一种斑马鱼骨质疏松模型的构建方法技术

本发明专利技术公开了一种斑马鱼骨质疏松模型的构建方法，本发明专利技术提供的斑马鱼骨质疏松模型的方法构建的斑马鱼骨质疏松模型，其骨形成受到显著抑制，第一椎骨长度形成显著减少，椎骨数目显著降低，在大大提高斑马鱼存活率的同时，保证了模型仍能成功构建。保证了模型仍能成功构建。保证了模型仍能成功构建。

【技术实现步骤摘要】
一种斑马鱼骨质疏松模型的构建方法


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种斑马鱼骨质疏松模型的构建方法。

技术介绍

[0002]骨质疏松症(Osteoporosis，OP)是一种以骨量减少，骨组织微结构恶化，导致骨脆性增加，易发生骨折为特征的全身性骨骼疾病。当前人口老龄化趋势日益加重，OP临床治疗药物仍不能满足需求。OP防治药物的研发成为当前药物研究热点问题。然而现有骨质疏松动物模型存在造模耗时较长、用量大、药物筛选效率低等问题，新兴的模式生物斑马鱼骨质疏松模型日益受到关注。斑马鱼(zebrafish)因其体积小，胚胎透明，易于大规模饲养，繁殖能力强和实验周期短，被认为是药物在体活性筛选的理想模型。由于硬骨鱼和人类在骨骼发育过程中的基因、信号通路有高度同源性，而且与其他的动物模型相比，斑马鱼更易于观察骨骼发育，因而更适合用于骨骼研究。
[0003]现有斑马鱼骨质疏松模型建立方法存在建立方法不一、稳定性差、死亡率高等诸多问题。

技术实现思路

[0004]为弥补现有技术的不足，本专利技术提供了一种斑马鱼骨质疏松模型的方法建立及其应用。经过3～5d开始造模，7d逐量撤去泼尼松龙，提高斑马鱼存活率的同时，保证了模型仍能成功构建，且给阳性药干预后能显著逆转泼尼松龙的抑制作用。
[0005]为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0006]本专利技术的第一方面提供了一种斑马鱼骨质疏松模型的构建方法，所述方法包括对斑马鱼施用糖皮质激素，并通过逐步撤药的方式构建斑马鱼骨质疏松模型。
[0007]进一步，所述糖皮质激素包括泼尼松龙、地塞米松。
[0008]进一步，所述糖皮质激素选自泼尼松龙。
[0009]进一步，所述泼尼松龙的浓度为10
‑
25μM。
[0010]进一步，所述泼尼松龙的浓度为10μM。
[0011]进一步，所述泼尼松龙使用DMSO溶解配制。
[0012]进一步，所述斑马鱼为受精3
‑
5天的斑马鱼。
[0013]进一步，所述斑马鱼为受精3天的斑马鱼。
[0014]进一步，所述逐步撤药的方式包括在第7天弃药。
[0015]进一步，弃药的体系为1/3
‑
1/2体系。
[0016]进一步，弃药的体系为1/3体系。
[0017]进一步，所述逐步撤药的方式还包括在弃药后加入补充溶液。
[0018]进一步，所述补充溶液为DMSO。
[0019]进一步，所述DMSO的浓度为0.1％
‑
0.5％。
[0020]进一步，所述DMSO的浓度为0.2％。
[0021]进一步，所述逐步撤药的方式还包括在第8天再次弃药。
[0022]进一步，弃药的体系为1/3
‑
1/2体系。
[0023]进一步，弃药的体系为1/3体系。
[0024]进一步，所述逐步撤药的方式还包括在弃药后加入补充溶液。
[0025]进一步，所述补充溶液为DMSO。
[0026]进一步，所述DMSO的浓度为0.1％
‑
0.5％。
[0027]进一步，所述DMSO的浓度为0.2％。
[0028]进一步，所述逐步撤药的方式还包括第9天弃所有药液，并清洗除去药液。
[0029]进一步，使用人工海水清洗除去药液。
[0030]本专利技术的第二方面提供了本专利技术第一方面所述的方法构建的斑马鱼骨质疏松模型。
[0031]本专利技术的第三方面提供了一种筛选治疗骨质疏松的药物的方法，所述方法包括将待测试药物施用于本专利技术第二方面所述的斑马鱼骨质疏松模型中。
[0032]进一步，所述方法还包括分析待测试药物的治疗效果，并进行评价，选择能够明显改善斑马鱼模型骨质疏松症状的测试药物。
[0033]本专利技术的第四方面提供了本专利技术第二方面所述的斑马鱼骨质疏松模型在筛选/研发用于治疗/预防骨质疏松的药物中的应用。
[0034]本专利技术的第五方面提供了本专利技术第二方面所述的斑马鱼骨质疏松模型在评价治疗骨质疏松药物的有效性中的应用。
[0035]本专利技术的第六方面提供了本专利技术第二方面所述的斑马鱼骨质疏松模型在研究骨质疏松发病机制中的应用。
[0036]本专利技术的优点和有益效果：
[0037]本专利技术提供的斑马鱼骨质疏松模型的方法构建的斑马鱼骨质疏松模型，其骨形成受到显著抑制，第一椎骨长度形成显著减少，椎骨数目显著降低，在大大提高斑马鱼存活率的同时，保证了模型仍能成功构建。
附图说明
[0038]图1是Pred
‑
3dpf造模法对斑马鱼幼鱼骨形成的影响结果示意图，其中，1A是斑马鱼(9dpf)经钙黄绿素染色后椎骨采集图，1B是斑马鱼(9dpf)经钙黄绿素染色后骨节数统计图，1C是斑马鱼(9dpf)经钙黄绿素染色后第一椎骨长度统计图(,n≥9；##P<0.01，###P<0.001，与空白对照组比较；*P<0.05，与模型组比较)；
[0039]图2是Pred
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5dpf造模法对斑马鱼幼鱼骨形成的影响结果示意图，其中2A是斑马鱼(10dpf)经钙黄绿素染色后椎骨采集图像，2B是斑马鱼(10dpf)经钙黄绿素染色后骨节数统计图，2C是斑马鱼(10dpf)经钙黄绿素染色后第一椎骨长度统计图(,n≥9)；
[0040]图3是Pred
‑
撤药法对斑马鱼幼鱼骨形成的影响结果示意图，其中，3A是斑马鱼(9dpf)经钙黄绿素染色后椎骨采集图，3B是斑马鱼(9dpf)经钙黄绿素染色后骨节数统计图，3C是斑马鱼(9dpf)经钙黄绿素染色后第一椎骨长度统计图(,n≥9；###P<0.001，与空白对照组比较；*P<0.05，***P<0.001，与模型组比较)。
具体实施方式
[0041]下文提供了本说明书中使用的一些术语的定义。除非另有说明，本文中使用的所有技术和科学用语通常具有和本专利技术所属领域的普通技术人员通常理解的意思相同的意思。
[0042]本专利技术提供了一种斑马鱼骨质疏松模型的构建方法，所述方法包括对斑马鱼施用糖皮质激素，并通过逐步撤药的方式构建斑马鱼骨质疏松模型。
[0043]在本专利技术中，骨质疏松症、骨质疏松或OP可以互换使用。
[0044]在本专利技术中，糖皮质激素与Glucocorticoid、肾上腺皮质激素或糖皮质激素药物相同，可以互换使用。糖皮质激素是由肾上腺皮质分泌的一类甾体激素，目前也可由化学方法人工合成，代表性的糖皮质激素例子包括(但并不限于)：地塞米松、倍他米松、泼尼松、泼尼松龙、甲泼尼龙、曲安西龙、氢化可的松和可的松。
[0045]在本专利技术的优选的实施方案中，所述糖皮质激素包括泼尼松龙、地塞米松。
[0046]在本专利技术的具体实施方案中，所述糖皮质激素选本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种斑马鱼骨质疏松模型的构建方法，其特征在于，所述方法包括对斑马鱼施用糖皮质激素，并通过逐步撤药的方式构建斑马鱼骨质疏松模型；优选的，所述糖皮质激素包括泼尼松龙、地塞米松；优选的，所述糖皮质激素选自泼尼松龙；优选的，所述泼尼松龙的浓度为10
‑
25μM；优选的，所述泼尼松龙的浓度为10μM；优选的，所述泼尼松龙使用DMSO溶解配制。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述斑马鱼为受精3
‑
5天的斑马鱼；优选的，所述斑马鱼为受精3天的斑马鱼。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述逐步撤药的方式包括在第7天弃药；优选的，弃药的体系为1/3
‑
1/2体系；优选的，弃药的体系为1/3体系；优选的，所述逐步撤药的方式还包括在弃药后加入补充溶液；优选的，所述补充溶液为DMSO；优选的，所述DMSO的浓度为0.1％
‑
0.5％；优选的，所述DMSO的浓度为0.2％。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：华永庆，毛洪运，刘雨彤，赵心月，王晓仪，
申请(专利权)人：南京中医药大学，
类型：发明
国别省市：