一种简便高效的中期染色体提取的方法技术

本发明专利技术属于染色体提取技术领域，具体公开了一种简便高效的中期染色体提取的方法

【技术实现步骤摘要】
一种简便高效的中期染色体提取的方法


[0001]本专利技术涉及染色体提取
，具体涉及一种适用于哺乳动物细胞系所有尺寸中期染色体的简单高效的提取方法
。

技术介绍

[0002]研究中期染色体的结构一直是一个重要而基础的生物学问题，至今已有超过
100
年的研究历史
。
超高分辨显微成像解析中期染色体的结构
、
染色体的蛋白质和
RNA
组成
、
中期染色体核小体的定位和分布以及相关组蛋白的变化情况等研究方向都需要纯化的高质量中期染色体样本
。
提取中期染色体是研究其结构和组成的必要条件之一，然而获得足够数量
、
高纯度
、
完整形态的中期染色体仍是一个挑战
。
[0003]目前常用的中期染色体提取方法主要是离心法，包括多步离心和蔗糖梯度离心两种
。
多步离心是通过不同的离心力和多次的离心，逐步将残余的细胞碎片和细胞核去除，从而获得中期染色体，该方法涉及的多次离心操作会导致样品本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种简便高效的中期染色体提取的方法，其特征在于：包括以下步骤：
S1.
收集中期细胞，离心，弃上清；
S2.
在沉淀中加入
KCl
溶液，重悬细胞，静置进行低渗处理；
S3.
低渗结束后离心弃上清，加入
PA buffer
，混匀；所述
PA buffer
含有：
Tris
‑
HCl、EDTA、EGTA、KCl、NaCl、
苯甲磺酰氟
、
毛地黄皂苷
、
精胺和亚精胺；
S4.
将细胞悬液转移到匀浆器内进行匀浆处理；匀浆结束后离心，收集上清，沉淀用
PA buffer
重悬，离心合并上清；
S5.
将上清进行两次滤膜过滤，滤膜孔径在5‑
10
μ
m
且第一次过滤的滤膜孔径大于第二次过滤；
S6.
在滤液中加入
NaCl
和
Triton X
‑
100
，然后冰浴；
S7.
冰浴结束后离心，回收沉淀，得到纯净的中期染色体
。2.
根据权利要求1所述的简便高效的中期染色体提取的方法，其特征在于：步骤
S2
中，采用
75mM
的
KCl
溶液，低渗处理
20
‑
40min。3.
根据权利要求1所述的简便高效的中期染色体提取的方法，其特征在于：步骤
S3
中，所述
...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶碧姗，张乐，李鑫辉，邵志峰，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：