提高脂质体转染试剂的转染效率的方法技术

本发明专利技术提供一种提高脂质体转染试剂的转染效率的方法，涉及生物医学技术领域，其中包含外源化合物在制备提高脂质体转染试剂在巨噬细胞中转染效率产品中的应用，所述外源化合物为

【技术实现步骤摘要】
提高脂质体转染试剂的转染效率的方法


[0001]本专利技术涉及生物医学
，尤其涉及一种提高脂质体转染试剂的转染效率的方法
。

技术介绍

[0002]脂质纳米颗粒，是具有水性核心的亚微米胶囊，例如脂质体，或具有油，固体或无定形核心的纳米颗粒
。
近年来脂质纳米颗粒特别是脂质体和脂质
/
核酸络合纳米颗粒在制药工业和生物医学领域取得了重要的突破
。
由于脂质纳米颗粒具有稳定的载药能力
、
延长药代动力学
、
减少脱靶的副作用以及较强的透过血脑屏障或质膜屏障的递送能力
。
[0003]目前，对于脂质纳米颗粒的递送效率的研究，主要从脂质种类
、
运载效率
、
纳米颗粒特性
、
产品稳定性和药物释放等角度出发
。
不同脂质组分可影响颗粒的大小
、
结构
、
稳定性，同时在核酸运载效率
、
细胞摄取和内体逃逸等方面发挥不同的作用
。
可电离阳离子脂质经过改进可以提高递送效率，聚乙二醇脂质通过影响颗粒尺寸
、
分散性
、
稳定性等，影响脂质纳米颗粒的递送和运载效率
。
另外脂质纳米颗粒的配比优化也可以影响其递送效率
。
[0004]即现有的大多数研究，均是在脂质纳米颗粒自身出发来提高它的递送效率，尚未发现有叠加外源分子来提高脂质纳米颗粒的递送效率的研究
。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是为了解决现有技术中缺乏叠加外源分子来提高脂质纳米颗粒的递送效率研究的技术问题
。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：
[0007]外源化合物在制备提高脂质体转染试剂在巨噬细胞中转染效率产品中的应用
。
[0008]优选的，所述外源化合物为
BP
‑1‑
102、Golotimod、SCH58261、AMG487、Bropirimine
中的其中一种
。
[0009]优选的，所述巨噬细胞为
RAW264.7
细胞
。
[0010]优选的，所述脂质转染试剂包括具备转染递送功能的脂质体纳米颗粒
、
阳离子脂质体
。
[0011]本申请还提供了一种提高脂质体转染试剂在巨噬细胞中转染效率的方法，其特征在于：添加上述所述的外源化合物
。
[0012]优选的，所述外源化合物添加时机为与所述脂质体转染试剂同步添加在巨噬细胞中或在脂质体转染试剂添加入巨噬细胞前添加入脂质体转染试剂中
。
[0013]本申请中通过叠加外源化合物来提高脂质纳米颗粒的递送效率，继而提高巨噬细胞的转染效率，经进一步提高巨噬细胞接到的免疫调节和巨噬细胞介导的药物递送，从而进一步增强目前针对各种恶性实体瘤的肿瘤治疗，包括耐药肿瘤和转移性肿瘤
。
附图说明
[0014]图1为本专利技术一实施方式中目标优选化合物的化学结构式；
[0015]图2为本专利技术实施例1中检测化学发光值的相对表达量对比图；
[0016]图3为本专利技术实施例2中五种目标优选化合物不同浓度下化学发光值的相对表达量对比图
。
具体实施方式
[0017]以下结合具体实施例，对本专利技术作进一步地详细说明
。
[0018]外源化合物在制备提高脂质体转染试剂在巨噬细胞中转染效率产品中的应用
。
[0019]在一实施方式中，所述外源化合物为
BP
‑1‑
102、Golotimod、SCH58261、AMG487、Bropirimine
中的其中一种
。
[0020]所述
BP
‑1‑
102、Golotimod、SCH58261、AMG487、Bropirimine
的化学式如图1所示
。
[0021]在一实施方式中，所述巨噬细胞为
RAW264.7
细胞
[0022]所述脂质转染试剂包括具备转染递送功能的脂质体纳米颗粒
、
阳离子脂质体
。
[0023]以下结合具体实施例对本申请进行阐述：
[0024]实施例1：筛选提高脂质体转染试剂递送效率的化合物
[0025]具体步骤如下：
[0026]步骤一：培养
RAW264.7
细胞
[0027]在一实施方式中，
96
孔白色细胞培养板每孔铺2×
104个细胞过夜培养
。
[0028]步骤二：在细胞中加入小分子化合物
[0029]具体的，将
248
个小分子化合物分别加入培养板，1‑
200
号化合物终浓度为
20
μ
M
，
201
‑
208
号化合物终浓度为4μ
M
，以
Lipo3000
转染组为对照组，每个组设三个重复孔
。
[0030]步骤三：转染荧光素酶报告基因
[0031]具体的，在一实施方式中，以
0.3
μ
L Lipo3000
转染试剂转染
0.2
μ
g
萤火虫荧光素酶报告基因质粒
。
[0032]步骤四：结果检测并分析
[0033]转染后
24h
，加入萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂，以具有化学发光检测功能的酶标仪检测发光值
。
以
Lipo3000
转染组的化学发光值为对照，计算
248
个化合物的相对表达量
。
[0034]请参阅图2，筛选获得
BP
‑1‑
102、Golotimod、SCH58261、AMG487、Bropirimine
五个化合物为目标优选化合物，5个目标优选化合物的化学结构式如图2所示
。
[0035]实施例2：优选化合物提高脂质体递送效率的最佳浓度
[0036]步骤一：将实施例1中5个目标优选化合物分别设置为浓度梯度为0μ
M、0.1
μ
M、1
μ
M、10
μ
M、20
μ
M、50
μ
M、100
μ
M
，加入
96
孔白色细胞培养板
。
[0037]步骤二：以
Lipofectamine3000
转染试剂进行萤火虫荧光素酶报告基因转染，转染
24h
后，检测萤火虫本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
外源化合物在制备提高脂质体转染试剂在巨噬细胞中转染效率产品中的应用
。2.
根据权利要求1所述的外源化合物在制备提高脂质体转染试剂在巨噬细胞中转染效率产品中的应用，其特征在于：所述外源化合物为
BP
‑1‑
102、Golotimod、SCH58261、AMG487、Bropirimine
中的其中一种
。3.
根据权利要求1所述的外源化合物在制备提高脂质体转染试剂在巨噬细胞中转染效率产品中的应用，其特征在于：所述巨噬细胞为
RAW264.7
...

【专利技术属性】
技术研发人员：仪丽荣，李文清，解刚才，蔡娅，
申请(专利权)人：南通大学，
类型：发明
国别省市：