一种制造技术

本发明专利技术公开了一种

【技术实现步骤摘要】
一种
β
‑
乳球蛋白、
α
‑
乳白蛋白和乳铁蛋白的快速熔解定量方法及试剂盒


[0001]本专利技术属于食品检测领域，具体涉及一种
β
‑
乳球蛋白
、
α
‑
乳白蛋白和乳铁蛋白的快速熔解定量方法及试剂盒
。

技术介绍

[0002]乳清蛋白包含
α
‑
乳白蛋白
(Alpha lactalbumin
，
α
‑
Lac)、
免疫球蛋白
(Immunoglobulin G
，
IgG)、
乳铁蛋白
(Lactoferrin
，
LF)
等功能蛋白及低聚糖
、
共轭亚油酸等小分子活性物质，一直都被作为人类重要的营养来源，在人类的生长发育及保护身体免受疾病影响方面发挥着关键作用
。
含有丰富的蛋氨酸和半胱氨酸，是人体内重要的抗氧化剂；能通过消耗谷胱甘肽
(GSH)
而使肿瘤细胞对化疗更敏感，实现抗癌作用；可增强免疫细胞功能，抑制肿瘤生长，被广泛应用于奶制品和配方食品中，是食品产业中较理想的蛋白补充剂
。
[0003]β
‑
乳球蛋白
、
α
‑
乳白蛋白
、
乳铁蛋白的定性定量检测对于乳品企业乳制品的开发利用
、
过敏原标识
、
质量控制监管以及营养价值评价等方面都具有重要意义
。
目前常用于乳清蛋白检测的高效液相色谱法成本高，且分离过程需使用有机溶剂会对环境造成污染，色谱
‑
质谱法能够快速获得大量信息，但需具备昂贵的仪器和专业的操作限制了其推广应用
。
电泳法操作简单，但目前仅限于实验室使用，免疫法检测快速精准，但存在交叉污染问题，且加工过程中热处理
、
糖基化
、
酶解等工艺条件都在一定程度上给可能会影响抗体结合，导致检测结果产生误差
。

技术实现思路

[0004]本专利技术针对现有检测
β
‑
乳球蛋白
、
α
‑
乳白蛋白
、
乳铁蛋白含量的方法存在的成本高和操作复杂等不足，提供一种准确度高
、
方便
、
低成本
、
高通量的
β
‑
乳球蛋白
、
α
‑
乳白蛋白
、
乳铁蛋白定性定量的快速熔解检测方法及试剂盒
。
[0005]为达到上述目的，本专利技术采用了以下技术方案：
[0006]一种
β
‑
乳球蛋白
、
α
‑
乳白蛋白和乳铁蛋白的快速熔解定量方法，包括以下步骤：
[0007](1)
样品制备：将目标蛋白：
β
‑
乳球蛋白
、
α
‑
乳白蛋白
、
乳铁蛋白用1×
PBS
溶解至
10mg/mL
作为标准蛋白储备液，按需稀释至不同浓度备用，利用醋酸缓冲液提取乳制品样本中的乳清蛋白；
[0008](2)
熔解分析：通过熔解对步骤
(1)
制备的样品进行分析，分别得到
350nm
的
DSF
曲线，
350nm/330nm
比值通道的
DSF
曲线
、
以及两种熔解曲线的熔解峰曲线；
[0009](3)
数据处理：对熔解峰的峰高或峰面积进行分析，根据
β
‑
乳球蛋白
、
α
‑
乳白蛋白
、
乳铁蛋白三种乳清蛋白标准浓度
‑
熔解峰面积曲线计算得到待测乳品中的目标蛋白含量
。
[0010]优选的，步骤
(1)
中提取乳清蛋白的浓度为
0.01
～
0.2mg/mL
，
pH
范围为
2.7
～
7.4。
[0011]优选的，步骤
(1)
中所述乳制品样本选自生乳
、
奶粉或液态乳制品
。
[0012]优选的，步骤
(1)
中所述乳制品样本包含牛乳
、
羊乳
、
驼乳
、
牦牛乳
、
水牛乳
、
驴乳
、
马乳
。
[0013]优选的，步骤
(1)
中所述乳制品样本需用
pH4.0
～
5.0
的醋酸缓冲液处理，提取乳清蛋白
。
[0014]优选的，所述步骤
(2)
中
DSF
检测参数为：扫描温度范围：
35
～
95℃
，升温速率为
6℃/min
～
30℃/min。
[0015]一种
β
‑
乳球蛋白
、
α
‑
乳白蛋白和乳铁蛋白的快速熔解定量的试剂盒，包括：用于绘制乳清蛋白浓度
‑
峰面积标准曲线的乳清蛋白标准品：
α
‑
乳白蛋白标准品
、
β
‑
乳球蛋白标准品
、
乳铁蛋白标准品及样品缓冲液
。
[0016]本专利技术的有益效果如下：
[0017]本专利技术通过
DSF
获得蛋白质的熔解曲线，分别获得
β
‑
乳球蛋白
、
α
‑
乳白蛋白
、
乳铁蛋白三种乳清蛋白的稳定的熔解曲线以及熔解峰曲线，进而利用熔解峰位置及形状的特异性对蛋白进行定性区分，利用不同浓度乳清蛋白的熔解峰面积不同而进行定量
。
从而建立一种基于
DSF
的快速熔解测定
β
‑
乳球蛋白
、
α
‑
乳白蛋白
、
乳铁蛋白等三种乳清蛋白含量的分析法，适用于母乳
、
羊乳
、
牛乳
、
奶粉
、
乳清蛋白粉等不同来源乳及乳制品，具有普适性和通用性
。
前处理操作简单，只需简单除酪蛋白，操作简便快捷，无需借助大型仪器，无需专业的技术人员进行操作，检测成本低，样品通量高，
3min
即可本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种
β
‑
乳球蛋白
、
α
‑
乳白蛋白和乳铁蛋白的快速熔解定量方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)
样品制备：将目标蛋白：
β
‑
乳球蛋白
、
α
‑
乳白蛋白
、
乳铁蛋白用1×
PBS
溶解至
10mg/mL
作为标准蛋白储备液，按需稀释至不同浓度备用，利用醋酸缓冲液提取乳制品样本中的乳清蛋白；
(2)
熔解分析：通过熔解对步骤
(1)
制备的样品进行分析，分别得到
350nm
的
DSF
曲线，
350nm/330nm
比值通道的
DSF
曲线
、
以及两种熔解曲线的熔解峰曲线；
(3)
数据处理：对熔解峰的峰高或峰面积进行分析，根据
β
‑
乳球蛋白
、
α
‑
乳白蛋白
、
乳铁蛋白三种乳清蛋白标准浓度
‑
熔解峰面积曲线计算得到待测乳品中的目标蛋白含量
。2.
根据权利要求1所述的一种
β
‑
乳球蛋白
、
α
‑
乳白蛋白和乳铁蛋白的快速熔解定量方法，其特征在于：步骤
(1)
中，提取乳清蛋白浓度为
0.01
～
0.2mg/mL
，
pH
范围为
2.7
～
7.4。3.
根据权利要求1所述的一种
β
‑
乳球蛋白
、
α
‑
乳白蛋白和乳铁蛋白的快速熔解定量方法，其特征在于：步骤

【专利技术属性】
技术研发人员：徐秦峰，路梦凡，王云娜，赵婉怡，舒国伟，
申请(专利权)人：陕西科技大学，
类型：发明
国别省市：