一种海滨木槿的制造技术

本发明专利技术公开了一种海滨木槿的

【技术实现步骤摘要】
一种海滨木槿的RNA提取方法


[0001]本专利技术涉及植物生物
，特别是一种海滨木槿的
RNA
提取方法
。

技术介绍

[0002]海滨木槿是锦葵科木槿属植物，落叶小乔木，株高3‑
5m
，胸径
20cm
，扁球形树冠，枝叶繁盛
。
原产于朝鲜
、
日本和中国；在中国分布于浙江舟山群岛和福建的沿海岛屿
。
浙江
、
江苏省
、
上海
、
北京和天津等地均有引种栽培
。
多生长于海滨盐碱地上
。
生长良好
。
性喜光，对土壤的适应能力强，酸性
、
碱性土都能生长良好
。
耐短期水涝，耐高温，耐低温
(
‑
10℃)。
[0003]海滨木槿花色金黄，入秋后叶片变红，季相变化明显，是优良的观花观叶园林植物，可用于公园
、
广场绿地
、
庭园
、
住宅小区等绿化，也是花篱
、
花境的优秀植物材料
。
海滨木槿具根系特别发达
、
树枝韧皮纤维柔软
、
抗盐抗碱
、
抗风耐瘠能力特强等生物学特性
。
[0004]目前进行植物
RNA
提取的原理：液氮低温状态下对欲进行
RNA
提取的组织快速研磨，将样品磨成干粉，加入具有强变性氧化能力的裂解液使细胞膜裂解
、
蛋白质变性，抑制内源
RNase
的活性，同时使核酸释放于水相之中，通过无水乙醇沉淀法或吸附柱回收
RNA。
[0005]中国专利申请号
CN201910102636.X
公开了一种
RNA
提取方法，具体步骤如下：
1)
先用提取液
A
保存的组织或细胞；再向提取液
A
保存的组织或细胞中加入提取液
B
，混匀获得混合物；
2)
从组织中提取
RNA
时，将混合物进行超声破碎；
3)
从细胞中提取
RNA
时，直接进行下述步骤
5)
中的操作；
4)
将超声破碎后的混合物颠倒混匀；
5)
在步骤
3)
从细胞提取
RNA
的混合物或步骤
4)
的混合物中，加入氯仿离心，取上层液体；
6)
在上层液体中加入异丙醇再离心获得沉淀物；
7)
向沉淀物中加入乙醇溶液，混匀后离心，弃去液体；
8)
最后加入水溶解
。
[0006]但由于海滨木槿材料的特殊性，使用传统方式提取时会造成大量
RNA
降解，无法高质量对海滨木槿进行
RNA
提取
。

技术实现思路

[0007]为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种海滨木槿的
RNA
提取方法
。
[0008]为达到上述目的，本专利技术是按照以下技术方案实施的：
[0009]一种海滨木槿的
RNA
提取方法，包括以下步骤：
[0010]S1、
选取幼嫩的海滨木槿叶片于研钵中，在研钵中加入液氮使叶片充分研磨成海滨木槿叶片干粉；
[0011]S2、
取
0.1g
海滨木槿叶片干粉作为样品装入
1.5ml
离心管中，向样品中加入
700ul
裂解液，震荡混匀，
60℃
水浴
5min
；
[0012]S3、
向样品中加入
700ul
氯仿，震荡
5min
，在
4℃、12000rpm
转速下离心
5min
，取上清液；
[0013]S4、
将步骤
S3
的上清液移至新
1.5ml
离心管中，加入
700ul
氯仿，再次震荡
5min
，在
4℃、12000rpm
转速下离心
5min
，取上清液；
[0014]S5、
将步骤
S4
的上清液移至新
1.5ml
离心管中，加入
4℃
预冷的等体积异丙醇，混匀
后置于
4℃
或
‑
20℃
放置
10
‑
20min
；
[0015]S6、
在
4℃、12000rpm
转速下离心
10min
，弃上清，收集沉淀后置于冰上，以保证
RNA
不被降解；
[0016]S7、
向沉淀中加入
1ml 75
％
DEPC
酒精，在
4℃、12000rpm
转速下离心
10min
，弃废液，收集沉淀；并重复操作1‑3次；其中
75
％
DEPC
酒精为用
DEPC
水配置的体积分数为
75
％的酒精；
[0017]S8、
将步骤
S7
收集的沉淀空离
2min
，吸出液体，冰上静置5‑
10min
，于超净台中吹干乙醇；
[0018]S9、
向吹干乙醇的沉淀中加入
30
‑
50ul DEPC
水溶解沉淀，并进行
RNA
完整性检测后，得到海滨木槿的
RNA
；其中
DEPC
水为
100ml
超纯水中加入
100ul DEPC
混匀后沉淀过夜，
121℃
灭菌
20min
制成
。
[0019]进一步地，所述步骤
S2
中裂解液是将
20mM/L EDTA
‑
2Na、1.4M/LNaCl、pH
为8的
100mM/L Tris
‑
HCl
缓冲液
、2
％
CTAB、1ml/L DEPC
混匀后沉淀过夜，
121℃
灭菌
20min
制成
。
[0020]进一步地，所述步骤
S2
中，向样品中加入裂解液之前，在
60℃
水浴锅中预热裂解液，并向裂解液中加入裂解液体积2％的<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种海滨木槿的
RNA
提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、
选取幼嫩的海滨木槿叶片于研钵中，在研钵中加入液氮使叶片充分研磨成海滨木槿叶片干粉；
S2、
取
0.1g
海滨木槿叶片干粉作为样品装入
1.5ml
离心管中，向样品中加入
700ul
裂解液，震荡混匀，
60℃
水浴
5min
；
S3、
向样品中加入
700ul
氯仿，震荡
10
‑
15min
，在
4℃、12000rpm
转速下离心
5min
，取上清液；
S4、
将步骤
S3
的上清液移至新
1.5ml
离心管中，加入
700ul
氯仿，再次震荡
10
‑
15min
，在
4℃、12000rpm
转速下离心
5min
，取上清液；
S5、
将步骤
S4
的上清液移至新
1.5ml
离心管中，加入
4℃
预冷的等体积异丙醇，混匀后置于
4℃
或
‑
20℃
放置
10
‑
20min
；
S6、
在
4℃、12000rpm
转速下离心
10min
，弃上清，收集沉淀后置于冰上，以保证
RNA
不被降解；
S7、
向沉淀中加入
1ml 75
％
DEPC
酒精，在
4℃、12000rpm
转速下离心
10min
，弃废液，收集沉淀；并重复操作1‑3次；其中
75
％
DEPC

【专利技术属性】
技术研发人员：刘星，刘慧子，刘宇，王宣，陈家龙，杨升，魏馨，岳雷，张树刚，吴敏霞，陈秋夏，
申请(专利权)人：浙江省亚热带作物研究所浙南林业科学研究院，
类型：发明
国别省市：