用于构建小鼠肝癌原位移植模型的试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种用于构建小鼠肝癌原位移植模型的试剂盒，其包括：

【技术实现步骤摘要】
用于构建小鼠肝癌原位移植模型的试剂盒


[0001]本专利技术属于临床医学领域，具体涉及一种用于构建小鼠肝癌原位移植模型的试剂盒及其应用
、
以及所构建小鼠肝癌原位移植模型在中的用途
。

技术介绍

[0002]肝癌是严重威胁人类生命健康的主要恶性肿瘤之一，肝癌的研究始终是医学研究领域热点
。
小鼠肝癌模型为研究肝癌的发生
、
发展
、
治疗等基础及临床研究提供了有效的途径
。
目前肝癌小鼠模型主要有皮下肝癌模型，小鼠原位模型等
。
然而，小鼠肝癌原位模型是目前研究肝癌生长
、
侵袭和转移机制不可或缺的主要工具之一
。
肝癌原位模型不仅维持了原有肿瘤特征，而且保持肝脏原有血供，准确解剖位置，为研究肝癌生物学性状及实验干预提供了精确的动物模型基础
。
原位小鼠模型分为致癌物诱发性
、
移植性
、
基因编辑性小鼠等肝癌模型
。
然而，致癌物诱发性小鼠模型存在化学毒性，难以把控计量及周期较长等缺点；基因编辑性小鼠成本较高，技术实现难，在实验中较少采用
。
肝原位移植模型建模周期较短，成功率较高，现广泛采用
。
但，肝癌原位移植模型由于实施难度大，时间长，动物需麻醉
、
苏醒，操作繁琐
。
对术者
、
实验环境
、
人员技术要求较高，仅为少数实验室采用
。
目前广泛采用的肝癌原位移植模型的瘤体一般为人源性肝癌手术标本
、
鼠源性标本移植
。
以鼠源性肿瘤样本应用为主
。
但是，原位移植模型存在瘤体固定难，手术失血多，时间长等问题
。
[0003]已经有不少报道改进小鼠肝癌原位移植模型构建方法，例如专利文献
CN112262815A
公开了一种小鼠原位移植性肝癌模型的制备方法，小鼠麻醉后上腹正中切口入腹，无损伤止血钳行第一肝门阻断，于肝左叶以
30
1/2
号弯针头注入肝癌细胞
0.05ml
，电凝笔凝固针眼，无活动性出血后松解肝门阻断钳，关腹
。
该方法克服了由于血流导致的肿瘤细胞流出
、
不局限种植
、
成瘤率低等缺陷，并减少了针眼出血过多导致的失血性休克死亡和肿瘤的腹腔种植
。CN113875689A
公开了一种裸小鼠肝癌原位移植模型的建立方法，将皮下移植瘤模型制备好的实体瘤切成大小约为
2mm
×
2mm
×
1mm
的肿瘤组织块备用，然后将裸小鼠进行麻醉，取仰卧位，皮肤消毒，剑突下方约5～
10mm
沿腹中线向动物的右侧横向开腹，开口长度约为
1cm
，暴露出肝脏，使用“夹心法”将肿瘤组织取出，其中“夹心法”是用手术线将肿瘤组织块直接缝在肝右叶内侧
:
先用带缝合线的缝合针穿过肿瘤组织，再从肝右叶内侧穿至外侧，然后打一个手术结，轻轻拉紧，剪断手术线
。
该方法具有实验过程出血少
、
对动物伤害小
、
操作时间短
、
难度低等优势
。
[0004]这些现有技术的方案中一般都有手术缝线固定
、
生物胶固定操作程序等
。
但是，由于术中手术缝线与肝脏颜色接近，缝合难度大，耗时长，需具有丰富经验术者；再者，肝被膜较薄，存在肝实质被缝线拉扯导致缝合失败等缺点
。
生物胶为有机物，固定瘤体法存在异体物质的干扰，其生物胶即在使用的过程中，要保持创面干燥，要尽量均匀
、
缓慢，否则易形成大的结块，容易与周围脏器粘连
、
术后解剖位置及肿瘤观察较为困难等缺点
。

技术实现思路

[0005]鉴于小鼠肝癌原位移植模型具有重要的临床研究价值，专利技术人为了克服现有技术存在的上述不足之处，通过多次试验，提供了一种构建小鼠肝癌原位移植模型的新方法，使得建模操作更为简便，减少了动物痛苦，成功率反而能显著提高，大幅度节约科研成本
。
具体地，本专利技术包括如下技术方案
。
[0006]一种用于构建小鼠肝癌原位移植模型的试剂盒，其特征在于，包括：
H22
细胞株；生化试剂，包括
1640
培养基
、FBS(
胎牛血清
)、P/S(
青霉素
/
链霉素混合溶液，即
P/S
双抗
)、PBS(
平衡盐溶液
PBS
，磷酸盐平衡生理盐水
)、D
‑
Luciferin potassium salt(D
‑
荧光素钾盐
)
例如
XenoLight D
‑
Luciferin potassium Salt(PerkinElmer)、
基质胶；实验器材，包括细胞培养瓶
、
离心管；手术器械，包括手术剪
、
缝合针带线
、“O”型环
。
[0007]优选地，上述
H22
细胞株是
H22
‑
LUC
细胞
(H22
‑
luc
，小鼠肝癌细胞
‑
荧光素酶标记
)。
[0008]在一种实施方式中，上述
H22
细胞株的培养及使用条件可以为：
H22
‑
luc
细胞加入完全培养基
(1640
培养基
89
％
、FBS10
％
、P/S1
％
)
中重悬，置于
37℃、5
％
CO2浓度的二氧化碳培养箱中培养
24h
，待培养细胞在对数生长期时
(
培养基颜色由红色转为深黄色时
)
，细胞密度达到
80
‑
100
％，进行
1:2
或
1:3
传代培养，收集培养液，离心，弃去上清，
PBS
洗涤2次后用
PBS
重悬，调整细胞浓度为大约2×
107/mL
，每只小鼠注射
0.1mL。
[0009]上述小鼠可以选用
BALB/c
小鼠
。
[0010]上述“O”型环是内径大约为
5mm
的塑料“O”型环，用于覆盖在埋入小鼠肝脏的切口上方，供基质胶加入直至完全凝固，限定加入本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种用于构建小鼠肝癌原位移植模型的试剂盒，其特征在于，包括：
H22
细胞株；生化试剂，包括
1640
培养基
、FBS、P/S、PBS、D
‑
Luciferin potassium salt、
基质胶；实验器材，包括细胞培养瓶
、
离心管；手术器械，包括手术剪
、
缝合针带线
、“O”型环
。2.
如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述
H22
细胞株是
H22
‑
luc
细胞
。3.
如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述小鼠是
BALB/c
小鼠
。4.
如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述“O”型环内径为
5mm
的塑料“O”型环
。5.
如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述手术器械还包括眼科弯镊
、
直镊
、
持针钳
、
棉签
。6.
如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述缝合针带线的规格是缝合针带线
(0#5)。7.
如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，还包括：碘伏
、
庆大霉素
。8.
如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，不包括液体生物胶
。9.
如权利要求1‑8中任一项所述试剂盒在构建小鼠肝癌原位移植模型中的用途
。10.
如权利要求9所述的用途，其特征在于，通过包括下述步骤的方法实施：
1)
培养
H22
细胞，将
H22
‑
luc
细胞加入完全培养基中重悬，所述完全培养...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭玮，王蓓丽，霍然，杨文静，刘瑜，丁琳，王楚瑜，潘柏申，
申请(专利权)人：复旦大学附属中山医院，
类型：发明
国别省市：