一种特异在制造技术

本发明专利技术属于基因编辑技术领域，公开了一种特异对

【技术实现步骤摘要】
NO:2
所示；
G105C
氨基酸序列如
SEQ ID NO:3
所示；
N169N
氨基酸序列如
SEQ ID NO:4
所示；
N169C
氨基酸序列如
SEQ ID NO:5
所示
。
[0013]所述分割蛋白，对其中单个氨基酸进行突变，用于提高原始蛋白的活性，该增强版分割蛋白的氨基酸序列如下所示：
N169N
‑
mut1
氨基酸序列如
SEQ ID NO:6
所示；
N169N
‑
mut2
氨基酸序列如
SEQ ID NO:7
所示
。
[0014]所述
DddA
结构域或者所述分割蛋白在构建
C/G
到
T/A
编辑的胞嘧啶编辑系统
RiCBE
中的应用
。
[0015]采用所述
DddA
结构域或者所述分割蛋白构建的胞嘧啶编辑系统
RiCBE。
[0016]所述胞嘧啶编辑系统
RiCBE
，包括
RVD
文库
、
线粒体定位骨架载体或细胞核定位骨架载体，其中，用于实现线粒体
DNA
的特异性只针对“gC”基序中的
C
进行
C/G
到
T/A
高效精确编辑的胞嘧啶编辑系统
RiCBE<br/>采用
MTS
‑
RiCBE
骨架载体；用于实现细胞核
DNA
的特异性只针对“gC”基序中的
C
进行
C/G
到
T/A
高效精确编辑的胞嘧啶编辑系统
RiCBE
采用
NLS
‑
RiCBE
骨架载体
。
[0017]所述胞嘧啶编辑系统
RiCBE
，其中，4个
MTS
‑
RiCBE
骨架载体分别为：
MTS
‑
ccdb
‑
G105N
‑
UGI、MTS
‑
ccdb
‑
G105C
‑
UGI、MTS
‑
ccdb
‑
N169N
‑
UGI、MTS
‑
ccdb
‑
N169C
‑
UGI
；2个
NLS
‑
RiCBE
骨架载体分别为：
NLS
‑
ccdb
‑
N169N
‑
UGI
和
NLS
‑
ccdb
‑
N169C
‑
UGI。
[0018]所述的胞嘧啶编辑系统
RiCBE
在线粒体
DNA
或者细胞核
DNA
的特异性只针对“gC”基序中的
C
进行
C/G
到
T/A
高效精确编辑的应用
。
[0019]所述
DddA
结构域
、
或者所述分割蛋白
、
或者所述胞嘧啶编辑系统
RiCBE
在制备线粒体
DNA
或细胞核
DNA
的特异性只针对“gC”基序中的
C
进行
C/G
到
T/A
高效精确编辑的试剂盒中的应用
。
[0020]一种用于线粒体
DNA
或细胞核
DNA
的特异性只针对“gC”基序中的
C
进行
C/G
到
T/A
高效精确编辑的试剂盒，该试剂盒含有所述
DddA
结构域
、
或者所述分割蛋白
、
或者所述胞嘧啶编辑系统
RiCBE。
[0021]进一步说明：
[0022]本专利技术提供的用于实现
DNA
的
C/G
到
T/A
编辑的胞嘧啶编辑系统
RiCBE
，在于新发现的来源于
Roseburia_intestinalis
菌属中的双链
DNA
胞嘧啶脱氨基酶
DddA
结构域，基因序列号为
SAMEA3134499_274314
，基因名简称为
SA071
，通过
TALE
融合
SA071
的
DddA
tox
分割蛋白和糖基化酶抑制剂
(Uracil glycosylase inhibitor,UGI)
组成了
RiCBE
系统，可以实现对靶位点的
gC
基序中的
C
进行高效精确编辑
。
[0023]该结构域没有作为
DddA
结构域进行公开过，但是其整个蛋白的序列是在
GMGC、GEMs
及
TG2G
蛋白数据库中是存在的，其功能没有做过探究
。
[0024]SA071
双链
DNA
胞嘧啶脱氨基结构域
DddAtox
来源于
Roseburia_intestinalis
菌属中第
95
‑
295
位氨基酸，与
Burkholderia cenocepacia
的
DddA
tox
相比氨基酸序列相似性只有
42.857
％
。
[0025]本专利技术将
Roseburia_intestinalis
来源的
SA071
中的
DddA
结构域
(95
‑
295
位氨基酸
)
在第
105
位氨基酸，第
169
位氨基酸切割，产生4种
Half DddA,
分别将
Half DddA
和糖基化酶抑制剂
(UGI)
通过
linker
氨基酸序列融合后分别插入到
MTS
‑
TALE
骨架载体和
NLS
‑
TALE
骨架载体中最终获得4个
MTS
骨架载体和2个
NLS
骨架载体
(
见图本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种双链
DNA
胞嘧啶脱氨基酶
DddA
结构域，其特征在于该
DddA
结构域为
Roseburia_intestinalis
来源的双链
DNA
胞嘧啶脱氨基酶
DddA
结构域，基因序列号为
SAMEA3134499_274314
，基因名简称为
SA071。2.
权利要求1所述的胞嘧啶脱氨基酶
DddA
结构域，其特征在于该
DddA
结构域的氨基酸序列如
SEQ ID NO:1
所示
。3.
来自权利要求1所述
DddA
结构域的分割蛋白，其特征在于，按该
DddA
的结构域的氨基酸结构特征选择在
G105
位点进行分割得到一对
half DddA
的分割蛋白，为：
G105N
和
G105C
，以及，按该
DddA
的结构域的氨基酸结构特征选择在
N169
位点进行分割得到一对
half DddA
的分割蛋白，为
N169N
和
N169C
；分割蛋白成对使用
。4.
根据权利要求3所述的分割蛋白，其特征在于，该分割蛋白的氨基酸序列如下所示：
G105N
氨基酸序列如
SEQ ID NO:2
所示；
G105C
氨基酸序列如
SEQ ID NO:3
所示；
N169N
氨基酸序列如
SEQ ID NO:4
所示；
N169C
氨基酸序列如
SEQ ID NO:5
所示
。5.
根据权利要求4所述分割蛋白，对其中单个氨基酸进行突变，其特征在于，用于提高原始蛋白的活性，该增强版分割蛋白的氨基酸序列如下所示：
N169N
‑
mut1
氨基酸序列如
SEQ ID NO:6
所示；
N169N
‑
mut2
氨基酸序列如
SEQ ID NO:7
所示
。6.
权利要求
1、2
所述
DddA
结构域或者权利要求
3、4、5
所述分割蛋白在构建
C/G
到
T/A
编辑的胞嘧啶编辑系统
RiCBE
中的应用
。7.
采用权利要求
1、2
所述
DddA
结构域或者权利要求
3、4、5
所述分割蛋白构建的胞嘧啶编辑系统
RiCBE。8.
根据权利要求7所述胞嘧啶编辑系统
RiCBE
，包括
RVD
文库
、
线粒体定位骨架载体或细胞核定位骨架载体，其特征在于，用于实现线粒体
DNA
的特异性只针对“gC”基序中的
C
进行<...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈彬，沈李宓妮，韩露，孙海峰，刘单鹏，王兆君，程凯，
申请(专利权)人：南京医科大学，
类型：发明
国别省市：