一种全雌大黄鱼的规模化培育方法技术

本发明专利技术涉及鱼类育种技术领域，公开了一种全雌大黄鱼的规模化培育方法。本发明专利技术提供方法通过用含有来曲唑的配合饲料饲喂诱导遗传雌性大黄鱼发生性反转，得到伪雄鱼，并活体标记筛选确证伪雄鱼，然后进一步利用伪雄鱼和遗传雌性大黄鱼授精生产全雌鱼，实现了全雌苗种的规模化培育。本发明专利技术将雌性大黄鱼诱导为伪雄鱼的诱导效率高，且不使用雄激素，安全简便。安全简便。安全简便。

【技术实现步骤摘要】
一种全雌大黄鱼的规模化培育方法


[0001]本专利技术涉及鱼类育种
，尤其涉及一种全雌大黄鱼的规模化培育方法。

技术介绍

[0002]在水产养殖中，许多鱼类具有明显的性别二态性，雌性较雄性生长速度更快、个体更大。因此培育全雌鱼群体对于增加经济效益、缩短养殖周期等都具有重要意义。国内外都极其重视单性群体尤其是全雌鱼的培育。国外已经在虹鳟、大马哈鱼等鱼类中成功培育出了全雌苗种。我国已经在黄颡鱼、黄姑鱼以及半滑舌鳎等鱼类的全雌苗种的规模化培育中取得了很大进展。全雌大黄鱼的规模化培育国内外均进展有限。
[0003]大黄鱼是中国最高产的海水养殖鱼类，年产量约为25.4万吨。大黄鱼隶属于石首鱼科，黄鱼属，有黄鱼、黄花鱼等俗称，是一种近岸暖水洄游性鱼类，主要分布在东亚沿海地区，在我国主要分布在南海北部、东海以及黄海南部海域，是我国最重要的经济性海水鱼之一。大黄鱼由于颜色金黄、肉质细腻、营养丰富等深受消费者喜爱。但因为过度捕捞和海区环境恶化，大黄鱼野生资源遭受到严重的破坏，野生大黄鱼已经很难捕到。大黄鱼是具有XY性别决定系统的鱼类，研究表明，大黄鱼雌性生长速度比雄性快30％。雌鱼的养殖18个月可以达到上市规格，而雄鱼则至少需要两年。
[0004]因此，大黄鱼全雌苗种的培育对于提高大黄鱼的养殖产量和经济效益都有十分重要的意义。但关于大黄鱼全雌鱼的规模化培育，国内外尚未出现有效的实现技术及方法。
[0005]现有技术中，存在尝试实现大黄鱼全雌苗种的培育的相关举措，主要有以下2种：一是采用雌激素处理以诱导获得全雌鱼，进而进行培育；二是诱导雌核发育获得全雌苗种，进而进行培育。但这2种方法存在着各自的局限性。前者由于使用激素所以无法在生产上推广；后者诱导雌核发育需要在胚胎发生过程中施加物理或化学方法，苗种成活率非常低，并不适用大黄鱼全雌苗种的大规模培育。
[0006]因此，在本领域中，尚未出现有效可行的适用于大黄鱼全雌苗种的大规模培育的方法。

技术实现思路

[0007]为了解决上述大黄鱼全雌鱼的规模化培育的技术问题，本专利技术提供了一种全雌大黄鱼的规模化培育方法。
[0008]本专利技术的具体技术方案为：本专利技术提供了一种全雌大黄鱼的规模化培育方法，包括以下步骤：S1、诱导伪雄鱼：用含有来曲唑的配合饲料饲喂遗传雌性大黄鱼，使遗传雌性大黄鱼发生性反转；S2、筛选伪雄鱼：对步骤S1得到的大黄鱼，筛选出基因型鉴定为雌性的大黄鱼，并对基因型鉴定为雌性的大黄鱼进行选留筛选，得到伪雄鱼；S3、催产授精：取遗传雌性大黄鱼与步骤S2得到的伪雄鱼作为亲鱼，使用催产素使
亲鱼产卵授精；S4、鱼苗培育：收集亲鱼排出的受精卵，孵化得到全雌大黄鱼鱼苗，进行培育。
[0009]伪雄鱼是指基因型为雌性的鱼个体，外部形态上表现为雄性。伪雄鱼的性腺呈现出正常雄性精巢的形态特征。本专利技术提供了一种全雌大黄鱼的规模化培育方法，通过用含有来曲唑的配合饲料饲喂将遗传雌性大黄鱼诱导为伪雄鱼，并采用活体标记筛选出伪雄鱼，然后进一步利用伪雄鱼和遗传雌性大黄鱼授精生产全雌鱼，实现了全雌苗种的规模化培育。本专利技术实现全雌大黄鱼的规模化培育的原理具体而言，如下：本专利技术首次说明来曲唑可以应用于诱导大黄鱼性反转中。来曲唑是一种芳香化酶抑制剂，现有技术中作为抑制肿瘤的药物使用，对鱼类危害小，因此，在诱导大黄鱼性反转方面可以成为雄激素的替代品。同时，本专利技术通过实验证明，采用来曲唑诱导大黄鱼性反转，雌鱼性反转比例可达99％，因此说明，在诱导大黄鱼性反转方面来曲唑可以替代雄激素成为更好的选择。因此，在本专利技术的步骤S1中，采用含有来曲唑的配合饲料饲喂遗传雌性大黄鱼，使遗传雌性大黄鱼发生性反转，成为伪雄鱼。
[0010]由于步骤S1进行诱导处理后得到的大黄鱼中，仍然有可能存在正常雄鱼，因此在本专利技术的步骤S2中，对步骤S1中得到的大黄鱼进行标记筛选，筛选出鉴定确证为伪雄鱼的个体，避免正常雄鱼的存在。大黄鱼是具有XY性别决定系统的鱼类，本步骤鉴定确证伪雄鱼的方法为基因型鉴定为雌性。在此步骤中，进一步地，还进行了选留筛选，进一步保证进行下一步催产授精的雄亲鱼为伪雄鱼。避免正常雄鱼的存在进行授精是获得全雌大黄鱼的基础。
[0011]在本专利技术的步骤S3中，以遗传雌性大黄鱼与步骤S2得到的伪雄鱼作为亲鱼，使用催产素使亲鱼产卵授精。由于亲鱼基因型均为XX型，由此，可以得到全雌鱼，步骤S1与步骤S2是确保授精得到全雌鱼的基础。
[0012]在本专利技术的步骤S4中，收集亲鱼排出的受精卵，孵化可得到全雌大黄鱼鱼苗，进行培育，实现全雌大黄鱼的规模化培育。
[0013]基于上述，利用本专利技术提供的方法，可以实现全雌大黄鱼的规模化培育。本专利技术通过实验证明，步骤S1中，遗传雌性大黄鱼发生性反转比例可达99％，步骤S2筛选出基因型鉴定为雌性的大黄鱼的准确率为100％，由此确保进行催产授精的雄亲本为伪雄鱼，准确率可达99％以上。再进一步结合步骤S2的选留筛选，确保雄亲本为优质伪雄鱼。通过步骤S1～S4步骤的相互作用，形成本专利技术安全、简便高效、易于规模化生产的全雌大黄鱼的规模化培育方法。
[0014]作为本专利技术上述技术方案的优选，所述用含有来曲唑的配合饲料饲喂遗传雌性大黄鱼的方法为：从遗传雌性大黄鱼38～45日龄开始，采用来曲唑递增饲喂的方法饲喂含有来曲唑的配合饲料，共饲喂80～102天。
[0015]用含有来曲唑的配合饲料饲喂遗传雌性大黄鱼使之发生性反转得到伪雄鱼是本专利技术全雌大黄鱼的规模化培育方法的基础，诱导发生性反转的反转率高是保证该基础的核心。在雌性大黄鱼的诱导性反转中，从遗传雌性大黄鱼38～45日龄开始，采用来曲唑递增饲喂的方法饲喂含有来曲唑的配合饲料，共饲喂80～102天，可以保证性反转的反转率达到99％。
[0016]作为本专利技术上述技术方案的优选，所述来曲唑递增饲喂的方法为：遗传雌性大黄
鱼为38～60日龄时，饲喂的含有来曲唑的配合饲料中，来曲唑的含量为10～20mg/kg；遗传雌性大黄鱼为60～80日龄时，饲喂的含有来曲唑的配合饲料中，来曲唑的含量为40～50mg/kg；遗传雌性大黄鱼为80～140日龄时，饲喂的含有来曲唑的配合饲料中，来曲唑的含量为80～100mg/kg。
[0017]本专利技术首次说明来曲唑可以应用于诱导大黄鱼性反转中，并给出了将来曲唑应用于性反转雌性大黄鱼反转率高的方法。将来曲唑可以应用于诱导其他不同的鱼进行诱导并不能在大黄鱼中进行参考。
[0018]诱导发生性反转的反转率高是保证本专利技术全雌大黄鱼的规模化培育方法的核心。采用来曲唑递增饲喂的方法，可以进一步提高遗传雌性大黄鱼性反转的反转率，并降低来曲唑投喂对于大黄鱼生长和存活的影响。
[0019]作为本专利技术上述技术方案的优选，所述筛选出基因型鉴定为雌性的大黄鱼：利用PIT活体电子标记技术，将无线频率标签注射到步骤S1得到的大黄鱼体内，实现单个个体识别；同时，取与无线频率标签逐一对应的每条大黄鱼的鳍条，提取基因组DNA进行PCR扩增和凝胶电泳，通过扩增的D本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种全雌大黄鱼的规模化培育方法，其特征在于：包括以下步骤：S1、诱导伪雄鱼：用含有来曲唑的配合饲料饲喂遗传雌性大黄鱼，使遗传雌性大黄鱼发生性反转；S2、筛选伪雄鱼：对步骤S1得到的大黄鱼，筛选出基因型鉴定为雌性的大黄鱼，并对基因型鉴定为雌性的大黄鱼进行选留筛选，得到伪雄鱼；S3、催产授精：取遗传雌性大黄鱼与步骤S2得到的伪雄鱼作为亲鱼，使用催产素使亲鱼产卵授精；S4、鱼苗培育：收集受精卵，孵化得到全雌大黄鱼鱼苗，进行培育。2.如权利要求1所述的一种全雌大黄鱼的规模化培育方法，其特征在于：所述用含有来曲唑的配合饲料饲喂遗传雌性大黄鱼的方法为：从遗传雌性大黄鱼38～45日龄开始，采用来曲唑递增饲喂的方法饲喂含有来曲唑的配合饲料，共饲喂80～102天。3.如权利要求2所述的一种全雌大黄鱼的规模化培育方法，其特征在于：所述来曲唑递增饲喂的方法为：遗传雌性大黄鱼为38～60日龄时，饲喂的含有来曲唑的配合饲料中，来曲唑的含量为10～20mg/kg；遗传雌性大黄鱼为60～80日龄时，饲喂的含有来曲唑的配合饲料中，来曲唑的含量为40～50mg/kg；遗传雌性大黄鱼为80～140日龄时，饲喂的含有来曲唑的配合饲料中，来曲唑的含量为80～100mg/kg。4.如权利要求1所述的一种全雌大黄鱼的规模化培育方法，其特征在于：所述筛选出基因型鉴定为雌性的大黄鱼的方法为：利用PIT活体电子标记技术，将无线频率标签注射到步骤S1得到的大黄鱼体内，实现单个个体识别；同时，取与无线频率标签逐一对应的每条...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐冬冬，胡伟华，陈睿毅，李伟业，殷小龙，牟嘉林，杨阳，
申请(专利权)人：浙江省海洋水产研究所，
类型：发明
国别省市：