鉴定桃种质抗冻性的特异性引物及对桃种质抗冻性进行鉴定的方法技术

本发明专利技术属于分子生物学技术领域，尤其涉及鉴定桃种质抗冻性的特异性引物及对桃种质抗冻性进行鉴定的方法

【技术实现步骤摘要】
鉴定桃种质抗冻性的特异性引物及对桃种质抗冻性进行鉴定的方法


[0001]本专利技术属于分子生物学
，尤其涉及鉴定桃种质抗冻性的特异性引物及对桃种质抗冻性进行鉴定的方法
。

技术介绍

[0002]分子标记辅助育种是利用分子标记与决定目标性状基因紧密连锁的特点，通过检测分子标记，即可检测到目的基因的存在，达到选择目标性状的目的，具有快速
、
准确
、
不受环境条件干扰的优点
。
可作为鉴别亲本亲缘关系，回交育种中数量性状和隐性性状的转移
、
杂种后代的选择
、
杂种优势的预测及品种纯度鉴定等各个育种环节的辅助手段
。
[0003]分子标记辅助选择是指通过分析与目标基因紧密连锁的分子标记的基因型，借助分子标记对目标性状基因型进行选择
。
分子标记辅助育种缩短了育种年限，加快了育种进程，提高了育种效率，克服了很多常规育种方法中的困难
。
伴随着一些新分子标记的开发，包括抗病
、
抗虫
、
抗旱
、
高产
、
品质改良等各个方面
。
[0004]现有技术中对桃种质抗性进行鉴定的方法大多使用生理处理方法，标准不一，操作步骤繁琐，且准确率低
。
利用分子手段对桃种质抗性进行鉴定的技术还未见报道
。

技术实现思路

[0005]为解决上述现有技术中存在的问题，本专利技术提供了鉴定桃种质抗冻性的特异性引物及对桃种质抗冻性进行鉴定的方法
。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0007]本专利技术的目的之一是提供鉴定桃种质抗冻性的特异性引物，包括引物
FW
和引物
RV
，所述引物
FW
的核苷酸序列为
5'TAAAACTTGAACACTAACCATGTTCT 3'
，所述引物
RV
的核苷酸序列为
5'GTTTAGACTGTTTGTGGCATGAGTA 3'。
[0008]本专利技术还提供了试剂盒或
DNA
芯片，所述试剂盒或
DNA
芯片包含上述所述的引物
FW
和引物
RV。
[0009]所述试剂盒或
DNA
芯片可用于鉴定桃种质抗冻性
。
[0010]本专利技术还提供了一种对桃种质抗冻性进行鉴定的方法，所述方法的主要步骤包括：
[0011](1)
提取待检测样本的基因组
DNA
；
[0012](2)
以步骤
(1)
提取的基因组
DNA
为模板，利用本专利技术所述的特异性引物进行
PCR
扩增，得到扩增产物；
[0013](3)
对步骤
(2)
所得扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳的电测；
[0014](4)
对步骤
(3)
所得琼脂糖凝胶的结果进行分析，根据条带有无进行抗性判断
。
[0015]优选的，步骤
(2)
中所述
PCR
扩增体系包括：
[0016]桃
PCR
扩增体系，反应总体积
20
μ
L
；
[0017]桃
DNA
模板
(50
～
75ng/
μ
L)1.0
μ
L
；
[0018]2×
Ex Taq Mix(
含
Mg
2+
、dNTPs、loading buffer)10.0
μ
L
；
[0019]所述的引物
FW(10
μ
mol/L)1.0
μ
L、
引物
RV(10
μ
mol/L)1.0
μ
L
；
[0020]dd H2O 8.0
μ
L。
[0021]优选的，步骤
(2)
中所述
PCR
扩增程序为：反应程序为：
[0022]94℃
预变性
5min
；
[0023]94℃
变性
30s
；
[0024]56℃
退火
30s
；
[0025]72℃
延伸
30S,
共
35
个循环；
[0026]72℃
延伸
5min
；
[0027]4℃
降温冷却
。
[0028]优选的，步骤
(3)
中所述根据条带有无进行抗性判断具体为：
[0029](1)
有条带，无抗冻性；
[0030](2)
无条带，有抗冻性
。
[0031]专利技术人利用三代全基因组测序技术，完成肥城桃基因组组装，通过与抗性砧木
lovell
基因组比较，发现第8号染色体上存在一个
125kb
的片段倒位，其中一个倒位点，引起了抗性基因
Ppersica08G000108
的5’
UTR
断裂
。
根据抗性基因
Ppersica08G000108
，本专利技术自主设计引物
FW:5'TAAAACTTGAACACTAACCATGTTCT 3'
和
RV:5'GTTTAGACTGTTTGTGGCATGAGTA 3'
，并建立了一种对桃种质抗冻性进行鉴定的方法
。
[0032]Ppersica08G000108
基因注释：广谱胁迫蛋白
,
普遍存在于细菌
、
古细菌
、
真菌
、
原生动物及植物中，赋予生物耐盐碱
、
耐极端温度
、
耐抗生素
、
耐营养缺失等功能
。
[0033]有益效果
[0034]本专利技术公开了鉴定桃种质抗冻性的特异性引物及对桃种质抗冻性进行鉴定的方法，本专利技术与现有技术相比具有以下有益效果：
[0035]1.
本专利技术所述特异性引物与桃种质抗冻性正相关性强，准确率高达
100
％，可用于鉴定桃种质抗冻性，便于辅助后续的分子育种工作，对农业生产和品种选育过程中的桃种质抗冻性鉴定具有重要的应用价值
。
[0036]2.
本专利技术所述鉴定方法具有操作简单
、
成本低
、
用于抗性鉴定效率本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
鉴定桃种质抗冻性的特异性引物，其特征在于：包括引物
FW
和引物
RV
，所述引物
FW
的核苷酸序列为
5'TAAAACTTGAACACTAACCATGTTCT3'
，所述引物
RV
的核苷酸序列为
5'GTTTAGACTGTTTGTGGCATGAGTA3'。2.
一种试剂盒或
DNA
芯片，其特征在于：包括权利要求1所述的引物
FW
和引物
RV。3.
权利要求2所述试剂盒或
DNA
芯片在鉴定桃种质抗冻性的应用
。4.
一种对桃种质抗冻性进行鉴定的方法，其特征在于，所述方法的主要步骤包括：（1）提取待检测样本的基因组
DNA
；（2）以步骤（1）提取的基因组
DNA
为模板，利用权利要求1所述的特异性引物进行
PCR
扩增，得到扩增产物；（3）对步骤（2）所得扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳的电测；（4）对步骤（3）所得琼脂糖凝胶的结果进行分析，根据条带有无进行抗冻性判断
。5.
根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤（2）中所述
PCR
扩增体系包括：桃
PCR
扩增体系，反应总体积
20
μ
L
；桃
DNA
模板

【专利技术属性】
技术研发人员：李淼，张安宁，李桂祥，宫庆涛，高晓兰，董晓民，
申请(专利权)人：山东省果树研究所，
类型：发明
国别省市：