一种培养根结线虫的方法技术

本发明专利技术涉及一种培养根结线虫的方法。所述方法包括如下步骤：1)向种植有根达菜的土壤中添加天冬酰胺和/或胡萝卜素；2)将所述根结线虫接种于根达菜的根部；3)在所述根结线虫的侵染温度下使所述根结线虫侵染所述根达菜的根部，并在发育温度下使所述根结线虫发育，然后在繁殖温度下繁殖所述线虫；4)收获所述根结线虫。虫。虫。

【技术实现步骤摘要】
一种培养根结线虫的方法


[0001]本专利技术涉及一种培养根结线虫的方法。

技术介绍

[0002]在农业生产上危害较严重的根结线虫主要包括南方根结线虫(Meloidogyne incognita)、北方根结线虫(M.hapla)、花生根结线虫(M.arenaria)、爪哇根结线虫(M.javanica)和象耳豆根结线虫(M.enterolobii)。筛选对根结线虫的抗病品种、鉴定抗性基因及功能基因的克隆表达以及研究关于植物根结线虫的农业、物理、生物和化学防治方法的研究等都需要大量的根结线虫为靶标，而且为盆栽试验要验证对根结线虫的农业、物理、生物和化学防治方法的研究也需要大量的根结线虫为靶标。
[0003]目前，室内活体繁殖根结线虫主要是一些茄科作物(如土豆、番茄、茄子、甜椒、烟草等)、葫芦科作物(黄瓜、丝瓜、苦瓜等)、旋花科作物(空心菜)实生苗为寄主，这些作物受季节性约束较大，而且大多需要60天左右才能收获少量的线虫；也有以空心菜离体根系培养南方根结线虫的报道，但接种后也至少50天后才能收获少量根结线虫。现有的活体培养或离体根系培养的缺点主要是：1)时间周期较长，至少50天以后才能得到少量线虫，而且还耗费大量的时间和劳力；2)大部分活体培养主要选择的植物也是受季节性约束较大，如有的只适合冷凉条件种植，有的只适合较高温度条件下种植；3)常规活体繁殖的植物虽然对南方根结线虫感病，但有的作物对除根结线虫以外的其它根部病害如根腐病、枯萎病、青枯病及茎基腐能力和地上部病虫害如霜霉病、叶霉病、灰霉病、温室白粉虱、红蜘蛛、蓟马能力较差，因而不利于南方根结线虫的繁殖。4)常规活体繁殖所用植物根系二级根并不很发达，甚至有的植物因长得较高还需要人工搭架，费工费时；5)有些活体繁殖南方根结线虫的作物在根系繁殖2
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3代后，根系就腐烂死掉了，导致根系上形成的根结线虫不能长时间寄生和繁殖；6)不能在短时间内获得大量后代的主要原因是接种的线虫不能短时间集中侵染，侵染到根系内的线虫发育进度不一致，导致后代形成时间不集中导致的。

技术实现思路

[0004]本专利技术之一提供了一种培养根结线虫(Meloidogyne)的方法，其包括如下步骤：
[0005]1)向种植有根达菜的土壤中添加天冬酰胺和/或胡萝卜素；
[0006]2)将所述根结线虫接种于根达菜的根部；
[0007]3)在所述根结线虫的侵染温度下使所述根结线虫侵染所述根达菜的根部，并在发育温度下使所述根结线虫发育，然后在繁殖温度下繁殖所述线虫；
[0008]4)收获所述根结线虫。
[0009]在一个具体实施方式中，所述根结线虫为南方根结线虫(Meloidogyne incognita)。
[0010]在一个具体实施方式中，在步骤1)中，所述天冬酰胺的添加量为0.4g/L土至0.8g/L土。
[0011]在一个具体实施方式中，在步骤1)中，所述胡萝卜素的添加量为4g/L土至6g/L土。
[0012]在一个具体实施方式中，在步骤1)中，所述天冬酰胺和所述胡萝卜素的添加质量比例为1:10。
[0013]在一个具体实施方式中，在步骤2)中，接种所述根结线虫的量为500条/株至2000条/株。
[0014]在一个具体实施方式中，在步骤2)中，接种所述根结线虫的量为1000条/株至2000条/株。
[0015]在一个具体实施方式中，在步骤2)中，接种所述根结线虫为二龄幼虫。
[0016]在一个具体实施方式中，在步骤3)中，所述侵染温度为20至30℃。
[0017]在一个具体实施方式中，在步骤3)中，侵染时间为6至9d。
[0018]在一个具体实施方式中，在步骤3)中，所述发育温度25至28℃。
[0019]在一个具体实施方式中，在步骤3)中，发育时间为6至12d。
[0020]在一个具体实施方式中，在步骤3)中，发育时间为9至12d。
[0021]在一个具体实施方式中，在步骤3)中，所述繁殖温度为28至30℃。
[0022]在一个具体实施方式中，在步骤3)中，所述繁殖时间为19至35d。
[0023]在一个具体实施方式中，在步骤3)中，先在25℃的侵染温度下侵染6d，然后转于28℃的发育温度下发育9d，再转于30℃的繁殖温度下繁殖25d收获。
[0024]本专利技术的有益效果：
[0025]本专利技术首次发现天冬酰胺和/或胡萝卜素有利于根结线虫的侵染和繁殖。此外，根结线虫的侵染温度为20至30℃，侵染时间为6至9d；发育温度25至28℃，发育时间为6至12d；繁殖温度为28至30℃，繁殖时间为19至35d。以上培养条件有利于缩短培养时间，因而可以在短时间内能得到大量的线虫群体。以上可以为后续使用节省用工和时间。
附图说明
[0026]图1显示了10、15、20、25、30、34℃不同恒温对侵入根系内的二龄幼虫数量的影响。
[0027]图2显示了25、28、30、32℃不同恒温对三龄幼虫发育的影响。
[0028]图3显示了25、28、30、32℃不同恒温对四龄幼虫发育的影响。
[0029]图4显示了天冬酰胺对南方根结线虫侵染力的影响。
[0030]图5显示了胡萝卜素对南方根结线虫侵染力的影响。
具体实施方式
[0031]以下通过优选的实施案例的形式对本专利技术的上述内容作进一步的详细说明，但其不构成对本专利技术的限制。
[0032]如无特别说明，本专利技术的实施例中的试剂均可通过商业途径购买。
[0033]根达菜品种为百丰园根达，购自山东省精品叶菜繁育基地。
[0034]番茄品种为硕源佳丽。
[0035]空心菜品种为欣美竹叶空心菜。
[0036]用于栽种根达菜和空心菜的小钵的底部自带有内外两圈的小圆洞12个，外圈8个，内圈4个，每个小圆洞直径约为0.8cm，大小为Φ11cm
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10cm，小钵底部放在托盘上，托盘上
径Φ11cm，高度大约2cm。
[0037]实施例
[0038]1.育苗
[0039]将番茄、根达菜或空心菜的种子分别放入50℃至55℃的热水中浸泡20分钟，浸泡过程中不断搅拌以免烫伤种子，之后用清水清洗干净后再用清水浸泡6h左右，然后倾倒掉大部分液体，把种子转移到铺有2层灭菌滤纸的灭菌培养皿内，置于28℃的恒温培养箱中催芽。在2至3天左右开始种子露白，待有70％左右的种子露白时播种到提前放好育苗土的育苗盘上，置于温室条件下培养，在35至45天幼苗长到5叶一芯时移栽到小钵中。
[0040]2.根结线虫的获得
[0041]将育好的番茄苗移栽到小钵中，每钵种1株，用灭过菌(121℃，30min)的沙土((细沙：壤土比例为3:1))种植，种好后置于22至27℃的温室中，缓苗5d后接种南方根结线虫，每株接种卵和幼虫的总量为1000个，其中，在接种时，在距离番茄苗茎基部2
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种培养根结线虫(Meloidogyne)的方法，其包括如下步骤：1)向种植有根达菜的土壤中添加天冬酰胺和/或胡萝卜素；2)将所述根结线虫接种于根达菜的根部；3)在所述根结线虫的侵染温度下使所述根结线虫侵染所述根达菜的根部，并在发育温度下使所述根结线虫发育，然后在繁殖温度下繁殖所述线虫；4)收获所述根结线虫。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述根结线虫为南方根结线虫(Meloidogyne incognita)。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，在步骤1)中，所述天冬酰胺的添加量为0.4g/L土至0.8g/L土。4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，在步骤1)中，所述胡萝卜素的添加量为4g/L土至6g/L土。5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，在步骤1)中，所述天冬酰胺和所述胡萝卜素的添加质量比例为1:10。6...

【专利技术属性】
技术研发人员：李秀花，高波，王容燕，马娟，万艳争，赵惟，陈书龙，
申请(专利权)人：河北省农林科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：