵育后凋亡相关蛋白：
Caspase
‑
3、Bax、Bcl
‑2的表达；
B.ATP
胞外
、
胞内释放情况；
C.
免疫荧光
HMGB1
蛋白表达情况；
D.
免疫荧光
CRT本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种大肠杆菌
Nissle1917
微凝胶制剂，其特征在于：所述微凝胶内主要成分为大肠杆菌
Nissle1917
，凝胶层成分为壳聚糖和海藻酸钠
。2.
根据权利要求1所述的一种大肠杆菌
Nissle1917
微凝胶制剂，其特征在于：所述壳聚糖的浓度为
125
μ
g/mL。3.
根据权利要求1所述的一种大肠杆菌
Nissle1917
微凝胶制剂，其特征在于：所述海藻酸钠的浓度为
5mg/mL。4.
根据权利要求1所述的一种大肠杆菌
Nissle1917
微凝胶制剂，其特征在于：所述凝胶...

【专利技术属性】
技术研发人员：牛莉莉，郭慧淑，
申请(专利权)人：大连市慧恩生物科技开发有限公司，
类型：发明
国别省市：