一种调控拟南芥器官大小的基因及其应用制造技术

本发明专利技术请求保护一种调控拟南芥器官大小的基因及其应用，属于基因工程领域，具体的说是一种

【技术实现步骤摘要】
一种调控拟南芥器官大小的基因及其应用


[0001]本专利技术属于基因工程领域，具体的说是一种
CCCH
锌指蛋白基因
C3H15
及其应用
。

技术介绍

[0002]植物器官的大小是影响植物生物量的重要因素，其主要受环境信号及遗传因子的双重调节
。
拟南芥具有基因组小，易于转化，生长快速等特点，是研究植物器官发育的理想模式植物，但目前为止，报道的影响植物器官大小的基因很少，因此，深入挖掘与解析拟南芥中调控器官大小的相关基因不仅有助于加深对植物形态建成的调控机理的理解，同时也可为其他重要作物在提高粮食产量，品质等方面提供重要的应用指导与借鉴意义
。
[0003]拟南芥
CCCH
锌指蛋白基因家族包含
68
个成员，根据其结构域组成数目和类型分为
11
个亚家族，参与多种生长发育及胁迫过程
。
其中，拟南芥
AtTZF4、AtTZF6、AtTZF3、AtTZF9
分别在种子萌发，心期胚珠形成，
ABA
信号响应盐胁迫及抗病免疫途径中发挥重要作用
。
我们通过生物信息学在拟南芥中鉴定了一个
CCCH
基因
AtC3H15
，该基因在植株各个组织中均有表达（图2），意味着其可能参与调控植株的器官发育过程
。
[0004]器官大小是影响生物量的重要因素，而且与作物产量息息相关，对其调控机制的研究意义重大
。
以往研究报道的关键调控基因十分有限，因此需要挖掘更多参与调控器官大小发育的基因，为增加植物生物量提供更多选择
。

技术实现思路

[0005]本专利技术目的在于提供一种
CCCH
基因
AtC3H15
及其应用
。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采用技术方案为： 一种
CCCH
基因
AtC3H15
的碱基序列如
SEQ ID No .1
中所示
。
[0007]CCCH
基因
AtC3H15
的编码蛋白的氨基酸序列如
SEQ ID No .2
中所示
。
[0008]一种
CCCH
基因
AtC3H15
的应用，所述
AtC3H15
基因作为调控植株器官大小发育，进而为增加植株生物量提供更多选择的调控基因的应用
。
[0009]一种植物表达载体，载体带有所述
CCCH
基因
SEQ ID No .1
核苷酸序列
。
[0010]所述植物为拟南芥及其它作物
。
[0011]一种植物表达载体的应用，所述植物表达载体在增加植株生物量中的应用
。
[0012]本专利技术所具有的优点： 1.
本专利技术从拟南芥中获得能够在植株各个组织广谱表达的
AtC3H15
基因； 2.
本专利技术通过获得的具有广谱表达特性的
AtC3H15
基因，遗传转化产生
AtC3H15
基因的过表达植株，并鉴定
AtC3H15
及其同源基因
AtC3H14
的双突变体
。AtC3H15
过表达转基因植株相对于对照植株各个器官变小，
c3h14c3h15
双突变体植株变大，具有较大的研究价值
。
附图说明
[0013]图1为本专利技术实施例提供的拟南芥
C3H15
基因及其在水稻，高粱，玉米和小麦中的
同源基因氨基酸序列比对结果，以上四种作物的氨基酸序列如
SEQ ID No .3
‑6中所示
。
比对结果显示这个基因在几种作物中都含有保守的两个串联的
C8C5C3H
结构域
。
[0014]图2为本专利技术实施例提供的
qRT
‑
PCR 分析拟南芥
AtC3H15
基因的组织表达模式图；拟南芥
Actin2 基因用作为内参，结果显示这个基因在拟南芥各个组织中均有表达，但在茎秆中表达相对较高
。
[0015]图3为本专利技术实施例提供的拟南芥
AtC3H15
基因过表达构建示意图和
c3h14c3h15
双突变体的
T
‑
DNA
插入系
。
[0016]图4为本专利技术实施例提供的
qRT
‑
PCR 分析
AtC3H15
及其同源基因
AtC3H14
在
AtC3H15
过表达植株和
c3h14c3h15
双突变中的表达水平示意图
。
拟南芥
Actin2 基因用作内参
。
[0017]图5为本专利技术实施例提供的拟南芥
AtC3H15
转基因植株的表型分析图
。col
‑
0, 作为对照的野生型；
C3H15OE
过表达转基因株系；
c3h14c3h15
双突变体株系
。
具体实施方式
[0018]实验所涉及的药品均购自
Sigma 公司
、Fermentas 公司
、Thermo Fisher
公司
、
北京天根公司
。
具体实验操作依据
《
分子克隆
》
手册
。
[0019]实施例
1 拟南芥
CCCH
基因
AtC3H15
的分子克隆
1. 拟南芥
AtC3H15
基因的克隆取培养室生长
1.5
个月左右的拟南芥茎秆，利用
TRIZOL
法提取其总
RNA
，利用
RT
‑
PCR
技术扩增
AtC3H15
基因的全长
cDNA
，将其连入
pMD18
‑
T
中测序（参见
SEQ ID No .1
）
。
扩增条件为：
95℃ 5 min
预变性；
94℃ 30s, 55℃ 40s,72℃ 1min,35
个循环；
72℃ 8min 片段延伸
。
扩增引物为：
AtC3H15cDNAF: 5
’‑
ATGGAAAACAAAATCGCGC
‑3’
；
AtC3H15cDNAR: 5
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种
CCCH
基因
AtC3H15
，其特征在于：
AtC3H15
的碱基序列如
SEQ ID No .1
中所示
。2.
如权利要求1所述的
CCCH
基因
AtC3H15
的编码蛋白，其特征在于：
AtC3H15
的编码蛋白的氨基酸序列如
SEQ ID No .2
中所示
。3.
一种权利要求1所述的
CCCH
基因

【专利技术属性】
技术研发人员：孔英珍，唐贤丰，刘宇，周功克，柴国华，王丛鹏，孟杰，
申请(专利权)人：青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：