一种赤潮中肋骨条藻的无菌处理方法技术

本发明专利技术公开了一种赤潮中肋骨条藻的无菌处理方法，配置母液；称取氨苄青霉素

【技术实现步骤摘要】
一种赤潮中肋骨条藻的无菌处理方法


[0001]本专利技术涉及海洋微藻
，具体为一种赤潮中肋骨条藻的无菌处理方法
。

技术介绍

[0002]中肋骨条藻
(Scientific name:Skeletonema costatum)
隶属硅藻门
、
中心硅藻纲
、
圆筛藻目
、
骨条藻科
。
温带
、
热带海洋硅藻类，从北极到赤道
、
从外海高盐度到沿海低盐度水团均有分布，我国各海区均有出现
。
藻体为单个细胞
。
细胞体透镜形或圆柱形，壳面圆而鼓起，着生一圈细长的刺，与相临细胞的对应刺组成长链
。
[0003]由于中肋骨条藻具有广温广盐的生长特性以及较快的繁殖能力，在藻华爆发时经常能够在竞争中占据优势生态位，从而成为藻华爆发的优势藻株之一
。
在爆发过程中海水颜色呈黄绿色或墨绿色并伴有明显的腥味，而且过量增殖的中肋骨条藻不仅会严重污染当地海洋环境，而且影响海洋生物及近海养殖
。
[0004]海洋环境中，中肋骨条藻能够利用
CO2和
HCO3‑
作为无机碳源，其大量繁殖时会引起海水
CO2浓度下降，海水
pH
显著升高，使海洋无机碳存在形式发生改变，低浓度的
CO2环境限制其它浮游植物以
CO2和
HCO3‑
为碳源进行光合作用，进而抑制它们的生长，从而严重破坏生态环境
。
[0005]同时，中肋骨条藻的过度爆发，也会堵塞鱼类的呼吸器官，导致多数鱼类因鱼鳃损害而死亡，对沿海渔业造成了数以亿计的经济损失
。
[0006]在经济海藻养殖区，中肋骨条藻也常与经济藻类海带
、
紫菜等争夺营养，在营养丰富环境下，中肋骨条藻快速繁殖，从而导致赤潮爆发，其大量水华造成经济藻类变色，甚至腐烂而失去食用和商业价值
。
[0007]微生物作为藻华防治新方向，在不改变原有生态结构的基础上，延缓赤潮藻的生长速度，甚至可以在初期就能预防藻华的进一步爆发
。
微生物对于藻体的影响有两种，直接破坏藻体结构或产生除藻活性物质来抑制或者破坏细胞结构来杀死藻细胞
。
无菌处理后的藻液能够更好的的筛选出抑藻微生物及研究相应机理，为后续赤潮处理提供依据
。
[0008]中肋骨条藻在文献中研究关键词菌藻共生也有较高的研究
。
菌藻共生已被实际应用于去除废水中的营养盐及重金属
。
研究发现，藻菌共生系统中的藻类能够明显去除富营养化水体中的氮
、
磷和有机物，降低生物需氧量和化学需氧量等
。
当营养物质被消耗后，缺乏营养物质的中肋骨条藻也会消亡，不会污染环境
。
而菌藻共生研究需要藻体在无菌环境下，从而排除其他微生物造成的影响
。
[0009]对中肋骨条藻进行无菌处理的主要目的是尽可能的消除中肋骨条藻藻液中的微生物，使中肋骨条藻藻液达到相对无菌的状态
。
无菌处理可以确保中肋骨条藻的纯净性，避免中肋骨条藻藻液中其他微生物对研究造成的影响，保证实验结果的可靠性和准确性，也有利于研究单种或多种细菌对于中肋骨条藻的影响，从而发现抑藻细菌，进而作为赤潮爆发的防治手段
。
[0010]现有的方法主要是：
[0011]1、
通过单种抗生素对藻体进行无菌处理，主要通过五种抗生素对中肋骨条藻进行处理，如下：青霉素
(Amipicillin)、
硫酸庆大霉素
(Gentamycin sulfate)、
硫酸新霉素
(Nomycin sulfate)、
氯霉素
(Chcoramphencol)、
硫酸卡那霉素
(Kanamycin sulfate)。
该方法的缺点是需要抗生素浓度较高，对于环境影响较大，同时高浓度的抗生素会对藻体也会造成一定的损伤
。
而在低浓度条件下处理，无菌处理效果不理想
。
[0012]2、
通过双抗生素多粘菌素
B
和硫酸链霉素共同处理时，能够有效的抑制细菌
。
缺点是多粘菌素
B
价格较高，不利于推广
。
[0013]3、
确定经过处理的藻液是否达到相对无菌，通常是仅通过平板菌落计数法来确定
。
缺点为不能确定是否由于实验操作问题，例如涂布棒过热导致细菌死亡，从而菌落不生长；为此提供了一种中肋骨条藻的无菌处理方法
。

技术实现思路

[0014]本专利技术的目的是针对现有技术的缺陷，提供一种中肋骨条藻的无菌处理方法，以解决
技术介绍
中的问题
。
[0015]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种中肋骨条藻的无菌处理方法，具体步骤如下：
[0016]S1
：配置母液；称取氨苄青霉素
、
硫酸链霉素
、
硫酸卡那霉素，添加
121℃
灭菌的无菌水混匀溶解，获得三种抗生素溶液；将所得抗生素溶液在超净台使用过滤头进行过滤；
[0017]S2
：制备待除菌的中肋骨条藻培养液，并在培养过程中使用
121℃
灭菌并添加
f/2
培养基处理的海水进行培养，将抗生素添加至藻液中全程使用超净台进行操作；
[0018]S3
：将经过过滤后的抗生素溶液加入至待除菌的中肋骨条藻培养液中，在培养液中，然后进行一段时间的无菌化培养；
[0019]S4
：在中肋骨条藻藻液达到相对无菌后，定期进行中肋骨条藻培养液的扩培，扩培时追加同等终浓度的抗生素溶液；
[0020]S5
：在中肋骨条藻藻液达到相对无菌后，定期进行中肋骨条藻培养液的扩培，扩培时使用的海水为添加
f/2
培养基的
121℃
灭菌海水；
[0021]S6
：每7天进行一次藻培养液的扩培，防止藻体在培养过程中达到衰亡期，使大多数藻体细胞保持在较高的活性下，并取不再继续添加抗生素的中肋骨条藻培养物培养7天，观察加入
2216E
培养液的藻液是否导致
2216E
培养液产生浑浊，取
1mL
藻培养液进行
2216E
琼脂培养基平板涂板，观察培养皿菌落的生长情况；
[0022]S7
：每次添加灭菌海水时，都需取样观察，若溶液变浑浊或平板出现菌落则需再次添加抗生素进行处理
。
[0023]作为本专利技术的一种优选技术方案，所述
S1
中过滤时，通过
0.22
μ
m...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种赤潮中肋骨条藻的无菌处理方法，其特征在于：具体步骤如下：
S1
：配置母液；称取氨苄青霉素
、
硫酸链霉素
、
硫酸卡那霉素，添加
121℃
灭菌的无菌水混匀溶解，获得三种抗生素溶液；将所得抗生素溶液在超净台使用过
0.22
μ
m
滤头进行过滤；
S2
：制备待除菌的中肋骨条藻培养液，并在培养过程中使用
121℃
灭菌并添加
f/2
培养基处理的海水进行培养，将抗生素添加至藻液中，全程使用超净台进行操作；
S3
：将经过过滤后的抗生素溶液加入至待除菌的中肋骨条藻培养液中，进行一段时间的无菌化培养；
S4
：在无菌化培养过程中，定期进行中肋骨条藻培养液的扩大培养，扩大培养时追加同等终浓度的抗生素溶液；
S5
：在无菌化培养过程中，定期进行中肋骨条藻培养液的扩大培养，扩大培养时使用的海水为添加
f/2
培养基的
121℃
灭菌海水；
S6
：每7天进行一次藻培养液的扩培，防止藻体在培养过程中达到衰亡期，使大多数藻体细胞保持在较高的活性下，并取不再继续添加抗生素的中肋骨条藻培养物培养7天，观察加入
2216E
培养液的藻液是否导致
2216E
培养液产生浑浊，取
1mL
藻培养液进行
2216E
琼脂培养基平板涂板，观察培养皿菌落的生长情况；
...

【专利技术属性】
技术研发人员：李慧芳，萧荣达，周幸，徐军田，张迪，
申请(专利权)人：江苏海洋大学，
类型：发明
国别省市：