一种检测黄曲霉毒素制造技术

本发明专利技术公开了一种检测黄曲霉毒素

【技术实现步骤摘要】
一种检测黄曲霉毒素B1(AFB1)的可折叠适配体传感器及其制备方法


[0001]本专利技术涉及生物传感器
，具体涉及一种检测
AFB1
的可折叠适配体传感器及其制备方法
。

技术介绍

[0002]黄曲霉毒素
B1
（
AFB1
）在黄曲霉毒素中表现出最强的致突变和致癌活性
。
因此，
AFB1
被国际癌症研究机构确认为人类1类致癌物
。
在湿热条件下，
AFB1
极易污染花生
、
玉米
、
大豆
、
小麦
、
坚果等农产品，极少量可对人畜造成严重危害
。
人们误食含有
AFB1
的食物，也会对身体造成很大的伤害，如运动障碍
、
排泄停止
、
肝炎
、
黄疸等
。
在严重的情况下，它会导致肝癌
、
骨癌
、
癌症
、
乳腺癌，甚至死亡
。
鉴于
AFB1
的巨大危害，世界各国都制定了食品
、
饲料和草药中黄曲霉毒素含量的限量标准，以确保公众健康和安全
。
这些极其严格的限量要求使得
AFB1
的检测成为研究热点
。
所以开发一种便捷
、
高效
、
快速和实用的检测<br/>AFB1
方法，对维护食品安全
、
提高食品质量具有重要的理论和实际意义
。
[0003]目前，国内外报道的
AFB1
的测定方法主要有薄层色谱法（
TLC
）
、
高效液相色谱法（
HPLC
）等
。
尽管这些方法灵敏度高，重现性好，但由于样品处理复杂，检测仪器昂贵，检测成本高，操作专业，不适合快速有效地检测
AFB1。
随着社会技术的发展，已经发现了一些有前途的检测
AFB1
的方法，如酶联免疫吸附试验（
ELISA
）
、
表面等离子体共振（
SPR
）
、
表面增强拉曼散射（
SERS
）
、
荧光
、
比色法测定和电化学方法，其中电化学方法操作简单，灵敏度高，稳定性强，对于小分子物质的检测具有积极的响应；选用适配体作为识别分子，在保证灵敏度的前提下进一步提高了检测的专一性；并且电化学适配体传感器具有待测的样品不用经过预先处理
、
分析速度快
、
操作系统检单
、
准确度高
、
专一性强
、
成本低等优点
。
[0004]本专利技术的目的在于提供一种能克服上述问题以及易制备
、
操作简单
、
灵敏度高
、
抗干扰性强
、
重现性
、
选择性及稳定性好的适配体传感器，构建的电化学生物传感器在
AFB1
存在的情况下，与适配体结合使适配体发生折叠，导致修饰有
MB
的一端更靠近电极，使得电信号增大，通过对比添加
AFB1
前后电信号的变化达到检测的目的
。

技术实现思路

[0005]针对现有技术中的上述问题，本专利技术提供一种检测
AFB1
的可折叠适配体传感器及其制备方法，基于适配体发生折叠前后在不同电位下产生可区分的
DPV
峰来构建适配体传感器，以提供一种易制备
、
操作简单
、
灵敏度高
、
抗干扰性强
、
重现性
、
选择性及稳定性好的电化学适配体传感器
。
[0006]本专利技术采用的技术方案如下：一种检测
AFB1
的适配体传感器，包含
AFB1
适配体和玻碳电极，所述
AFB1
适配体采用亚甲基蓝
、
巯基进行标记形成适配体功能化探针，所述玻碳电极的表面引入二硫化钼
‑
多壁碳纳米管，标记后的可折叠适配体功能化探针通过金硫键固定于电极表面
。
[0007]检测
AFB1
的适配体传感器的制备方法，包括如下步骤：
(1) 巯基修饰适配体的还原：将
15
µ
M
的巯基修饰的
AFB1
适配体与
1M
的
TCEP
混合，室温下还原
30min
，将带有二硫键的巯基还原；
(2) 玻碳电极表面处理：采用铝粉抛光玻碳电极后用超纯水清洗，然后分别在超纯水和无水乙醇中进行超声处理，再用氮气干燥，将处理过的电极放置在
pH 7
的
KCl、[Fe(CN)6]3‑
/4
‑
混合溶液中，使用循环伏安法测试电极的预处理效果，扫描范围：
‑
0.2
‑
0.7V
；扫描速度：
100mV/s
，预处理
GCE
的
CV
曲线的峰值电位差低于
100mV
，进行下一步处理，将7μ
L
的
MoS2@MWCNTs
滴加在电极表面并在
27℃
下放置
2h
；
(3) 通过金硫键将适配体组装在电极表面：将6µ
L
的
AuNPs
滴加到
MoS2@MWCNTs/GCE
表面，并在
27℃
下放置
2h
，然后滴加6µ
L
适配体，并于
27
～
30℃
下孵育2～
4h
，然后在电极表面滴加6μ
L
的
BSA
以封闭非特异性结合位点，即可获得适配体传感器
。
[0008]更优地，所述巯基修饰适配体的还原中，适配体与
TCEP
的体积比为：
40:1。
[0009]更优地，所述纳米金分散液的制备过程为：将
1mL
浓度为1％的氯金酸和
99mL
的超纯水混合后搅拌，放在加热炉上加热至沸腾，保持搅拌状态下加入
2.5mL
浓度为1％的柠檬酸钠，继续加热
10min
‑
15min
，直至溶液由灰色变为稳定的酒红色，自然搅拌冷却至室温后离心洗涤，最后恢复至原体积，即可得到纳米金分散液...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种检测黄曲霉毒素
B1(AFB1)
的可折叠适配体传感器，其特征在于：包含
AFB1
适配体以及玻碳电极，所述
AFB1
适配体采用亚甲基蓝
、
巯基进行标记形成适配体功能化探针，所述玻碳电极的表面引入二硫化钼
‑
多壁碳纳米管与纳米金，标记后的可折叠适配体功能化探针通过金硫键固定于纳米金上
。2.
一种如权利要求1所述的检测黄曲霉毒素
B1(AFB1)
的可折叠适配体传感器的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)
巯基修饰适配体的还原：将
15
µ
M
的巯基修饰的
AFB1
适配体与
1M
的
TCEP
混合，室温下还原
30min
，将带有二硫键的巯基还原；
(2)
玻碳电极表面处理：采用铝粉抛光玻碳电极后用超纯水清洗，然后分别在超纯水和无水乙醇中进行超声处理，再用氮气干燥，将处理过的电极放置在
pH 7
的
KCl、[Fe(CN)6]3‑
/4
‑
混合溶液中，使用循环伏安法测试电极的预处理效果，扫描范围：
‑
0.2
‑
0.7V
；扫描速度：
100mV/s
，预处理
GCE
的
CV
曲线的峰值电位差低于
100mV
，进行下一步处理，将7μ
L
的
MoS2@MWCNTs
滴加在电极表面并在
27℃
下放置
2h
；
(3)
通过金硫键将适配体组装在电极表面：将6µ
L
的
AuNPs
滴加到
MoS2@MWCNTs/GCE
表面，并在
27℃
下放置
2h
，然后滴加6µ
L
适配体，并于
27
～
30℃
下孵育2～
4h

【专利技术属性】
技术研发人员：赵文苹，孟晓娅，桑茂盛，李忠钰，周全龙，孙霞，郭业民，
申请(专利权)人：山东理工大学，
类型：发明
国别省市：