一种烟草蛋白降解菌制造技术

本发明专利技术涉及一种烟草蛋白降解菌

【技术实现步骤摘要】
一种烟草蛋白降解菌、筛选方法及其应用


[0001]本专利技术涉及一种烟草蛋白降解菌
、
筛选方法及其应用，属于微生物

。

技术介绍

[0002]蛋白质在烟草的新陈代谢和生命活动中具有重要意义，但我国部分烟叶蛋白质等大分子物质含量过高，燃烧后产生的烟气有诸多不良气息，同时还会导致烟草制品的燃烧性降低，辛辣感
、
刺激性和苦味增加；除此以外，这些大分子物质在燃烧过程中转化产生稠环芳烃
、
自由基和氮亚硝胺等有害化合物，还会危害人体健康
(
陶红等，
2008
；赵高坤等，
2020)。
从烟叶的商品等级分类来说，一般烟叶中蛋白质含量越高，烟叶等级越低
。
总体来说，烟叶中蛋白质含量过高对于烟叶吸食品质
、
感官品质
、
安全性和适用性都会产生不利的影响
。
因此，如何降低烟草制品中的蛋白质含量，使其分解为可改善烟叶品质的氨基酸等小分子物质，成为一个重要的研究问题
。
[0003]利用酶的效应可以使烟叶中部分蛋白质水解生成一系列小分子含氮化合物，这些转化产物可与还原糖
、
醇等发生美拉德反应生成可丰富烟草香气量的物质，提升吸食品质与感官质量
。
生物酶制剂作为一类绿色
、
安全
、
高效的生物催化剂，生物酶处理技术在烟叶品质提升方面已展示了巨大的应用潜力
。/>生物酶制剂处理烟叶原料可降解蛋白质等大分子物质，明显改善卷烟香气，减轻青杂气和刺激性，使低等级的烟叶提升1～2个等级
(
陶红等，
2008
；杨庆等，
2014
；黄天辉等，
2015
；杨宗灿等，
2016)。
马玲玲等在烟叶表面筛选出一株能降解淀粉和蛋白质的枯草芽孢杆菌，但是该菌产蛋白酶活性为
14.92U/mL
，活性较低
。
因此开发出产蛋白酶活性高的微生物，对降低烟草中蛋白质
、
提高烟草制品品质有重要意义
。

技术实现思路

[0004]本专利技术的第一个目的在于提供烟草蛋白降解菌，以解决现有技术中烟草源微生物产蛋白酶活性较低的问题
。
[0005]本专利技术的第二个目的在于提供烟草蛋白降解菌的筛选方法，该方法在初筛前使用含有烟草蛋白提取物的富集培养基富集后再经过初筛
、
复筛，能定向
、
快速地筛选出烟草蛋白降解菌
。
[0006]本专利技术的第三个目的在于提供烟草蛋白降解菌在降解烟草制品中蛋白质方面的应用，由烟草蛋白降解菌发酵离心过滤液处理后的烟草制品经近红外光谱检测，其中的游离氨基酸含量显著增加；经烟草蛋白降解菌处理后的烟草制品，通过感官评价后，烟气质量改善明显
。
[0007]为了实现上述目的，本专利技术中烟草蛋白降解菌的技术方案是：
[0008]一种烟草蛋白降解菌，所述烟草蛋白降解菌为贝莱斯芽孢杆菌
(Bacillus velezensis)WH
‑7，保藏编号为
CCTCC NO
：
M 20221923。
[0009]上述技术方案的有益效果在于：本专利技术由植烟土壤中分离出一株烟草蛋白降解菌，经鉴定为贝莱斯芽孢杆菌
(Bacillus velezensis)
，该菌产中性蛋白酶活性经测定可高
达
209.04
±
7.37U/mL。
[0010]为了实现上述目的，本专利技术中烟草蛋白降解菌的筛选方法的技术方案是：
[0011]一种烟草蛋白降解菌的筛选方法，包括以下步骤：
[0012](1)
取样与富集筛选：将待筛选样本置于富集培养基中富集培养，再取富集培养样本接种于初筛培养基中培养；
[0013](2)
菌株复筛：根据透明圈直径和菌落直径比值挑选单菌落，取挑选单菌落的发酵过滤液接种于复筛培养基孵育，测量各菌株发酵上清液的透明圈直径，并测量其蛋白酶活性，得蛋白酶活性最高的复筛菌株
。
[0014]上述技术方案的有益效果在于：本专利技术以蛋白酶活性为作用目标，通过特定富集培养基富集培养后，经初筛培养基
、
复筛培养基二次筛选，定向筛选出烟草源产中性蛋白酶活性较高的烟草蛋白降解菌，操作方法简便
、
节约时间
。
[0015]作为进一步地改进，步骤
(1)
中富集培养基包括：烟草蛋白提取物2～
3g/L
，氯化钠5～
7g/L。
[0016]上述技术方案的有益效果在于：以烟草蛋白提取物为能量来源制备富集培养基，有助于定向富集出可以降解烟草蛋白的菌株，定向的同时节约筛选时间
、
提高筛选效果
。
[0017]作为进一步地改进，步骤
(1)
中初筛培养基包括：脱脂奶粉
10
～
12g/L
，氯化钠5～
6g/L
，酵母粉5～
6g/L
，蛋白胨
10
～
12g/L。
[0018]上述技术方案的有益效果在于：脱脂奶粉中富含丰富的乳蛋白
、
酪蛋白
、
营养丰富，质地均匀
。
将其制成固体平板，体系稳定，且能清楚地分辨和比对透明圈的大小
。
而且脱脂奶粉与烟草蛋白相比不用提取，可直接购买获得，具有方便且成本低廉的特点
。
[0019]作为进一步地改进，步骤
(2)
中复筛培养基包括：酪蛋白2～
3g/L
，氯化钠5～
7g/L
，酵母粉5～
7g/L。
[0020]上述技术方案的有益效果在于：使用该复筛培养基能进一步筛选出产蛋白酶活性较高的菌株，且成分简单
。
[0021]为了实现上述目的，本专利技术中烟草蛋白降解菌在降解烟草制品中蛋白质方面的应用的技术方案是：
[0022]烟草蛋白降解菌在降解烟草制品中蛋白质方面的应用
。
[0023]上述技术方案的有益效果在于：专利技术以蛋白酶活力为作用目标，通过特定烟草蛋白降解菌的筛选方法进行菌株筛选，并将菌株所产生蛋白酶应用在烟草制品上，较好地降低了烟草蛋白的含量
。
测定结果表明，经烟草蛋白培养基筛选所得到的贝莱斯芽孢杆菌
(Bacillus velezensis)WH
‑7菌株所产生中性蛋白酶的酶活力高达
209.04
±
7.37U/mL
，将其应用于烟草制品中，游离氨基酸总量增加了
19
～
66
％，烟气本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种烟草蛋白降解菌，其特征在于：所述烟草蛋白降解菌为贝莱斯芽孢杆菌
(Bacillus velezensis)WH
‑7，保藏编号为
CCTCC NO
：
M 20221923。2.
一种如权利要求1所述的烟草蛋白降解菌的筛选方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)
取样与富集筛选：将待筛选样本置于富集培养基中富集培养，再取富集培养样本接种于初筛培养基中培养；
(2)
菌株复筛：根据透明圈直径和菌落直径比值挑选单菌落，取挑选单菌落的发酵过滤液接种于复筛培养基孵育，测量各菌株发酵上清液的透明圈直径，并测量其蛋白酶活性，得蛋白酶活性最高的复筛菌株
。3.
根据权利要求2所述的烟草蛋白降解菌的筛选方法，其特征在于：步骤
(1)
中富集培养基包括：烟草蛋白提取物2～
3g/L
，氯化钠5～
7g/L。4.
根据权利要求2所述的烟草蛋白降解菌的筛选方法，其特征在于：步骤
(1)
中初筛培养基包括：脱脂奶粉
10
～
12g/L

【专利技术属性】
技术研发人员：叶长文，韩震颖，郝捷，魏雪团，黄阔，李栋，刘丹丹，贺琛，孙志康，吴娜，李青常，范黎，
申请(专利权)人：内蒙古昆明卷烟有限责任公司，
类型：发明
国别省市：