一株产棘白菌素制造技术

本发明专利技术公开了一株产棘白菌素

【技术实现步骤摘要】
一株产棘白菌素B脱酰基酶的小单胞菌及其应用


[0001]本专利技术属于生物工程领域，涉及一株产棘白菌素
B
脱酰基酶的小单胞菌
。

技术介绍

[0002]棘白菌素类药物主要通过非竞争性抑制
β
‑
1,3
‑
D
‑
葡聚糖合成酶活性，导致真菌无法形成正常的细胞壁，最终导致真菌细胞溶解死亡达到抑菌效果
。
由于其特殊的作用机制使该类药物对人体的毒性大大降低，同时药物之间相互作用较少
。
[0003]目前，
FDA
已批准上市的棘白菌素类药物主要包括卡泊芬净
、
米卡芬净和阿尼芬净，其对应的前体分别为
pneumocan
‑
din B0、FR901379
和棘白菌素
B(echinocandin B
，
ECB)。
阿尼芬净是由
ECB
通过
ECB
脱酰基酶催化获得关键中间产物棘白菌素
B
母核
(ECB nucleus
，
ECBN)
，再经过化学修饰合成的
。
[0004]目前，已报道的棘白菌素
B
脱酰基酶主要来源于犹他游动放线菌和链霉菌属，尚未发现利用小单胞菌属合成阿尼芬净的现有报道
。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一株产棘白菌素
B/>脱酰基酶的小单胞菌，为阿尼芬净开辟一条新的合成路径
。
[0006]本专利技术的技术方案为：一株产棘白菌素
B
脱酰基酶的小单胞菌，所述小单胞菌菌株命名为
YT
‑
B51
，归为小单胞菌，拉丁学名为
Micromonospora sp.YT
‑
B51
，该菌种保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为
CCTCC NO
：
M20222042
，保藏日期为：
2022
年
12
月
23
日
。
[0007]本专利技术通过双层平板法从本公司菌种库中筛选获得一株产棘白菌素
B
脱酰基酶的小单胞菌
。
双层平板法的上层培养基为包含有一定浓度
ECB
的酵母麦芽琼脂培养基
(ISP2)
，接种菌株至
ISP2
培养基上，待菌株生长好以后，再加入含白色念珠菌的改良马丁氏培养基，通过观察接种菌落处白色念珠菌的生长情况，获得目的菌株
YT
‑
B51
，通过鉴定确定其为小单胞菌
。
[0008]在筛选得到菌株
YT
‑
B51
后，斜面培养基活化菌种，通过种子培养制备种子液，通过发酵培养基发酵培养获得
YT
‑
B51
菌丝体，菌丝体在
0.05mol/L
磷酸盐缓冲液
(PH6.0)
中转化
ECB
，通过
HPLC
检测转化液中
ECBN
，确定
YT
‑
B51
可以代谢产生棘白菌素
B
脱酰基酶
。
[0009]斜面培养基：
IPS2
培养基
。
[0010]种子培养基：葡萄糖2％，可溶性淀粉1％，酵母粉2％，大豆蛋白胨1％，碳酸钙
0.2
％，
PH6.5
‑
7.0。
[0011]发酵培养基：黄豆饼粉3％，可溶性淀粉
3.5
％，葡萄糖2％，蛋白胨1％，硫酸亚铁
0.01
％，硫酸锰
0.005
％，氯化钴
0.002
％，碳酸钙
0.1
％，
PH7.0
‑
7.2。
[0012]在本专利技术中，物质的含量比例“％”在未特别说明时是指“W/V”。
[0013]本专利技术应用产棘白菌素
B
脱酰基酶的小单胞菌的方法是，将小单胞菌的菌丝体与
ECB
混合，在
pH5.0
‑
7.0、
温度
30
‑
35℃
条件下转化
40
‑
50h
左右
。
[0014]产棘白菌素
B
脱酰基酶的小单胞菌可生产棘白菌素
B
脱酰基酶，应用于生产关键中间产物棘白菌素
B
母核
(ECB nucleus
，
ECBN)
，或者说应用于合成阿尼芬净
。
[0015]与现有技术相比，本专利技术至少具有以下有益效果：本专利技术的小单胞菌
YT
‑
B51
具有将
ECB
转化成
ECBN
的能力，该菌株可产棘白菌素
B
脱酰基酶，将
ECB
转化成
ECBN
，
ECB
转化率达到
28
％
‑
29
％，菌株
YT
‑
B51
可应用于生产
ECBN
及合成阿尼芬净
。
附图说明
[0016]图1为菌株
YT
‑
B51
菌落形态图
。
[0017]图2为光学显微镜下
YT
‑
B51
菌丝形态
(
×
400)。
[0018]图3为
YT
‑
B51
系统发育树
。
[0019]图4为本专利技术样品
1#
的
HPLC
图谱
。
[0020]图5为本专利技术样品
2#
的
HPLC
图谱
。
[0021]图6为本专利技术样品
3#
的
HPLC
图谱
。
[0022]保藏信息
[0023]产棘白菌素
B
脱酰基酶的小单胞菌，拉丁学名为
Micromonospora sp.YT
‑
B51
，该菌种保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为
CCTCC NO
：
M20222042
，保藏日期为：
2022
年
12
月
23
日
。
具体实施方式
[002本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一株产棘白菌素
B
脱酰基酶的小单胞菌，拉丁学名为
Micromonospora sp.YT
‑
B51
，该菌种保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为
CCTCC NO
：
M20222042
，保藏日期为：
2022
年
12
月
23
日
...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱辉，曹艳茹，严华聪，杨昌元，朱春燕，
申请(专利权)人：四川诺宜生药业有限公司，
类型：发明
国别省市：