乳清蛋白抗氧化肽及其制备方法与它们的用途技术

本发明专利技术涉及一种乳清蛋白抗氧化肽及其制备方法与它们的用途。本发明专利技术利用干酪副产物乳清蛋白和酶制剂，通过酶法水解，制备得到乳清蛋白抗氧化肽酶解物，再将上述酶解物经大孔吸附静态或动态初步纯化、凝胶过滤色谱、制备型高效液相色谱和分析型高效液相色谱分离纯化后得到纯的乳清蛋白抗氧化肽产品，并测定多肽氨基酸序列，该产品具有良好的耐消化、耐热耐酸碱和耐储藏稳定性，较小分子量和特定氨基酸序列，能够有效清除自由基，阻断氧化反应，减少氧化损伤的产生，因此在食品、医药、饲料和化妆品领域中具有很广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种乳清蛋白抗氧化肽的制备方法，其特征在于该方法的步骤如下：　　（ｉ）酶解步骤：　　在酶反应器中制备浓度１０－５０ｍｇ／ｍＬ乳清蛋白去离子水溶液，在温度４５－５５℃下预处理１０－２０ｍｉｎ，然后用酸或碱将其ｐＨ调节到７．０－１０．５，再加入以乳清蛋白重量计１－３重量％蛋白酶，在这个温度下进行酶解直到水解度达到１８－２０％，同时用酸或碱保持该反应介质的ｐＨ恒定，然后在８５－１００℃灭酶５－１０ｍｉｎ，用碱或酸将其反应介质的ｐＨ调节到６．８－７．２，再在８０００－１００００ｒ／ｍ（ｖｉ）得到的乳清蛋白抗氧化肽冻干物－４制备成５－１０ｍｇ／ｍＬ乳清蛋白抗氧化肽去离子水溶液，使用液相色谱串联四极杆飞行时间质谱仪分析氨基酸序列，得到母离子ｍ／ｚ？１５６８．７０氨基酸序列为ＬＤＧＮＡＫＰＴＰＥＧＤＬＥＬ，以及母离子ｍ／ｚ？１７３１．７０氨基酸序列为ＬＹＥＤＬＫＰＴＰＥＧＰＭＥＬ的两个抗氧化肽肽段。ｉｎ下冷冻离心１０－３０ｍｉｎ，得到含有１０－５０ｍｇ／ｍＬ乳清蛋白抗氧化肽酶解物的上清液，或让所述的上清液进行冷冻干燥得到乳清蛋白抗氧化肽酶解物冻干粉；　　（ｉｉ）初步纯化步骤：　　静态法，往步骤（ｉ）得到的上清液中加入大孔吸附树脂，所述上清液与大孔吸附树脂的体积比是１∶１－２∶１，在温度１５－３０℃与１５０－２００ｒ／ｍｉｎ的条件下振荡１２－２４ｈ，然后分离上清液，该树脂再用５０－７０体积％乙醇水溶液洗脱１２－２４ｈ；或　　动态法，使用尺寸φ２．６×３０ｃｍ柱，让步骤（ｉ）得到的含有乳清蛋白抗氧化肽酶解物的上清液以流速１－２ｍＬ／ｍｉｎ通过上述大孔吸附树脂柱，然后该树脂用去离子水以流速１－２ｍＬ／ｍｉｎ洗涤至电导率小于１５μｓ／ｃｍ，再用６５－７５体积％乙醇水溶液以流速０．５－１ｍＬ／ｍｉｎ进行洗脱；　　（ｉｉｉ）蒸发浓缩步骤：　　步骤（ｉｉ）得到的乙醇洗脱液在温度５０－６５℃下进行旋转蒸发浓缩到１００－３００ｍｇ／ｍＬ乳清蛋白抗氧化肽，再进行冷冻干燥，得到乳清蛋白抗氧化肽冻干物－１；　　（ｉｖ）凝胶过滤色谱分离步骤：　　将步骤（ｉｉｉ）得到的乳清蛋白抗氧化肽冻干物－１制备成１０－５０ｍｇ／ｍＬ乳清蛋白抗氧化肽去离子水溶液，以流速为２－３ｍＬ／ｍｉｎ通过凝胶过滤色谱柱，再用去离子水以洗脱流速１２－２４ｍＬ／ｈ洗脱，得到的组分进行抗氧化活性测定，收集抗氧化活性最强的组分进行冷冻干燥，得到乳清蛋白抗氧化肽冻干物－２；　　（ｖ）制备...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：卢蓉蓉，孙震，沈浥，凌玉芳，吴慧，赵新灿，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]