疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶突变体制造技术

本发明专利技术提供了一种疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶突变体的制备方法及其应用，其包括如下步骤：预测突变位点

【技术实现步骤摘要】
疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶突变体E129Y、E134W及其应用


[0001]本专利技术涉及酶工程
，特别是涉及疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶突变体
E129Y、E134W
及其应用
。

技术介绍

[0002]脂肪酶
(E.C.3.1.1.3
是
α
/
β
折叠酶家族中的一种具有特殊水解能力的酶，在水油界面催化长三酰甘油酯水解，生成甘油二酯
、
甘油单酯
、
甘油和脂肪酸
。
此外，脂肪酶在有机相进行酯化和酯交换反应，而在水油界面可以促进水解，这说明脂肪酶的反应类型会根据反应体系而变化
。
由于脂肪酶具有催化活性高
、
副反应少
、
底物专一性等特点，被广泛用于生物燃料
、
食品加工
、
手性药物拆分
、
制药等行业
。
[0003]疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶
(TLL)
的耐热性非常显著，它由5个
α本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶突变体制备方法
E129Y
和
E134W
，其特征在于：包括如下步骤：获得突变位点：使用分子动力学模拟和专业软件预测
TLL
脂肪酶的突变位点，并按照突变位点的分析获得突变体；制备脂肪酶突变体质粒：使用质粒通过引物制备充足质粒，并且在线性化后导入菌株内并且检验序列的一致性；测定脂肪酶酶活：将选择合适浓度的酶液，测定不同的突变体和野生型菌株的酶活力；甲醇耐受性
、
热稳定性和
pH
稳定性测试：分别在多种甲醇浓度
、
温度和
pH
条件下对于野生型和突变体进行酶活的测定，判断甲醇耐受性
、
热稳定性和
pH
耐受性的优劣；所述获得突变点制备突变体中，突变体为7个，包括
N26W、D122Y、D122P、E129Y、D130W、E134W、E134F
，其中
N26W
的基因序列如
SEQ ID NO.1
所示，
D122Y
的基因序列如
SEQ ID NO.2
所示，
D122P
的基因序列如
SEQ ID NO.3
所示，
E129Y
的基因序列如
SEQ ID NO.4
所示，
D130W
的基因序列如
SEQ ID NO.5
所示，
E134W
的基因序列如
SEQ ID NO.6
所示，
E134F
的基因序列如
SEQ ID NO.7
所示
。2.
根据权利要求1中所述的疏...

【专利技术属性】
技术研发人员：张瑜，渠萍萍，李迅，李冬冬，王飞，
申请(专利权)人：南京林业大学，
类型：发明
国别省市：