多肽蛋白复合物在抑制哈维氏弧菌和大菱鲆弧菌上的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种多肽蛋白复合物在抑制哈维氏弧菌和大菱鲆弧菌上的应用，属于水产动物营养学领域，所述的多肽蛋白复合物的制作方法是：在鳕鱼肌肉先添加碱性蛋白酶Alcalase2.4L，添加量为每100g鱼肉中添加1.8

【技术实现步骤摘要】
多肽蛋白复合物在抑制哈维氏弧菌和大菱鲆弧菌上的应用


[0001]本专利技术属于水产动物营养学领域，具体涉及一种多肽蛋白复合物在抑制哈维氏弧菌和大菱鲆弧菌上的应用。

技术介绍

[0002]抗生素作为一种饲料添加剂，曾经在包括水产养殖业在内的整个养殖行业普遍使用，它能够起到促进生长、降低养殖动物发病率和死亡率的作用。但是，抗生素的过度使用也导致养殖动物药物残留、耐药性等问题，并最终危害人类的身体健康。因此，世界上许多国家纷纷颁布了禁止抗生素在饲料中使用的禁令。
[0003]对饲料企业的“禁抗”，导致其对抗生素替抗产品的需求增加，其中抗菌肽是一种重要的选择，它能够杀死某些病原菌，起到预防病原菌感染的功能，但是它的分离、纯化和鉴定过程复杂，因此，选择一种具有抗菌作用的多肽蛋白复合物，既起到抗菌肽的抗菌作用，也省去复杂的分离、纯化和鉴定步骤，成为一种非常有前景的方法。
[0004]弧菌包括哈维氏弧菌、大菱鲆弧菌、鳗弧菌等，可以感染凡纳滨对虾、大菱鲆、斜带石斑鱼等养殖动物，是引起海水养殖中鱼虾弧菌病常见的一种病原菌，一般会导致养殖动物眼球突出、肠胃炎、肌肉溃烂等症状，最终影响养殖动物的成活和经济效益。因此，研究对弧菌的抑菌作用，对减少海水养殖鱼虾的病害，提高成活率，具有重要意义。

技术实现思路

[0005]本专利技术要解决的技术问题是提供一种多肽蛋白复合物在抑制哈维氏弧菌和大菱鲆弧菌上的应用。本专利技术针对抗生素禁用后哈维氏弧菌及大菱鲆弧菌引起的鱼虾病害频繁爆发的问题，对我们已有的制备多肽蛋白复合物的工艺流程进行改进，进而研发出一种可有效抑制哈维氏弧菌和大菱鲆弧菌的多肽蛋白复合物。
[0006]本专利技术是按以下技术方案实现的：
[0007]多肽蛋白复合物在抑制哈维氏弧菌和大菱鲆弧菌上的应用，所述的多肽蛋白复合物的制作方法是将鳕鱼肌肉进行酶解，具体方法如下：在鳕鱼肌肉先添加碱性蛋白酶Alcalase2.4L，添加量为每100g鱼肉中添加1.8
‑
2ml，水解时间为55
‑
60min，然后加入风味蛋白酶Flavourzyme500MG，添加量为每100g鱼肉中添加1.2
‑
1.5g，再继续水解90
‑
100min；整个酶解过程，反应温度保持在54
‑
56℃
。
[0008]进一步，所述鳕鱼肌肉进行酶解时加入的鳕鱼肌肉和水的比例：每1g鳕鱼肌肉中加入1.5ml水。
[0009]进一步，酶解的起始pH为9.0。
[0010]进一步，酶解后获得的酶解液在50℃旋转蒸发到水分含量为50％时，采用低温冷冻干燥获得多肽蛋白复合物冻干粉。
[0011]进一步，所述多肽蛋白复合物化学组成为，粗蛋白含量85％以上，粗脂肪含量低于0.5％，灰分含量低于10％；多肽蛋白复合物分子量分布：>10,000Da，0.12％；10,000
‑
5,
000Da，0.89％；5,000
‑
3,000Da，1.94％；3,000
‑
2,000Da，4.13％；2,000
‑
1,000Da，21.86％；1,000
‑
500Da，21.59％；500
‑
200Da，43.29％；<200Da，6.23％。
[0012]本专利技术与现有技术相比的有益效果：
[0013](1)本专利技术与现有技术相比，省去对抗菌肽的分离、纯化和鉴定的复杂过程，保证抗菌作用的前提上，降低成本，从而保证可作为抗菌剂在水产饲料中大规模应用。
[0014](2)本专利技术与现有抗生素相比，虽然抑菌效果没有抗生素明显，但是不会在水产动物体内产生耐药性，不会在水产动物体内产生超级耐药菌，更不会随着人类食用水产动物而富集到人体内，从而保证水产品的安全性。
[0015](3)本专利技术与水产饲料中常用的酶解鱼溶浆等相比，制备多肽蛋白的过程更加温和，既保留了其中的抗菌肽功能，有没有额外过多增加成本，从而实现其在水产饲料中的大规模使用，可操作性更强，成本可控。
附图说明
[0016]图1打孔法抑菌测定500和1000mg/ml的多肽蛋白复合物溶液对哈维氏弧菌的抑制作用；
[0017]图2打孔法抑菌测定1000和1500mg/ml的多肽蛋白复合物溶液对哈维氏弧菌的抑制作用；
[0018]图3打孔法抑菌测定500、1000和1500mg/ml的多肽蛋白复合物溶液对大菱鲆弧菌的抑制作用；
[0019]图4打孔法抑菌测定500、1000和1500mg/ml的多肽蛋白复合物溶液对鳗弧菌的抑制作用。
具体实施方案
[0020]下面通过具体实施例，来进一步说明本专利技术的技术方案，但本专利技术的保护范围不受实施例任何形式上的限制：
[0021]实施例1多肽蛋白复合物的制备工艺
[0022]将冰冻的太平洋狭鳕鱼放入50℃烘箱中解冻，然后去除鱼头、内脏、鱼皮、鱼骨等，并用水清洗干净鱼的肌肉部分。将鱼的肌肉用粉碎机中粉碎，让后以每100g肌肉(湿重)中加入150ml纯净水，在发酵罐中升温至90℃后15min，使肌肉内的内源酶灭活。将发酵罐中的肌肉和水混合物冷却到室温，调节pH，使混合液的pH达到9.0，然后在每100g肌肉中加入2ml碱性蛋白酶Alcalase2.4L，充分混匀后，在55℃酶解60min；打开发酵罐，再加入风味蛋白酶Flavourzyme 500MG，添加量为每100g鱼肉中添加1.5g，再继续酶解90分钟。将发酵罐快速升温到90℃，并保持10min时间，使所用的碱性蛋白酶Alcalase2.4L和风胃蛋白酶Flavourzyme 500MG失活。将灭活后的酶解液，利用旋转蒸发方式，在50℃下进行蒸馏，将酶解液的水分含量降低到50％时，采用低温冷冻干燥10h。
[0023]多肽蛋白复合物化学组成为，粗蛋白含量85％以上，粗脂肪含量低于0.5％，灰分含量低于10％。
[0024]通过本制备工艺，多肽蛋白复合物分子量99％以上均低于10000Da，且低于500Da的达到50％。具体分子量分布为：>10000Da，0.12％；10000
‑
5000Da，0.89％；5000
‑
3000Da，
1.94％；3000
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2000Da，4.13％；2000
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1000Da，21.86％；1000
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500Da，21.59％；500
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200Da，43.29％；<200Da，6.23％。
[0025]实施例2利用打孔法观察多肽蛋白复合物对哈维氏弧菌、大菱鲆弧菌和鳗弧菌的抑菌作用
[0026](1)哈维氏弧菌、大菱鲆弧菌和鳗弧菌的菌液制备
[0027]首先，从
‑
80℃冰箱中取出保本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.多肽蛋白复合物在抑制哈维氏弧菌和大菱鲆弧菌上的应用，其特征在于，所述的多肽蛋白复合物的制作方法是将鳕鱼肌肉进行酶解，具体方法如下：在鳕鱼肌肉中先添加碱性蛋白酶Alcalase2.4L，添加量为每100g鳕鱼肌肉中添加1.8
‑
2.0ml，水解时间为55
‑
60min，然后加入风味蛋白酶Flavourzyme 500MG，添加量为每100g鳕鱼肌肉中添加1.2
‑
1.5g，再继续水解90
‑
100min；整个酶解过程，反应温度保持在54
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56℃。2.根据权利要求1所述的多肽蛋白复合物在抑制哈维氏弧菌和大菱鲆弧菌上的应用，其特征在于，酶解时加入的鳕鱼肌肉和水的比例：每1g鳕鱼肌肉中加入1.5ml水。3.根据权利要求1所述的多肽蛋白复合物在抑制哈维氏弧菌和大菱鲆弧菌上的应用，其特征在于，酶解的起始pH为9.0。4.根据权利要求1所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：卫育良，于永祥，马强，王璐，徐后国，梁萌青，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院黄海水产研究所，
类型：发明
国别省市：