一种猪源树突状细胞靶向肽制造技术

本发明专利技术公开了一种猪源树突状细胞靶向肽

【技术实现步骤摘要】
一种猪源树突状细胞靶向肽KC1及其应用


[0001]本专利技术涉及一种猪源树突状细胞靶向肽及其用途
。
本专利技术属于生物医药

。

技术介绍

[0002]免疫学和分子生物学的快速发展，推动了新型疫苗的研制，部分研究已涉及到如何利用免疫细胞和疫苗抗原的相互作用，优化机体应答，加快先天免疫反应的速度，提高获得性免疫的特异性
。
[0003]近年来，靶向性治疗及预防已成为医药生物
研究热点，现已应用于人肿瘤等治疗，其中靶向树突状细胞的生物免疫疗法可将药物有效地输送到相应的靶标，减少用药剂量和给药次数，提高药物的治疗效果，降低不良反应
。
树突状细胞
(dendritic cells
，
DCs)
是目前已知的功能最强的专职抗原呈递细胞，能有效激活初始型
T
细胞，在天然免疫系统和获得性免疫系统中发挥重要作用
。
有研究利用噬菌体展示线性
12
肽库，筛选得到人外周血
DCs
靶向肽，将其与抗原融合表达于乳杆菌递送载体后，获得了较好的免疫效果
。
另有研究利用噬菌体环7肽库，筛选出小鼠骨髓源
DCs
靶向肽，与抗原偶联后制成壳聚糖纳米颗粒疫苗，显著提高了免疫效率
。
然而，猪源树突状细胞靶向肽鲜有研究，影响其相关新型药物及生物制品的研制与开发，猪病靶向性治疗与预防的领域更是涉及甚少
。
[0004]由于变异株或毒力增强株的出现，现有疫苗产品的效力日益受到影响，新产品的研制重点转变为如何改进疫苗效力，如提高保护性免疫应答的强度
、
提早产生免疫力或延长免疫期等，靶向性疫苗成为新型疫苗研究重点
。
虽然现有的哺乳动物
DCs
靶向肽可与多个物种来源的
DCs
发生不同程度的结合，但目前还未有针对猪源
DCs
靶向肽的研究以及靶向治疗或预防的方案
。
[0005]本专利技术根据
DCs
是关键的抗原提呈细胞这一特点出发，设计筛选出针对猪源
DCs
具有良好亲和性的靶向肽，对猪的新型靶向性疫苗的研制与开发具有重要意义
。

技术实现思路

[0006]本专利技术所要解决的技术问题是提供一种猪源树突状细胞靶向肽及其应用
。
[0007]为了达到上述目的，本专利技术采用了以下技术手段：
[0008]本专利技术对猪源
DCs
进行分离培养，通过形态
、
表型
、
功能鉴定，获得了纯度较高的猪单核源
DCs
，然后利用噬菌体展示
12
肽库技术，以猪单核源
DCs
为靶细胞，以猪单核细胞作为负选择细胞，筛选得到与猪单核源
DCs
结合优良的线性
12
肽，并通过流式细胞术
、
免疫荧光等实验验证其结合效果，最终获得了能够靶向猪源
DCs
的短肽
。
[0009]本专利技术的一种猪源树突状细胞靶向肽，命名为
KC1
，所述的猪源树突状细胞靶向肽的氨基酸序列如
SEQ ID NO.1
所示
。
[0010]编码所述的猪源树突状细胞靶向肽的多核苷酸
、
含有所述的多核苷酸的表达载体以及含有所述的表达载体的宿主细胞也在本专利技术的保护范围之内
。
[0011]进一步的，本专利技术还提出了所述的猪源树突状细胞靶向肽在制备猪源树突状细胞靶向药物中的用途
。
[0012]其中，优选的，所述的药物为疫苗
。
[0013]相较于现有技术，本专利技术的有益效果是：
[0014]1、DCs
在抗原识别
、
摄取
、
加工处理及递呈的分子基础和作用机制的阐明以及体外培养
DCs
的技术日益成熟，使得基于
DCs
的靶向疫苗研制得到了快速发展
。
利用完整细胞进行筛选能充分模拟自然条件下蛋白质分子的相互作用，有利于寻找特异结合到靶细胞的标志蛋白多肽
。
筛选出的多肽可作为基因治疗的载体或与药物输送载体联合使用
,
有望提高治疗的靶向性，有助于克服细胞膜屏障，直接进入细胞内发挥作用
。
本专利技术利用噬菌体随机肽库和全细胞差异筛选技术筛选猪单核源
DCs
优势结合多肽，得到了猪源
DCs
靶向肽
KC1(KCCYPN)
，实验证明该靶向肽能较强地结合于猪源
DCs
，显示了良好的特异性
。
该靶向肽可作为基因导向载体等药物先导分子，为细胞特异性小分子治疗奠定基础，或与疫苗联合使用，提高猪病疫苗免疫效率，促进机体提早产生免疫力
。
本专利技术的提出为研发猪源
DCs
靶向疫苗提供了物质基础
。
[0015]2、
多肽具有免疫原性低
、
相对分子质量小
、
在血液和非靶组织中清除快
、
组织穿透力强
、
与受体亲和力高并可通过受体介导的内吞作用形成吞噬小体而进入细胞内等特点，且易于合成，能通过结构修饰降低其在生物体内的降解率及其副作用
。
靶向性短肽可与多种药物输送载体联合使用，达到良好的靶向效果，获得的成效是普通疫苗所达不到的
。
附图说明
[0016]图1为猪单核源树突状细胞显微镜观察结果
(100
μ
m)
；
[0017]其中，
A
：细胞培养第5天显微镜观察；
B
：经
LPS
刺激1天后显微镜观察；
[0018]图2为
IFA
检测猪
Mo
‑
DCs
分子表型的表达情况
(50
μ
m)
；
[0019]图3为猪单核源
DCs
分子表型
MHC
‑Ⅱ
和
CD172a
的检测；
[0020]其中，
A
：未成熟
Mo
‑
DCs
；
B
：成熟
Mo
‑
DCs
；
[0021]图4为猪
Mo
‑
DCs
的吞噬能力的检测；
[0022]图5为第四轮筛选后测序比对结果及重复的序列结果；
[0023]图6为荧光显微镜观察荧光肽与
DCs
结合效果；
[0024]图7为<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种猪源树突状细胞靶向肽，命名为
KC1
，其特征在于，所述的猪源树突状细胞靶向肽的氨基酸序列如
SEQ ID NO.1
所示
。2.
编码权利要求1所述的猪源树突状细胞靶向肽的多核苷酸
。3.
一种表达载体，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：王丽，单智夫，李佳璇，李一经，夏天，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：