CD86制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，特别涉及

【技术实现步骤摘要】
CD86抗体标记皮损组织中TM的免疫组化试剂盒及其检测方法


[0001]本专利技术属于生物
，特别涉及
CD86
抗体标记皮损组织中
TM
的免疫组化试剂盒及其检测方法
。

技术介绍

[0002]马尔尼菲篮状菌
(Talaromyces marneffei,TM),
旧称马尔尼菲青霉菌，为机会性感染的深部真菌，
TM
通过雾化吸入定植于肺部，诱导肺部单核巨噬细胞激活进行识别
、
吞噬
、
杀伤，通过独特的特殊机制能躲避巨噬细胞的杀伤和清除
。
当巨噬细胞不能及时吞噬和杀灭入侵的
TM
时，
TM
在体内迅速繁殖，通过肺部的网状系统侵犯机体其他脏器，引起全身散播性感染甚至死亡
。
马尔尼菲篮状菌病主要分布在东南亚地区及中国南部，常见于获得性免疫缺陷患者
(HIDS)
及免疫功能低下的患者，也可见于流行地区旅居史的健康人
。
近年来，非
HIDS
的免疫功能低下或免疫功能不全感染马尔尼菲篮状菌病的病例报道逐年递增
。
[0003]然而，马尔尼菲篮状菌病若能早诊断
、
早治疗是完全可以痊愈的，目前确诊的金标准仍是真菌培养，治疗上可应用两性霉素
B
及唑类药物行系统性治疗
。
马尔尼菲篮状菌病早期诊断困难，缺乏简易
、
可行的检测方式，造成误诊
、
漏诊从而延误治疗，导致患者病情反复
、
迁延不愈
。
因此，寻求有效的马尔尼菲篮状菌感染早期诊断方法尤为重要
。
[0004]CD86
膜蛋白
(B7
‑
2)
属于免疫蛋白
B7
家族，是主要产生于抗原提呈细胞的共刺激分子，为
T
细胞表面
CD28/CTLA
‑4的配体，对
CD4
+
T
细胞的活化起着尤为重要作用
。
研究发现
TM
具有捕获巨噬细胞表达的
CD86
蛋白的能力，在免疫组化的研究中发现感染
TM
的病人皮损组织
、
感染
TM
的小鼠肺组织与肝组织及体外细胞共培养模型均发现
TM
菌体可以被
CD86
抗体标记，显微镜下特征性酵母样
TM
菌体的形态清晰可见
。
因此，
CD86
抗体标记石蜡包埋的病损组织中
TM
可以作为马尔尼菲篮状菌早期诊断的新手段
。
[0005]目前临床上马尔尼菲篮状菌的诊断方法以下三种为主：
1)
真菌培养：该法为真菌诊断的金标准，但取样容易出现样本污染，组织中的菌载量较低且
TM
属于胞内真菌，培养的阳性率低，而且组织真菌培养耗时长
(14
天左右
)
，容易延误病情；
2)
宏基因组学
(NGS)
：该法准确率高，但需要组织量大，且需要多次取样，价格昂贵患者负担不起；
3)PAS
染色：该法耗时短，但敏感度低，显微镜观察难以找寻真菌踪迹，准确率低
。
现有诊断技术均存在一定的局限性，在马尔尼菲篮状菌病的临床诊断领域迫切需要一种耗时短
、
经济实惠
、
准确率高的诊断方法，目前尚未有利用免疫组化技术标记
TM
菌体来辅助诊断
TM
感染的相关应用
。
[0006]本专利技术设计了
AEC
体系的
CD86
抗体标记皮损组织中
TM
的免疫组化检测试剂盒
。CD86
蛋白是抗原提呈细胞表达的膜蛋白，通常可以在皮肤组织中的树突状细胞中检测到，在免疫组化检测中可以作为质控的内对照
。
本试剂盒的结果满足临床上组织形态学观察的需求，操作简单便捷
、
经济适用，稳定性好，适合在临床和科研工作中应用和推广
。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的是提供一种
CD86
抗体标记皮损组织中
TM
的免疫组化试剂盒及其检
测方法
。
具有耗时短
、
经济实惠
、
准确率高的石蜡包埋的病理组织免疫组化检测试剂盒，填补了病理组织行
PAS
染色时
TM
阳性率低以及难以辨认
TM
病原菌形态的缺陷，有助于马尔尼菲篮状菌病的临床早期诊断
。
[0008]为解决上述问题，本专利技术所采用的技术方案是：
[0009]CD86
抗体标记感染组织中
TM
的免疫组化试剂盒，包括
CD86
抗体；抗原修复液；3％
H2O2；血清封闭剂；即用型放大液及
HRP
标记二抗；
AEC
显色剂；苏木素；水溶性封片剂；中性树脂
。
[0010]进一步说明，所述的
CD86
抗体为
CD86
单克隆抗体或
CD86
多克隆抗体
。
[0011]进一步说明，所述抗体修复液为
PH
＝8的碱性缓冲液中杉金桥
ZLI
‑
9066
或
PH
＝9的碱性中杉金桥缓冲液
ZLI
‑
9069
；所述
AEC
显色剂中杉金桥
ZLI
‑
9036
包括蒸馏水
、
缓冲液
、
显色液及5％
H2O2，按照蒸馏水：缓冲液：显色液：5％
H2O2＝
17:1:1:1
进行配制
。
[0012]进一步说明，所述水溶性封片剂为默克
F4680
或迈新
0038
；所述中性树脂为索莱宝
G8590
或中杉金桥
ZLI
‑
9555。
[0013]本专利技术还提供免疫组化试剂盒的应用，是将
CD86
抗体标记病理组织
TM
菌体形态的结果用于辅助感染
TM
的早期临床诊断
。
[0014]本专利技术还提供
CD86
抗体标记皮损组织中
TM
的免疫组化试剂盒的检测方法，包括如下步骤：
[0015](1)
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.CD86
抗体标记皮损组织中
TM
的免疫组化试剂盒，其特征在于，包括
CD86
抗体；抗原修复液；3％
H2O2；血清封闭剂；即用型放大液及
HRP
标记二抗；
AEC
显色剂；苏木素；水溶性封片剂；中性树脂
。2.
据权利要求1所述的
CD86
抗体标记皮损组织中
TM
的免疫组化试剂盒，其特征在于，所述的
CD86
抗体为
CD86
单克隆抗体或
CD86
多克隆抗体
。3.
据权利要求1所述的
CD86
抗体标记皮损组织中
TM
的免疫组化试剂盒，其特征在于，所述抗体修复液为
PH
＝8的碱性缓冲液中杉金桥
ZLI
‑
9066
或
PH
＝9的碱性缓冲液中杉金桥
ZLI
‑
9069
；所述血清封闭剂为山羊血清封闭剂索莱宝
SL038
或中杉金桥
ZLI
‑
9056
；所述
AEC
显色剂中杉金桥
ZLI
‑
9036
包括蒸馏水
、
缓冲液
、
显色液及5％
H2O2，按照蒸馏水：缓冲液：显色液：5％
H2O2＝
17:1:1:1
进行配制
。4.
根据权利要求1所述的
CD86
抗体标记皮损组织中
TM
的免疫组化试剂盒，其特征在于，所述水溶性封片剂为默克
F4680
或迈新
0038
；所述中性树脂为索莱宝
G8590
或中杉金桥
ZLI
‑
9555。5.
根据权利要求1所述的免疫组化试剂盒的应用，其特征在于，是将
CD86
抗体标记皮损组织
TM
菌体形态的结果用于辅助
TM
感染的早期临床诊断
。6.
根据权利要求1所述的
CD86
抗体标记皮损组织中
TM
的免疫组化试剂盒的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)
采用免疫组化技术对石蜡包埋的皮肤感染组织的病理切片进行染色，检测染色浓度和染色范围；
(2)
根据
TM
特有的菌体形态...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘栋华，方锦玲，陈慧苑，唐尚荣，
申请(专利权)人：广西医科大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：