一种靶向JFK的小干扰RNA及其用途制造技术

本发明专利技术提供了一种靶向JFK的小干扰RNA及其用途，所述小干扰RNA的正义链、反义链的核酸序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示。进而利用脂质体包封所述小干扰RNA和鱼精蛋白复合物，可形成一种靶向JFK的纳米颗粒药物，可用于治疗JFK异常高表达相关疾病。本发明专利技术以乳腺癌4T1细胞荷瘤小鼠为模型，评价了所述靶向JFK的纳米颗粒药物联合放射治疗的抗肿瘤活性，结果显示JFK靶向的纳米颗粒药物载体联合放射治疗比各对照组具有更优异的抗肿瘤活性。疗比各对照组具有更优异的抗肿瘤活性。疗比各对照组具有更优异的抗肿瘤活性。

【技术实现步骤摘要】
一种靶向JFK的小干扰RNA及其用途


[0001]本专利技术属于生物医药
，特别涉及一种靶向JFK的小干扰RNA及其用途。

技术介绍

[0002]JFK是一个含有人Kelch结构域的F
‑
box蛋白，是重要的E3泛素连接酶。JFK通过形成SKP1
‑
CUL1
‑
F
‑
box(SCF)复合体，通过蛋白酶体依赖的途径，使得包括p53、ING4和ING5在内的多种重要分子的蛋白水平下调，进而在乳腺癌发生发展、乳腺癌血管生成和转移、脂肪的代谢分化调控、成骨分化与骨骼发育等多种生物学行为中发挥重要作用。JFK在乳腺癌、代谢综合征相关的肥胖和非酒精性脂肪肝、骨发育异常和骨质疏松等多种疾病中异常高表达，然而目前没有靶向JFK的药物用于上述疾病的治疗。
[0003]小干扰RNA(siRNA)是一种长20～25个核苷酸的双链RNA，能够诱导特异基因的mRNA切割和降解，从转录水平抑制基因的表达。相较于抗体药物和小分子药物，siRNA药物具有合成方便、特异性高、研发周期短等优点，于2018年由FDA首次批准用于治疗遗传性转甲状腺素蛋白淀粉样变性(hATTR)引起的周围神经疾病。然而，siRNA由于其结构的不稳定性，容易被核酸酶降解，限制了其在体内的应用。因此，构建靶向特定器官或组织的siRNA药物递送系统，高效、安全地将siRNA传递到靶器官，对于siRNA药物的研发和应用而言至关重要。
[0004]脂质体是一种直径50～1000nm的球形脂双层，其脂质组分成分灵活，可以制备成种类、大小、表面特征不同的多种类型的纳米颗粒药物载体系统，具有给药方便、运输效率高、排斥反应小、稳定性强、长效缓释等优势。其中，DOTAP阳离子脂质体是一种应用较多的非病毒载体，能够将siRNA分子等核酸分子包封于脂质双分子层中，保护RNA免受降解并输送至靶点部位。
[0005]放疗是使用高能射线的电离辐射作用杀死癌细胞来治疗肿瘤的方法，和外科治疗、药物治疗并列为肿瘤治疗的三大手段。约70％的肿瘤患者在疾病的不同阶段需要接受放疗，然而随着肿瘤体积增大、缺氧加重、异质性增强，肿瘤对放疗的敏感性逐渐降低，称为放疗抵抗。因此，寻找能够增强肿瘤对放疗敏感性的药物对于肿瘤治疗而言至关重要。

技术实现思路

[0006]针对现有技术中存在的问题，本专利技术的目的在于提供一种靶向JFK的小干扰RNA及其用途，利用脂质体包封所述小干扰RNA和鱼精蛋白复合物，可形成一种靶向JFK的纳米颗粒药物，可用于治疗JFK异常高表达相关疾病；所述纳米颗粒药物与放射疗法联用，可以显著增强肿瘤对放疗的敏感性。
[0007]本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：
[0008]本专利技术的第一方面提供了一种靶向JFK的小干扰RNA，所述小干扰RNA的正义链的核酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述小干扰RNA的反义链的核酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0009]本专利技术的第二方面提供了所述的小干扰RNA在制备用于治疗JFK异常高表达相关
疾病的药物中的用途。
[0010]进一步的，所述JFK异常高表达相关疾病包括乳腺癌，代谢综合征相关的肥胖和非酒精性脂肪肝，骨发育异常以及骨质疏松等。
[0011]本专利技术的第三方面提供了一种靶向JFK的纳米颗粒药物，所述纳米颗粒药物由脂质体包封小干扰RNA和鱼精蛋白复合物而形成，所述小干扰RNA的正义链的核酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述小干扰RNA的反义链的核酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0012]进一步的，所述脂质体为阳离子脂质体，选自氯化三甲基
‑
2,3
‑
二油烯氧基丙基铵和/或溴化三甲基
‑
2,3
‑
二油酰氧基丙基铵。
[0013]进一步的，所述纳米颗粒药物中脂质体、小干扰RNA和鱼精蛋白的质量比为1～8：1：1。
[0014]进一步的，所述纳米颗粒药物的平均直径为50～150nm，电位在5～15mV。
[0015]本专利技术的第四方面提供了所述靶向JFK的纳米颗粒药物的制备方法，包括以下步骤：
[0016]步骤1，脂质体外膜的制备：
[0017]按一定比例分别取(2,3
‑
二油酰基
‑
丙基)
‑
三甲基氯盐(DOTAP)、胆固醇和聚乙二醇(PEG
‑
2000)，混匀并完全溶解后，利用旋转蒸发仪制备成厚薄均一的脂质体薄膜；而后利用DEPC水溶解脂质体薄膜，直至脂质体薄膜水化完全，水化后的脂质体薄膜经挤出器膜挤出，获得脂质体外膜；
[0018]步骤2，复合物的包封：
[0019]将如权利要求1所述的小干扰RNA和鱼精蛋白室温孵育，之后加入步骤1制备得到的脂质体外膜，再次室温孵育后，即制备得到所述靶向JFK的纳米颗粒药物。
[0020]本专利技术的第五方面提供了所述的小干扰RNA在制备用于治疗JFK异常高表达相关疾病的药物中的用途。
[0021]进一步的，所述JFK异常高表达相关疾病包括乳腺癌，代谢综合征相关的肥胖和非酒精性脂肪肝，骨发育异常以及骨质疏松。
[0022]本专利技术的第六方面提供了所述靶向JFK的纳米颗粒药物作为药物递送载体的用途。所述靶向JFK的纳米颗粒药物还可搭载包括内照射药物(如
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Lu等)、化疗药及靶向药在内的其他药物。
[0023]本专利技术相比现有技术的有益效果为：
[0024]1、本专利技术所述的JFK靶向的小干扰RNA，可有效抑制JFK的转录，从根源上减少了JFK蛋白的产生，将所述小干扰RNA应用于制备用于治疗JFK异常高表达相关疾病的药物，对于JFK异常高表达的疾病具有更强的治疗效果；
[0025]2、本专利技术所述JFK靶向的纳米颗粒药物，以脂质体纳米颗粒作为载体、将靶向JFK的siRNA运送到病变部位，于靶向蛋白质的抑制剂而言，提高了药物运送效率，降低了合成成本，提高了药物在体内的稳定性；
[0026]3、本专利技术所述JFK靶向的纳米颗粒药物，具有良好的体内抗肿瘤效果，同时所述纳米颗粒与放射疗法联用，能够明显增强JFK高表达肿瘤对传统放射治疗的敏感性。
附图说明
[0027]下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步说明：
[0028]图1为实施例1所述JFK靶向的纳米颗粒药物的结构及制备过程示意图；
[0029]图2为测试例1所述JFK靶向的纳米颗粒药物的理化性质结果图；
[0030]图3为测试例2所述JFK靶向的纳米颗粒药物对体外乳腺癌4T1细胞中JFK表达水平的干预效果检测结果图；
[0031]图4为测试例3所述JFK靶向的纳米颗粒药物在小鼠体内靶向肿瘤的递送效果评估结果图；
[0032]图5为测试例4所述JFK靶向的纳米颗粒药物、放射治疗及纳米颗粒药物联合放射治疗对于小鼠体内肿本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向JFK的小干扰RNA，其特征在于，所述小干扰RNA的正义链的核酸序列如SEQ ID NO. 1所示，所述小干扰RNA的反义链的核酸序列如SEQ ID NO. 2所示。2.权利要求1所述的小干扰RNA在制备用于治疗JFK异常高表达相关疾病的药物中的用途。3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述JFK异常高表达相关疾病包括乳腺癌，代谢综合征相关的肥胖和非酒精性脂肪肝，骨发育异常以及骨质疏松。4.一种靶向JFK的纳米颗粒药物，其特征在于，所述纳米颗粒药物由脂质体包封小干扰RNA和鱼精蛋白复合物而形成，所述小干扰RNA的正义链的核酸序列如SEQ ID NO. 1所示，所述小干扰RNA的反义链的核酸序列如SEQ ID NO. 2所示。5.根据权利要求4所述的靶向JFK的纳米颗粒药物，其特征在于，所述脂质体为阳离子脂质体，选自氯化三甲基
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2,3
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二油烯氧基丙基铵和/或溴化三甲基
‑
2,3
‑
二油酰氧基丙基铵。6.根据权利要求4所述的靶向JFK的纳米颗粒药物，其特征在于，所述纳米颗粒药物中脂质体、小干扰RNA和鱼精蛋白的质量比为1~8：1：1。7.根据权利要求4所述的靶向JFK的纳米颗粒药物，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙露洋，刘昭飞，何林，尚永丰，高超，于诗淼，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：发明
国别省市：