一种快速筛选高含量香叶醇樱草糖苷茶树种质的制造技术

本发明专利技术属于茶树种质鉴定利用与新品种选育领域，具体涉及一种快速筛选高含量香叶醇樱草糖苷茶树种质的

【技术实现步骤摘要】
一种快速筛选高含量香叶醇樱草糖苷茶树种质的dCAPS标记引物及方法


[0001]本专利技术属于茶树种质鉴定利用与新品种选育领域，具体涉及一种快速筛选高含量香叶醇樱草糖苷茶树种质的
dCAPS
标记引物及方法
。

技术介绍

[0002]挥发性萜烯醇是构成茶叶花香的重要组分，是茶叶中一类重要的次生代谢物质，该类物质在茶树体内合成后，少部分以游离态存在，绝大多数与单糖
、
二糖等结合形成糖苷的形式存在于茶鲜叶细胞液泡中
。
挥发性萜醇与糖结合后，水溶性增大，稳定性增强，生物活性降低
。
糖苷的存在，一方面可能是有利于其在体内运输，另一方面可能是以一种低毒或脱毒的形式避免其苷元对植物自身造成毒害
。
在茶叶加工过程中，茶叶细胞会遭受破会，体内积累的糖苷会与内源糖苷酶充分接触，并在内源糖苷酶的作用下水解，释放出挥发性萜烯醇，从而使茶叶表现出愉悦的花香
。
[0003]香叶醇是茶树中含有的一种重要的挥发性单萜烯醇，具有温和
、
甜蜜的玫瑰花香，是茶叶中的关键呈香成分之一
。
茶鲜叶中的香叶醇主要以香叶醇樱草糖苷形式存在，在红茶揉捻和发酵过程中，叶细胞会发生破碎，香叶醇樱草糖苷会在内源糖苷酶的水解下产生大量的香叶醇，这正是高品质红茶具有愉悦玫瑰花香的重要原因
。
[0004]传统方法在筛选花香型茶树种质时采用的是直接鉴定法，该方法首先需要扩繁待鉴定的茶树种质获得一定数目的茶苗，然后定植茶苗，待定植茶苗正常生长至可开采树龄，采摘茶鲜叶制作茶叶，最后根据感官审评结果判定该种质是否属于花香型茶树种质，该方法鉴定结果易受栽培
、
加工等多重因素影响，需要重复鉴定
。
直接鉴定法从种植茶树到获得鉴定结果往往需要多年
(
至少5～6年
)
，存在鉴定周期长，鉴定程序复杂，需要耗费大量的人力
、
物力及财力的缺点
。
[0005]分子标记辅助育种是利用分子标记与决定目标性状基因紧密连锁的特点，通过检测分子标记，即可检测到目的基因的存在，达到选择目标性状的目的，具有快速
、
准确
、
不受环境条件干扰的优点
。
分子标记辅助育种可以缩短育种年限，加快育种进程，提高育种效率，弥补传统常规育种方法的缺点
。
我们基于简化基因组测序技术
(SLAF
‑
seq)
及全基因组关联分析法
(GWAS)
在茶树基因组
(http://tpia.teaplants.cn)
的
Scaffold349
上鉴定到6个
SNP
位点与香叶醇樱草糖苷含量相关
(
碱基位置分别为
3542803、3543009、3543014、3543021、3543061、3543082)
，当6个
SNP
位点基因型分别为
A、A、A、T、T、A
时，其对应的种质为香叶醇樱草糖苷高含量种质，当6个
SNP
位点基因型分别为
G、G、G、G、C、G
时，其对应的种质为香叶醇樱草糖苷低含量种质
。
进一步研究发现，在该区段
8.6kb
区域附近存在1个异戊烯基二磷酸合酶基因
(TEA023826.1)
，该酶正是催化异戊烯基焦磷酸
(IPP)
与其异构体二甲丙烯焦磷酸
(DMAPP)
生成香叶基焦磷酸
(GPP)
的关键酶，该步骤也是茶树体内合成香叶醇的关键步骤
。
此外，在该区段
10.9kb
和
85.8kb
附近区域分别存在1个核糖体蛋白基因
(TEA023811.1)
和1个
RNA
聚合酶
II
转录亚基基因
(TEA023801.1)
，转录组测序表明这2个基
因在极端高含量香叶醇樱草糖苷和极端低含量香叶醇樱草糖苷材料中均表现显著差异表达
。
上述3个基因均处在6个
SNP
变异区段的
LD
区间内
(3
个基因与6个
SNP
位点存在连锁不平衡
)
，推测基因
TEA023811.1
和基因
TEA023801.1
极有可能参与了异戊烯基二磷酸合酶基因
TEA023826.1
的转录和翻译，从而导致了香叶醇樱草糖苷代谢和累积的变化
。
[0006]基于上述发现，我们利用
Scaffold349
上的6个
SNP
变异区段附近
320bp
的
DNA
序列设计了1对
dCAPS
标记引物，利用该引物对不同茶树种质进行
DNA
基因型分析，根据分型结果即可将香叶醇樱草糖苷含量高的茶树种质筛选出来
。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一种快速筛选高含量香叶醇樱草糖苷茶树种质的
dCAPS
标记引物及方法
。
[0008]为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种用于快速筛选高含量香叶醇樱草糖苷茶树种质的
dCAPS
标记引物，所述
dCAPS
标记引物核苷酸序列为：上游引物：5’‑
TCGTGTGGCCTCAATTGCCT
‑3’
，下游引物：5’‑
ACACCGACAAATGTGACAGA
‑3’
。
[0009]上述一种
dCAPS
标记引物在筛选高含量香叶醇樱草糖苷茶树种质中的应用
。
[0010]一种快速筛选高含量香叶醇樱草糖苷茶树种质的分子标记方法，其包括以下步骤：
1)
提取待测茶树种质的叶片基因组
DNA
；
2)
以提取的叶片基因组
DNA
为模板，用
dCAPS
标记引物进行
PCR
扩增，得到
PCR
产物；
3)
利用限制性内切酶
MfeⅠ酶切
PCR
产物，得到酶切产物；
4)
将酶切产物进行
1.0
％琼脂糖凝胶电泳，得到电泳图谱；
5)
将待测茶树种质电泳图谱与香叶醇樱草糖苷高含量茶树种质标准电泳图谱比较，如果图谱一致，则判定该待测茶树种质为高含量香叶醇樱草糖苷茶树种质；所述
dCAPS
标记引物核苷酸序列为：上游引物：5’‑<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种用于快速筛选高含量香叶醇樱草糖苷茶树种质的
dCAPS
标记引物，其特征在于：所述
dCAPS
标记引物核苷酸序列为：上游引物：5’‑
TCGTGTGGCCTCAATTGCCT
‑3’
，下游引物：5’‑
ACACCGACAAATGTGACAGA
‑3’
。2.
如权利要求1所述的
dCAPS
标记引物在筛选高含量香叶醇樱草糖苷茶树种质中的应用
。3.
一种快速筛选高含量香叶醇樱草糖苷茶树种质的分子标记方法，其特征在于：包括以下步骤：1）提取待测茶树种质的叶片基因组
DNA
；2）以提取的叶片基因组
DNA
为模板，用
dCAPS
标记引物进行
PCR
扩增，得到
PCR
产物；3）利用限制性内切酶
Mfe
ꢀⅠ
酶切
PCR
产物，得到酶切产物；4）将酶切产物进行
1.0%
琼脂糖凝胶电泳，得到电泳图谱；5）将待测茶树种质电泳图谱与香叶醇樱草糖苷高含量茶树种质标准电泳图谱比较，如果图谱一致，则判定该待测茶树种质为高含量香叶醇樱草糖苷茶树种质；所述
dCAPS
标记引物核苷酸序列为：上游引物：5’‑
TCGTGTGGCCTCAATTGCCT
‑3’
，下游引物：5’‑
ACACCGACAAATGTGACAGA
‑3’
。4.
根据权利要求3所述的分子标记方法，其特征在于：所述
PCR
扩增的反应体系为：
ddH2O 16
μ
L
，

【专利技术属性】
技术研发人员：王让剑，杨军，张力岚，高香凤，
申请(专利权)人：福建省农业科学院茶叶研究所，
类型：发明
国别省市：