一种4型禽腺病毒亚单位疫苗及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种4型禽腺病毒亚单位疫苗及其制备方法和应用，属于生物医药技术领域。本发明专利技术用致病性较强毒株的Hexon

【技术实现步骤摘要】
一种4型禽腺病毒亚单位疫苗及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，尤其涉及一种4型禽腺病毒亚单位疫苗及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]4型禽腺病毒(Fowl adenovirus 4，FAdV
‑
4)属于Ⅰ群禽腺病毒的C种，引起鸡的肝炎
‑
心包积液综合征(hepatitis
‑
hydropericardium syndrome，HHS)，肉鸡、蛋鸡均可感染，鸡群感染该病毒后表现为突然死亡，死亡率与鸡的日龄有关，日龄越小死亡率越高。HHS给家禽养殖业造成了巨大的经济损失，为了有效控制该病，生产安全有效的疫苗是预防该病的主要措施。目前，预防该病的灭活疫苗、减毒疫苗和亚单位疫苗均有报道。例如将肝组织匀浆液灭活后作为疫苗进行免疫；又如用鸡胚或QT
‑
35细胞连续传代来得到毒力减弱的病毒作为疫苗进行免疫。但是，灭活疫苗和减毒活疫苗存在灭活不完全、毒力返强的风险，可能导致疾病的暴发，而亚单位疫苗不含病毒的核酸物质，安全性较高，且可以消除不完全灭活和致弱带来的疾病暴发的风险。因此，如何制备一种保护效力高且能有效抑制机体排毒的禽腺病毒亚单位疫苗是本领域亟待解决的关键问题之一。

技术实现思路

[0003]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种4型禽腺病毒亚单位疫苗，免疫原性强，能有效抑制病毒复制和机体排毒，可给鸡群提供100％保护率。
[0004]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：r/>[0005]本专利技术提供了一种4型禽腺病毒亚单位疫苗，所述疫苗的活性成分为Hexon
‑
L1蛋白和Fiber2蛋白，所述Hexon
‑
L1蛋白和Fiber2蛋白的质量比为1～2:1～2。
[0006]优选的，编码所述Hexon
‑
L1蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0007]优选的，编码所述Fiber2蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0008]本专利技术还提供了上述4型禽腺病毒亚单位疫苗的制备方法，包括以下步骤：Hexon
‑
L1蛋白溶液和Fiber2蛋白溶液按比例混合后，再与吐温80混合，作为水相；在搅拌条件下，将水相缓慢加入白油中，混合后继续搅拌，得到亚单位疫苗。
[0009]优选的，所述Hexon
‑
L1蛋白溶液的浓度为0.3～0.4mg/mL，所述Fiber2蛋白溶液的浓度为0.3～0.4mg/mL。
[0010]优选的，所述Hexon
‑
L1蛋白溶液和Fiber2蛋白溶液的体积比为1～2:1～2。
[0011]优选的，蛋白混合物与吐温80的混合体积比为20～30:1。
[0012]优选的，所述水相与白油的体积比为1:2～3。
[0013]优选的，所述混合后继续搅拌的时间为0.5～1h。
[0014]本专利技术还提供了上述4型禽腺病毒亚单位疫苗在制备用于预防和/或治疗鸡肝炎
‑
心包积液综合征的疫苗中的应用。
[0015]本专利技术的有益效果：
[0016]本专利技术制备的双组分亚单位疫苗免疫原性强，能有效抑制病毒复制和机体排毒，减轻病变，有效保护SPF鸡，具有良好的推广应用前景。该疫苗只用了Hexon
‑
L1蛋白和Fiber2蛋白，在每种蛋白含量为20μg时，即可给鸡群提供100％保护率。
附图说明
[0017]图1：攻毒后鸡存活率结果；
[0018]图2：鸡体重增长率变化结果；
[0019]图3：对照组及免疫组鸡剖检变化结果；
[0020]图4：病理组织学变化(HE染色，400
×
)结果；
[0021]图5：免疫组化分析(100
×
)结果；
[0022]图6：对照组部分鸡只各组织脏器电泳图；
[0023]图7：抗体水平的变化结果。
具体实施方式
[0024]本专利技术提供了一种4型禽腺病毒亚单位疫苗，所述疫苗的活性成分为Hexon
‑
L1蛋白和Fiber2蛋白，所述Hexon
‑
L1蛋白和Fiber2蛋白的质量比为1～2:1～2，优选的，所述Hexon
‑
L1蛋白和Fiber2蛋白的质量比为1:1。
[0025]4型禽腺病毒的壳粒共252个，呈二十面体对称，包括240个六邻体(Hexon)和12个五邻体(Penton)。本专利技术采用Hexon的最保守区域L1区和含有特异性抗原决定簇的Fiber2蛋白进行表达纯化后，将两种蛋白按比例混合后制成亚单位疫苗。在本专利技术中，编码所述Hexon
‑
L1蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，编码所述Fiber2蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0026]本专利技术还提供了4型禽腺病毒亚单位疫苗的制备方法，包括以下步骤：Hexon
‑
L1蛋白溶液和Fiber2蛋白溶液按比例混合后，再与吐温80混合，作为水相；在搅拌条件下，将水相缓慢加入白油中，混合后继续搅拌，得到亚单位疫苗。
[0027]在本专利技术中，所述Hexon
‑
L1蛋白溶液的浓度为0.3～0.4mg/mL，所述Fiber2蛋白溶液的浓度为0.3～0.4mg/mL，所述Hexon
‑
L1蛋白溶液和Fiber2蛋白溶液的体积比为1～2:1～2，优选为1:1。本专利技术所述Hexon
‑
L1蛋白溶液和Fiber2蛋白溶液的体积比根据Hexon
‑
L1蛋白和Fiber2蛋白的质量比确定。
[0028]在本专利技术中，Hexon
‑
L1蛋白溶液和Fiber2蛋白溶液按比例混合后得到蛋白混合物，蛋白混合物再与吐温80混合，置恒温振荡器中充分混匀，作为水相。所述蛋白混合物与吐温80的混合体积比为20～30:1，优选为23～26:1，更优选为24～25:1。所述恒温振荡器温度为37℃，转速为120r/min。
[0029]在本专利技术中，以白油作为佐剂，将水相缓慢加入白油中，边加边搅拌，水相加完后，继续充分搅拌，得到亚单位疫苗。本专利技术所述水相与白油的体积比为1:2～3，优选为1:2.5。本专利技术所述混合后继续搅拌时间为0.5～1h。
[0030]本专利技术还限定了上述4型禽腺病毒亚单位疫苗在制备用于预防和/或治疗鸡肝炎
‑
心包积液综合征的疫苗中的应用。
[0031]下面将结合本专利技术中的实施例，对本专利技术中的技术方案进行清楚、完整地描述。显
然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0032]下述实施例中，如本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种4型禽腺病毒亚单位疫苗，其特征在于，所述疫苗的活性成分为Hexon
‑
L1蛋白和Fiber2蛋白，所述Hexon
‑
L1蛋白和Fiber2蛋白的质量比为1～2:1～2。2.根据权利要求1所述的4型禽腺病毒亚单位疫苗，其特征在于，编码所述Hexon
‑
L1蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。3.根据权利要求1所述的4型禽腺病毒亚单位疫苗，其特征在于，编码所述Fiber2蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。4.权利要求1～3任意一项所述4型禽腺病毒亚单位疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：Hexon
‑
L1蛋白溶液和Fiber2蛋白溶液按比例混合后，再与吐温80混合，作为水相；在搅拌条件下，将水相缓慢加入白油中，混合后继续搅拌，得到亚...

【专利技术属性】
技术研发人员：司振书，陈乐乐，王凯莉，刘成，李玉保，路建彪，曹胜亮，
申请(专利权)人：聊城大学，
类型：发明
国别省市：