一种鸡制造技术

本发明专利技术公开了一种鸡

【技术实现步骤摘要】
一种鸡AGRP多克隆抗体及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及多克隆抗体
，尤其是涉及一种鸡
AGRP
多克隆抗体及其制备方法和应用
。

技术介绍

[0002]刺鼠相关蛋白
(Agouti related neuropeptide,AGRP)
最初是
1997
年人们在寻找与刺豚鼠毛色特征相关的基因
—Agouti
基因的同源基因时发现的，后人通过荧光原位杂交发现
AGRP
在下丘脑内侧基底部的弓状核
(arcuate nucleus
，
Arc)
内的神经元中，并与神经肽
Y(NPY)
共表达
。
[0003]之后
AGRP
基因作为动物采食调控分子研究领域的明星基因，在哺乳动物中被广泛研究，当机体处于饥饿状态时，
AGRP
神经元会被激活，从而促进机体发生采食行为，同时降低机体的能量代谢水平；反之，当机体进食后，体内的胰岛素及瘦素水平升高，下丘脑的
AGRP
神经元活性受到抑制，机体食欲下降
。
[0004]AGRP
相关抗体的商品化应用也集中在哺乳动物上，目前尚无商品化的鸡
AGRP
多克隆抗体及鸡
AGRP
抗体在鸡上的商品化应用的任何报道，另外，由于鸡
AGRP
蛋白与哺乳动物如人
、
鼠的
AGRP<br/>蛋白亲缘性较远，两者的
AGRP
抗体类产品无法通用，因而十分有必要开发一种鸡
AGRP
多克隆抗体的制备方法，以填补鸡
AGRP
抗体及商品化应用的空白，为进一步开展
AGRP
在鸡下丘脑采食调控功能的研究奠定基础，从而为深入研究鸡的采食调控，实现养殖户收益最大化提供理论支持
。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种鸡
AGRP
多克隆抗体及其制备方法和应用，以填补鸡
AGRP
抗体及商品化应用的空白，为进一步开展
AGRP
在鸡下丘脑采食调控功能的研究奠定基础，从而为深入研究鸡的采食调控，实现养殖户收益最大化提供理论支持
。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供一种鸡
AGRP
多克隆抗体及其制备方法和应用，一种鸡
AGRP
多克隆抗体的制备方法，步骤如下：
[0007]S1、
分析鸡
AGRP
蛋白，确定多肽抗原序列；
[0008]S2、
人工合成多肽抗原序列，并检测合成的多肽序列是否正确；
[0009]S3、
选正确合成的多肽抗原序列与
KLH
进行偶联；
[0010]S4、
对小鼠进行基础免疫和加强免疫，检测效价符合要求时，取免疫小鼠全血，离心，获得抗血清
。
[0011]优选的，所述步骤
S1
中的多肽抗原序列为
CRKISTTFPCGKN。
[0012]优选的，所述步骤
S1
中确定多肽抗原序列的方法为：比对禽类动物
、
哺乳动物中的
AGRP
蛋白的氨基酸序列，找到鸡中特异性高的序列，从上述特异性序列中选择亲水性评分高的序列作为多肽抗原序列
。
[0013]优选的，所述步骤
S2
中人工合成多肽抗原采用固相合成法；对合成的多肽序列进
行检测采用质谱分析和高效液相色谱仪检测相结合的方式
。
[0014]优选的，在进行所述步骤
S3
中的偶联前需对
KLH
进行活化
。
[0015]优选的，所述步骤
S4
中基础免疫使用完全弗氏佐剂，加强免疫使用不完全弗氏佐剂；佐剂与抗原多肽混合时采用将抗原多肽原液快速推入佐剂中的方式，按每只注射
40
μ
g
抗原的量进行多点肌肉注射免疫
。
[0016]一种如上所述制备方法制备的鼠源鸡
AGRP
多克隆抗体及多克隆抗体商品
。
[0017]一种如上所述制备方法制备的鼠源鸡
AGRP
多克隆抗体的应用
。
[0018]因此，本专利技术提供的一种鸡
AGRP
多克隆抗体及其制备方法和应用，其具体技术效果如下：
[0019](1)
应用本专利技术提供的制备方法首次成功制备了鼠源鸡
AGRP
抗体，制备的抗体特异性强，效价高；
[0020](2)
本专利技术提供的制备方法简单有效，可以用于商业化生产；
[0021](3)
本专利技术提供的制备方法和鼠源鸡
AGRP
抗体可以用于鸡下丘脑采食调控功能的相关研究
。
[0022]下面通过附图和实施例，对本专利技术的技术方案做进一步的详细描述
。
附图说明
[0023]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对本专利技术实施例的描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图
。
[0024]图1是鸡
AGRP
基因核苷酸和蛋白序列；
[0025]图2是
AGRP
基因在不同品种间的进化树分析结果；
[0026]图3是
AGRP
蛋白亲
/
疏水性
、
信号肽和跨膜结构域分析结果；
A
：
AGRP
蛋白亲
/
疏水性；
B
：信号肽；
C
：跨膜结构域分析；
[0027]图4是鸡
AGRP
蛋白二级结构预测；
[0028]图5是
AGRP
蛋白三级结构预测；
[0029]图6是合成的抗原多肽的高效液相色谱仪
(HPLC)
鉴定结果；
[0030]图7是合成的抗原多肽的质谱
(MS)
鉴定图；
[0031]图8是
ELISA
法抗原免疫血清灵敏度检测结果；
[0032]图9是
Westernblotting
对
AGRP
多克隆抗体的特异性检测结果；
[0033]图
10
是
AGRP
在鸡下丘脑弓状核免疫组化结果
。
具体实施方式
[0034]前期我们通过对针对自然群体的预产期...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种鸡
AGRP
多克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤如下：
S1、
分析鸡
AGRP
蛋白，确定多肽抗原序列；
S2、
人工合成多肽抗原序列，并检测合成的多肽序列是否正确；
S3、
选正确合成的多肽抗原序列与
KLH
进行偶联；
S4、
对小鼠进行基础免疫和加强免疫，检测效价符合要求时，取免疫小鼠全血，离心，获得抗血清
。2.
根据权利要求1所述的一种鸡
AGRP
多克隆抗体的制备方法，其特征在于：所述步骤
S1
中的多肽抗原序列为
CRKISTTFPCGKN。3.
根据权利要求1所述的一种鸡
AGRP
多克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述步骤
S1
中确定多肽抗原序列的方法为：比对禽类
、
哺乳类
、
鱼类
、
两栖类动物中实验常用动物的
AGRP
蛋白的氨基酸序列，找到鸡中特异性高的序列，从上述特异性序列中选择亲水性
、
抗原性以及二级结构综合评分高的...

【专利技术属性】
技术研发人员：田亚东，乐雅馨，康相涛，李文婷，刘小军，李东华，张彦华，宫玉杰，李国喜，蒋瑞瑞，李红，孙桂荣，韩瑞丽，李转见，张自豪，任阳光，赵玉点，翟彬，吴星，
申请(专利权)人：河南农业大学，
类型：发明
国别省市：