一种比伐芦定杂质的合成方法技术

本发明专利技术公开一种比伐芦定杂质的合成方法，属于多肽合成技术领域

【技术实现步骤摘要】
一种比伐芦定杂质的合成方法


[0001]本专利技术涉及一种多肽药物合成领域，是一种人工合成的抗凝血药物，是水蛭素
20
肽类似物的杂质合成方法
。

技术介绍

[0002]比伐芦定是一种人工合成的抗凝血药物，是水蛭素的
20
肽类似物，于
2000
年获准在美国上市
。
比伐芦定能与凝血酶催化位点和阴离子外结合位点发生特异性结合，直接抑制凝血酶的活性，从而抑制凝血酶所催化和诱导的反应，其作用是可逆的
。
与普通肝素不同，比伐芦定不需要辅因子来协助其发挥抗凝特性，比伐芦定靶向抑制凝血酶
(
血小板激动剂
)
，从而有效降低血小板反应性， 这是一种对接受皮冠状动脉介入治疗的患者非常有益的生物学特性
。
比伐芦定主要作为抗凝剂用于成人择期经皮冠状动脉介入治疗
(PCI)。
比伐芦定上市剂型为粉针剂，商品名
Angiomax
，规格
250mg。
[0003]比伐芦定在其生产和储存过程中会产生多种杂质，天冬酰亚胺的形成被认为是肽合成中的一个严重副反应，天冬氨酰亚胺的形成既可以是酸又可以是碱催化的，影响固相和液相的反应
。
为了保证比伐芦定药品的安全性和有效性，必须控制产品中杂质的含量
。
杂质的发现与合成对于比伐芦定原料药的质量控制具有重要的现实意义
。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是为解决现有合成过程中杂质多，纯度和收率低，成本昂贵，操作步骤繁琐等问题，提供一种优化的比伐芦定杂质的合成方法，该方法此方法提高了比伐芦定杂质的粗肽纯度，极大降低纯化的难度，收率也相应得到了提高
。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术采取以下技术方案：一种比伐芦定杂质的合成方法，其特点是，所述的比伐芦定杂质序列为：
H
‑
D
‑
Phe
‑
Pro
‑
Arg
‑
Pro
‑
Gly
‑
Gly
‑
Gly
‑
Gly
‑
Asp
‑
Gly
‑
Asp
‑
Phe
‑
Glu
‑
Glu
‑
Ile
‑
Pro
‑
Glu
‑
Glu
‑
Tyr
‑
Leu
‑
OH
；通过固相合成法，选择
2% DBU/DMF
作为脱保护试剂，从碳端到氮端依次按照顺序偶联比伐芦定杂质氨基酸，其中
12
位选择
Fmoc
‑
Asp(OAll)
‑
OH
，合成结束后加入
2%
的
DBU/DMF
溶液，进行成环操作，最后经裂解沉淀，得到比伐芦定杂质
。
[0006]本专利技术所述的一种优化比伐芦定杂质的合成方法，其进一步优选的技术方案是：偶联比伐芦定杂质氨基酸时，
20
位选择
Boc
‑
D
‑
Phe
‑
OH。
[0007]本专利技术所述的一种优化比伐芦定杂质的合成方法，其进一步优选的技术方案是：合成各个氨基酸所用的缩合剂为
DIC/HOBt
，
HBTU/HOBt/DIEA
，
PyBop/HOBt/DIEA
中的一种或多种
。
[0008]本专利技术所述的一种优化比伐芦定杂质的合成方法，其进一步优选的技术方案是：所用的反应溶剂为
DCM、DMF、NMP、DMSO
中的一种或多种组合
。
[0009]本专利技术所述的一种优化比伐芦定杂质的合成方法，其进一步优选的技术方案是：采用的裂解试剂为：
TFA:TIS:H2O=90:5:5。
[0010]申请人在比伐芦定研发过程中发现，在比伐芦定生产和储存过程中会产生一种天冬酰亚胺类杂质，即比伐芦定残基中
11 位
Gly
和
12
位
Asn
之间发生亲核取代反应形成五元环
。
本专利技术将比伐芦定序列的第
12
位氨基酸
Fmoc
‑
Asn(Trt)
‑
OH
替换为
Fmoc
‑
Asp(OAll)
‑
OH
；再按顺序依次固相合成比伐芦定杂质序列的其他位点氨基酸，得到比伐芦定杂质
。
[0011]与现有技术相比，本专利技术上有以下有益效果：本专利技术比伐芦定杂质的合成方法操作简单，提高了比伐芦定杂质的粗肽纯度，极大降低纯化的难度，收率也相应得到了提高
。
附图说明
[0012]图1是本专利技术实施例1得到的粗肽的色谱图；图2是本专利技术实施例2得到的粗肽的色谱图；图3是本专利技术实施例3得到的粗肽的色谱图
。
具体实施方式
[0013]以下结合附图和具体实施例对本专利技术作具体的介绍
。
[0014]实施例1比伐芦定杂质肽树脂的制备：以
Wang Resin
为载体
(Sub=0.50 mmol/g)
，称取
60.00 g
加入固相反应器中，加入
400 mL DMF
溶胀树脂
0.5 h。
抽干溶剂，加入
Fmoc
‑
Leu
‑
OH 31.80 g、HOBt 14.61 g、DIC 16.8 ml、DMAP 1.11 g
，
400 ml DMF
溶剂，耦合反应
5 h
，抽干，
DMF
洗涤3次后，测取代度，得到
Fmoc
‑
Leu
‑
Wang Resin (Sub=0.44 mmol/g)。
[0015]称取
Fmoc
‑
Leu
‑
Wang Resin (Sub=0.44 mmol/g) 22.73 g
加入到固相反应器中，加入
200mL DMF
溶胀树脂
0.5h。
抽干溶剂，加入
200mL v/v 20%
哌啶
/DMF
溶液脱保护，反应
10+20min。
抽干，加入
DMF 250mL
洗涤6次
。
茚检结果呈阳性
。
称取
Fmoc
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种比伐芦定杂质的合成方法，其特征在于：比伐芦定杂质的序列为：
H
‑
D
‑
Phe
‑
Pro
‑
Arg
‑
Pro
‑
Gly
‑
Gly
‑
Gly
‑
Gly
‑
Asp
‑
Gly
‑
Asp
‑
Phe
‑
Glu
‑
Glu
‑
Ile
‑
Pro
‑
Glu
‑
Glu
‑
Tyr
‑
Leu
‑
OH
；采用通过固相合成法，选择
2% DBU/DMF
作为脱保护试剂，从碳端到氮端依次按照顺序偶联比伐芦定杂质氨基酸，其中
12
位选择
Fmoc
‑
Asp(OAll)
‑<...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨启萌，周奕，
申请(专利权)人：江苏诺泰澳赛诺生物制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：