重组的猴腺病毒制造技术

本申请实施例公开了重组的猴腺病毒

【技术实现步骤摘要】
重组的猴腺病毒、病毒载体及构建方法


[0001]本申请涉及腺病毒
，具体涉及重组的猴腺病毒
、
病毒载体及构建方法
。

技术介绍

[0002]腺病毒在自然界中拥有广泛的宿主，截至目前，根据腺病毒感染的宿主的差异，
ICTV
将腺病毒分为6个属共
87
个种
(https://ictv.global/taxonomy)
，这些病毒分别感染哺乳动物
、
鸟类
、
鱼类
、
爬行动物和两栖动物
。
灵长类动物腺病毒归为哺乳动物腺病毒属，其中人腺病毒
(H
μ
Man adenovirus
，
HAdV)
被划分为7个种
(HAdV A
‑
G)
，含有至少
100
个型
。
而非人灵长类动物腺病毒统称为猴腺病毒
(Simian adenovirus
，
SAdV)
，共划分为9个种
(SAdV A
‑
I)
，截至目前已经鉴定了至少
50
个型别
。
[0003]腺病毒可感染的细胞种类多，一般不与宿主基因组整合，并可高效表达外源基因，基因组稳定，并且于液态和固态颗粒状态下能稳定存在，是一种常见病毒载体，也被广泛应用于构建病毒疫苗和基因治疗
。
[0004]然而，腺病毒的基因组可以容纳的基因片段加上自身基因组不能超过原始基因组的
105
％
。
并且，各种人群中，人腺病毒的血清中和抗体阳性率较高，人腺病毒预存免疫高，导致其表达外源基因的效率低，使得其作为病毒载体的应用受到干扰
。

技术实现思路

[0005]本申请专利技术人利用猴腺病毒在人群中和抗体阳性率低于人腺病毒的现象，对猴腺病毒一野生毒株的基因组进行重组，得到一类新型的猴腺病毒
。
该猴腺病毒能够很好地避免预存免疫干扰，能够作为一种安全的复制缺陷型的病毒载体
。
[0006]为此，本申请实施例至少公开了以下技术方案：
[0007]第一方面，实施例公开了一种猴腺病毒载体，所述猴腺病毒载体携带至少一个重组的猴腺病毒基因组，所述重组的猴腺病毒基因组是对如
SEQ ID NO.35
所示的猴腺病毒株基因组进行重组得到的基因组，所述重组的猴腺病毒基因组具有如下至少一项特性：
[0008]E4
基因的
orf6
区被替代；
[0009]E1
基因部分或全部缺失；
[0010]E3
基因部分或全部缺失；
[0011]E3
基因插入了
EGFP
基因
。
[0012]第二方面，实施例公开了一种第一方面所述的猴腺病毒载体的构建方法，其包括：
[0013]构建第一载体，所述第一载体携带至少一个所述猴腺病毒基因组；
[0014]构建第二载体，所述第二载体携带用于替换所述猴腺病毒基因组
E4orf6
的核酸序列；
[0015]将所述第一载体和所述第二载体同时转入可表达重组酶的大肠杆菌，得到第三载体
。
[0016]第三方面，实施例公开了一种重组复制缺陷型猴腺病毒，其为第一方面所述的猴
腺病毒载体经转染细胞包装获得
。
附图说明
[0017]图1为本申请实施例提供的第一载体
(pBRSAdV GZ3
‑
12)
的构建流程示意图
。
[0018]图2为本申请实施例提供的第三载体
(pSAdV
‑
Ad5E4orf6)
的构建流程示意图
[0019]图3为本申请实施例提供的第五载体
(pSAdV
‑
Δ
E3
‑
Ad5E4orf6
‑
EGFP)
的构建流程示意图
.
[0020]图4为本申请实施例提供的第七载体
(pSAdV
‑
Δ
E3
‑
Δ
E1B55K
‑
Ad5E4orf6
‑
EGFP)
的构建流程示意图
。
[0021]图5为本申请实施例提供的第八载体
(pSAdV
‑
Δ
E3
‑
EGFP)
的构建流程示意图
。
[0022]图6为本申请实施例提供的第一病毒
(AdVGZ3
‑
12)
转染
Ad2933
细胞为微观图
。
[0023]图7为本申请实施例提供的第五病毒
(SAdV
‑
Δ
E3
‑
Ad5E4orf6
‑
EGFP)
转染
Ad293
细胞为白光图
(
左图
)
和荧光图
(
右图
)。
[0024]图8为本申请实施例提供的第七病毒
(SAdV
‑
Δ
E3
‑
Δ
E1B55K
‑
Ad5E4orf6
‑
EGFP)
转染
Ad293
细胞为白光图
(
左图
)
和荧光图
(
右图
)。
[0025]图9为本申请实施例提供的多种病毒生长繁殖时不同时间点病毒的
DNA
含量变化曲线
(a)
和活病毒滴度变化曲线
(b)。
图中，“SAdV
‑
E4orf6 IN A549”表明第三病毒
SAdV
‑
AdE4orf6
于
A549
细胞中的生长情况，“SAdV
‑
Δ
E1B55K
Δ
E3
‑
E4orf6
‑
EGFP IN A549”表明第七病毒
SAdV
‑
Δ
E1B55K
Δ
E3
‑
E4orf6
‑
EGFP
于
A549
细胞中的生长情况，“SAdV
‑
Δ
E3
‑
Ad5E4orf6
‑
EGFP IN A549”表明第五病毒
SAdV
‑
Δ
E3
‑
Ad5E4orf6
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种猴腺病毒载体，所述猴腺病毒载体携带至少一个重组的猴腺病毒基因组，所述重组的猴腺病毒基因组是对如
SEQ ID NO.35
所示的猴腺病毒株基因组进行重组得到的基因组，所述重组的猴腺病毒基因组具有如下至少一项特性：
E4
基因的
orf6
区被替代；
E1
基因部分或全部缺失；
E3
基因部分或全部缺失；
E3
基因插入了增强型绿色荧光蛋白
(EGFP)
基因
。2.
根据权利要求1所述的猴腺病毒载体，所述重组的猴腺病毒基因组是将所述猴腺病毒株基因组的
E4
基因
orf6
区替换为人5型腺病毒的
E4
基因
orf6
区所得的基因组
。3.
根据权利要求1所述的猴腺病毒载体，所述重组的猴腺病毒基因组是将所述猴腺病毒株基因组的
E4
基因
orf6
区替换为人5型腺病毒株的
E4
基因
orf6
区，并将其
E3
基因敲除，以及在其
E3
基因区插入
EGFP
基因所得的基因组
。4.
根据权利要求1所述的猴腺病毒载体，所述重组的猴腺病毒基因组是将所述猴腺病毒株基因组的
E4
基因
orf6
区替换为人5型腺病毒株的
E4
基因
orf6
区，并将其
E3
...

【专利技术属性】
技术研发人员：张其威，蓝文东，欧俊贤，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：