一种高RNA含量的杰丁塞伯林德纳氏酵母菌株及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种高RNA含量的杰丁塞伯林德纳氏酵母菌株及其应用，属于微生物技术领域。所述菌株命名为Cyberlindnera jadinii WB15菌株，于2023年3月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：M 2023385。本发明专利技术的Cyberlindnera jadinii WB15菌株具有高RNA含量，并且具有非常高的传代稳定性，在斜面上传10代，RNA含量稳定在156~162mg/g DCW之间，经单因素方差分析，十代之间产量无显著差异。本发明专利技术通过对发酵培养基进行优化，进一步提高了Cyberlindnera jadinii WB15菌株的RNA含量，可高达为184mg/g DCW。DCW。DCW。

【技术实现步骤摘要】
一种高RNA含量的杰丁塞伯林德纳氏酵母菌株及其应用


[0001]本专利技术属于微生物
，具体地，涉及一种高RNA含量的杰丁塞伯林德纳氏酵母菌株及其应用。

技术介绍

[0002]核糖核酸（Ribonucleic Acid，RNA）是一类对于生物体极其重要的大分子物质，参与基因表达，在蛋白质的合成过程中有很重要的作用。RNA的水解以及衍生物用途广泛，其中5
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肌苷酸（5
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IMP）和5
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鸟苷酸（5
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GMP）及其二钠盐，可以作为食品添加剂应用到食品工业中，增加食品的鲜味；RNA降解产生的核苷酸、核苷和碱基可以作为重要的医药前体，其衍生物在抗击肿瘤和病毒方面有着显著的作用；在食品中添加RNA还可以延缓衰老，有助于人体增强抵抗力。
[0003]目前，工业生产中通常利用酵母发酵来生产RNA，酵母细胞RNA含量占菌体干重的14%
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15%，并且美国食品和药物管理局（FDA）认证产朊假丝酵母Candida utilis为GRAS（generally recognized as safe）微生物，能够用于食品生产。基因组测序结果表明，杰丁塞伯林德纳氏酵母Cyberlindnera jadinii与C. utilis二者基因组在序列水平上高度相似，总体序列同源性为98%，C. jadinii被认为是C.utilis的有性生殖状态，后来将名称统一为杰丁塞伯林德纳氏酵母C. jadinii。C. jadinii富含蛋白质、氨基酸和核糖核酸，能够用于生产乳酸、莫内林、葡甘露聚糖和生物素等多种生物制品。C. jadinii具有以下特点：发酵密度高；对外界环境有较高的耐受性；具有Crabtree
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negative效应，严格好氧条件下不产生乙醇；能够在19~37℃的广谱温度下生长；可以利用廉价的糖蜜和工业废水进行生长；能够利用尿素、硝酸盐和铵盐。C. jadinii因具有这些优良特性，因此在工业生产中具有很大优势。
[0004]选育高RNA酵母菌株在工业生产中具有很大的作用。一般采用物理或化学诱变对菌株进行处理，对诱变菌株进行选育，筛选高产菌株。常压室温等离子体诱变（Atmospheric Room Temperature Plasma，ARTP）作为一种新型诱变策略，通过正常大气压下产生的高活性粒子对细胞造成损伤，诱发细胞启动SOS修复机制，引起微生物发生突变，产生遗传稳定的突变株。ARTP诱变成本低、操作简便、安全性高，对DNA的损伤程度大于传统的诱变方法已经成功地应用到了细菌、真菌、放线菌以及微藻等。早期对诱变后的菌落进行筛选主要是通过在平板上随机挑选，然后在摇瓶中进行发酵并测定结果，耗时耗力，成本较高。目前可以通过高通量筛选技术进行快速筛选，在深孔板中对大多数微生物进行培养或反应，并结合酶标仪可以实现在短时间内对大量的微生物进行快速筛选的目的，大大提高了诱变后筛选突变株的效率。然而，目前高RNA含量的酵母菌菌株资源仍然十分匮乏。

技术实现思路

[0005]为了解决上述技术问题，以Cyberlindnera jadinii MT1903为出发菌株，对其进行ARTP诱变得到突变株，然后在48孔深孔板和摇瓶中进行培养，最终成功筛选得到了高RNA
含量的酵母菌株，从而完成本专利技术。
[0006]本专利技术第一方面提供一种高RNA含量的杰丁塞伯林德纳氏酵母菌株，命名为Cyberlindnera jadinii WB15菌株，于2023年3月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：M 2023385；保藏地址为：中国
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武汉
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武汉大学。本专利技术第二方面提供一种发酵液，包括本专利技术第一方面所述的Cyberlindnera jadinii WB15菌株的活性菌或死亡菌体。
[0007]在本专利技术的一些实施例中，所述发酵液为利用所述Cyberlindnera jadinii WB15菌株进行发酵得到的。进一步地，发酵液经过处理，使得菌体死亡，此时的发酵液同样落入本专利技术的保护范围。本专利技术第三方面提供本专利技术第二方面所述的发酵液在制备RNA产品中的应用。所述RNA产品包括RNA本身及其水解和衍生物，包括但不限于5
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肌苷酸（5
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IMP）和5
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鸟苷酸（5
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GMP）及其二钠盐，RNA降解产生的核苷酸、核苷和碱基。本专利技术第四方面提供一种用于培养本专利技术第一方面所述的Cyberlindnera jadinii WB15菌株的培养基组合，包括用于菌株活化的种子培养基和/或用于菌株发酵的发酵培养基。
[0008]在本专利技术的一些实施方案中，所述种子培养基的组成为：葡萄糖40g/L，玉米浆12~18g/L，KH2PO42.0~2.5g/L，MgSO
4 2.0~3.0g/L，pH 6~7。
[0009]在本专利技术的一些优选实施方案中，所述种子培养基的组成为：葡萄糖40g/L，玉米浆15g/L，KH2PO42.3g/L，MgSO42.5g/L，pH 6.5。
[0010]在本专利技术的一些实施方案中，所述发酵培养基组成为：蔗糖50g/L，酵母抽提物8~15g/L，大豆蛋白胨8~15g/L，KH2PO41.8~2.9g/L，MgSO
4 2.0~3.0g/L，FeSO40.005~0.02g/L，ZnSO40.005~0.02g/L，pH 5~6。
[0011]在本专利技术的一些优选实施方案中，所述发酵培养基组成为：蔗糖50g/L，酵母抽提物10g/L，大豆蛋白胨10g/L，KH2PO42.3g/L，MgSO42.5g/L，FeSO40.01g/L，ZnSO40.01g/L，pH 5.5。
[0012]在本专利技术的另一些优选实施方案中，所述发酵培养基组成为：蔗糖50g/L，酵母抽提物13.4g/L，大豆蛋白胨12.1g/L，KH2PO42.8g/L，MgSO42.5g/L，FeSO40.01g/L，ZnSO40.01g/L，pH 5.5。本专利技术第五方面提供本专利技术第一方面所述的Cyberlindnera jadinii WB15菌株的发酵方法，包括以下步骤：S1，将斜面保存的所述Cyberlindnera jadinii WB15菌株接种至装有种子培养基的摇瓶中，在温度为28~35℃、摇床转速为200~250rpm下培养16~24h，得到种子液；S2，将种子液按照1~5%的接种量，接种至装有发酵培养基的摇瓶中，在温度为28~35℃、摇床转速为200~250rpm下培养6~10h，其中，所述种子培养基的组成为：葡萄糖40g/L，玉米浆12~18g/L，KH2PO42.0~2.5g/L，MgSO
4 2.0~3.0g/L，pH 6~7；在本专利技术的一些优选实施方案中，所述种子培养基的组成为：葡萄糖40g/L，玉米浆15g/L，KH2PO42.3g/L，MgSO4本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高RNA含量的杰丁塞伯林德纳氏酵母菌株，其特征在于，命名为Cyberlindnera jadinii WB15菌株，于2023年3月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：M 2023385；保藏地址为：中国
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武汉
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武汉大学。2.一种发酵液，其特征在于，包括权利要求1所述的Cyberlindnera jadinii WB15菌株的活性菌或死亡菌体。3.权利要求2所述的发酵液在制备RNA产品的应用。4.一种用于培养权利要求1所述的Cyberlindnera jadinii WB15菌株的培养基组合，其特征在于，包括用于菌株活化的种子培养基和/或用于菌株发酵的发酵培养基，所述种子培养基的组成为：葡萄糖40g/L，玉米浆12~18g/L，KH2PO
4 2.0~2.5g/L，MgSO
4 2.0~3.0g/L，pH 6~7；所述发酵培养基组成为：蔗糖50g/L，酵母抽提物8~15g/L，大豆蛋白胨8~15g/L，KH2PO
4 1.8~2.9g/L，MgSO
4 2.0~3.0g/L，FeSO
4 0.005~0.02g/L，ZnSO
4 0.005~0.02g/L，pH 5~6。5.根据权利要求4所述的培养基组合，其特征在于，所述种子培养基的组成为：葡萄糖40g/L，玉米浆15g/L，KH2PO
4 2.3g/L，MgSO
4 2.5g/L，pH 6.5。6.根据权利要求4或5所述的培养基组合，其特征在于，所述发酵培养基组成为：蔗糖50g/L，酵母抽提物8~15g/L，大豆蛋白胨8~15g/L，KH2PO
4 1.8~2.9g/L，MgSO
4 2.0~3.0g/L，FeSO
4 0.005~0.02g/L，ZnSO
4 0.005~0.02g/L，pH 5~6。7.根据权利要求6所述的培养基组合，其特征在于，所述发酵培养基组成为：蔗糖50g/L，酵...

【专利技术属性】
技术研发人员：高淑红，李梦婷，张道敬，杨鹏程，李和晋，刘运策，方俊辉，徐党宇，周一民，
申请(专利权)人：华东理工大学，
类型：发明
国别省市：