一种快速测定环境水中马兜铃酸的方法技术

本发明专利技术公开了一种快速测定环境水中马兜铃酸的方法，该方法采用超声辅助分散液

【技术实现步骤摘要】
一种快速测定环境水中马兜铃酸的方法


[0001]本专利技术涉及检测
，特别涉及一种快速测定环境水中马兜铃酸的方法。

技术介绍

[0002]马兜铃酸(AAs)是广泛存在于马兜铃科植物中的硝基菲类化合物，AA
‑
I和AA
‑
II是其中最常见的两种，结构式如下所示。早期因该类物质具有抗肿瘤活性、抗炎等作用，含AAs的中药在医药上长期广泛应用。近年来，马兜铃酸类物质被明确证实具有肾毒性、致癌和致基因突变作用，被认为是导致马兜铃酸肾病(AAN)、巴尔干地方性肾病(BEN)和慢性肾脏病(CKD)的主要原因之一。许多国家包括美国、英国、德国、澳大利亚等已明确禁止销售含有AAs的草药。
[0003][0004]目前，AAs的检测方法主要包括高效液相色谱
‑
紫外检测法(HPLC
‑
UV)、高效液相色谱
‑
荧光检测法(HPLC
‑
FLD)，液相色谱
‑
质谱法(LC
‑
MS)和毛细管电泳法(CE)等。其中，HPLC
‑
UV法是马兜铃酸测定最常用的方法，也是中国药典收录的方法，但该法检测灵敏度较低，主要用于单味中药中较高浓度的AAs的检测。对于基质复杂、AAs含量低的制剂，借助选择性和灵敏度更高的LC
‑
MS。遗憾的是，由于AAs的电离效率低，质谱分析受到限制。使用LC
‑
MS进行AAs分析的检测灵敏度并不比使用HPLC
‑
UV的检测灵敏度高。此外，由于CE在AAs分析中的重现性差，也很少使用。
[0005]Wan Chan等[W.Chan,N.M.W.Li,C.K.Chan,J.Liu,K.L.Deng,Y.N.Wang,B.E.N.Quantitation of aristolochic acids in corn,wheat grain,and soil samples collected in Serbia:identifying a novel exposure pathway in the etiology of Balkan endemic nephropathy,J.Agric.Food Chem.64(2016)5928
‑
5934.]提出了在酸溶液中将锌粉或铁粉将非荧光的马兜铃酸A还原成荧光的马兜铃内酰胺A然后再用HPLC
‑
FLD或HPLC
‑
MS进行测定的方法，该法选择性好、灵敏度高，且不需用到昂贵的质谱仪，但是该法需要经过提取、还原衍生、SPE净化等诸多步骤，繁琐费时。
[0006]通常，由于分析物的浓度低，且样品中存在大量干扰物，因此在测定分析物之前必须对样品进行预浓缩和净化。液
‑
液萃取(LLE)是分离和提取马兜铃酸最常用的预处理方法。然而，LLE需要消耗大量有机溶剂，且难以实现分析物的富集和纯化。固相萃取(SPE)和
磁性固相萃取(MSPE)与HPLC或LC
‑
MS联用可成功地用于测定药用植物中的AAs。然而，这些方法通常需要使用固相萃取柱或合成特定的吸附材料。

技术实现思路

[0007]为此，本专利技术提供了一种快速测定环境水中马兜铃酸的方法，包含如下步骤：
[0008](1)标准液配置：分别将AA
‑
I和AA
‑
II溶解在乙腈中，配置成AA
‑
I标准储备液和AA
‑
II标准储备液；AA
‑
I标准储备液和AA
‑
II标准储备液分别用乙腈稀释成AA
‑
I标准液和AA
‑
II标准液；
[0009](2)分散液
‑
液微萃取法：分别将AA
‑
I标准液、AA
‑
II标准液和待测的样品溶液作为料液相溶液置于离心管中，向离心管中加入乙腈和三氯甲烷的混合溶剂，加料完成后摇匀，混合物恒温至40～60℃超声处理，处理后离心，沉积相移出后用氮气吹干，在加入乙腈复溶获得色谱分析溶液；
[0010](3)色谱分析：分别将所述步骤(2)采用AA
‑
I标准液、AA
‑
II标准液或待测的样品溶液制得的色谱分析溶液进行色谱分析，色谱柱：InertSustain C18柱(4.6mm
×
250mm，5μm)；温度：30℃；流动相：乙腈
‑
0.5％醋酸溶液(45:55，v/v)；流速：1ml/min；进样量：4μL；检测波长：254nm。
[0011]进一步地，所述AA
‑
I标准储备液中AA
‑
I的浓度为400μg/mL；AA
‑
II标准储备液中AA
‑
II的浓度为500μg/mL；所述AA
‑
I标准液中AA
‑
I的浓度为0.01
‑
2.00μg/mL，AA
‑
II标准液中AA
‑
II的浓度为0.01
‑
2.00μg/mL。
[0012]进一步地，所述步骤(2)中，每5mL所述料液相溶液加入600μL所述混合溶剂，后续加入50μL乙腈复溶；所述混合溶剂中乙腈和三氯甲烷的体积比为乙腈：三氯甲烷＝4～6:1。
[0013]进一步地，所述沉积相移出后用55～60℃的氮气吹干。
[0014]进一步地，所述混合物恒温至40～60℃超声处理3～4min，处理后4000rpm离心3～4min；超声波功率为100W，频率为40KHz。
[0015]进一步地，加入乙腈和三氯甲烷的混合溶剂前先将所述料液相溶液的pH调整至1～3。
[0016]本专利技术的有益效果在于：本专利技术所述方法可实现AA
‑
I和AA
‑
II的同时萃取，富集因子高，预处理时间短，提取溶剂消耗少。较高的富集因子确保该方法的灵敏度比现有技术中使用类似紫外检测器的方法高1
‑
2个数量级。
附图说明
[0017]图1为萃取溶剂体积对富集因子的影响(萃取条件：料液相体积：5ml；萃取溶剂：氯仿；分散剂：乙腈；分散剂体积：500μL；超声时间：2分钟)；
[0018]图2为分散剂溶剂体积对富集因子的影响(萃取条件：料液相体积：5ml；萃取溶剂：氯仿；萃取溶剂体积：100μL；分散剂：乙腈；超声时间：2分钟)；
[0019]图3为超声波时间对富集因子的影响(萃取条件：料液相体积5ml；萃取溶剂：氯仿；萃取溶剂体积：100μL；分散剂溶剂：乙腈；分散剂体积：500μL)；
[0020]图4为样品溶液pH值对富集因子的影响(萃取条件：料液相体积5ml；萃取溶剂：氯仿；萃取溶剂体积：100μL；分散剂本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种快速测定环境水中马兜铃酸的方法，其特征在于，包含如下步骤：(1)标准液配置：分别将AA
‑
I和AA
‑
II溶解在乙腈中，配置成AA
‑
I标准储备液和AA
‑
II标准储备液；AA
‑
I标准储备液和AA
‑
II标准储备液分别用乙腈稀释成AA
‑
I标准液和AA
‑
II标准液；(2)分散液
‑
液微萃取法：分别将AA
‑
I标准液、AA
‑
II标准液和待测的样品溶液作为料液相溶液置于离心管中，向离心管中加入乙腈和三氯甲烷的混合溶剂，加料完成后摇匀，混合物恒温至40～60℃超声处理，处理后离心，沉积相移出后用氮气吹干，在加入乙腈复溶获得色谱分析溶液；(3)色谱分析：分别将所述步骤(2)采用AA
‑
I标准液、AA
‑
II标准液或待测的样品溶液制得的色谱分析溶液进行色谱分析，色谱柱：InertSustain C18柱(4.6mm
×
250mm，5μm)；温度：30℃；流动相：乙腈
‑
0.5％醋酸溶液(45:55，v/v)；流速：1ml/min；进样量：4μL；检测波长：254nm。2.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：张朝辉，姜放军，葛玲瑞，文星星，丁芳林，黄嘉苗，
申请(专利权)人：湖南生物机电职业技术学院，
类型：发明
国别省市：