一种鉴定果生炭疽菌的非核糖体多肽合成酶dtxS1分子标记、引物、试剂盒及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种鉴定果生炭疽菌的非核糖体多肽合成酶dtxS1分子标记、引物、试剂盒及应用。利用与油茶炭疽病密切相关的几种炭疽菌属真菌的全基因组序列信息进行比较基因组分析，获得果生炭疽菌特异的染色体序列和候选基因，并进一步根据候选基因可能的基因功能及是否含有内含子等特征，选定可用于特异性鉴定果生炭疽菌的候选基因作为分子标记，利用该标记对油茶果生炭疽菌进行特异性检测。本发明专利技术可用于油茶炭疽病的诊断及预测，同时可用于果生炭疽菌的特异性检测。疽菌的特异性检测。疽菌的特异性检测。

【技术实现步骤摘要】
一种鉴定果生炭疽菌的非核糖体多肽合成酶dtxS1分子标记、引物、试剂盒及应用


[0001]本专利技术属于植物炭疽病检测
，具体涉及一种鉴定果生炭疽菌的非核糖体多肽合成酶dtxS1分子标记、引物、试剂盒及应用。

技术介绍

[0002]油茶为山茶科常绿灌木或乔木，是原产于中国的一种栽培历史悠久的木本食用油料树种，与橄榄、油棕、椰子并称为世界四大木本油料植物。油茶籽压榨的山茶油富含多酚类及多种不饱和脂肪酸，作为食用油具有保护心脑血管、防止动脉硬化等保健功效，此外，最近的研究表明山茶油还有阻止黑色素形成和抗氧化等功效，可作为功能性油料广泛应用于健康、食品和化妆品制造行业(Chaikul,Sripisut,Chanpirom,Sathirachawan,&Ditthawuthikul,2017；Xiao et al.,2017)。油茶适应性强，生长区域广阔，除了长江以南和秦岭地区的的主产区外，在长江以北部分地区也有分布。油茶耐贫瘠和酸性土壤，种植简单，管护成本低，因此利用种植难度大的坡地林地大力发展油茶种植，不仅能够美化环境、保持水土、涵养水源、调节气候，还对增加我国油料作物产量、保卫食用油安全具有重要意义("要把荒山变金库那就栽植油茶树,"2020；左静&朱美选,2020)。但是油茶生产和山茶油质量长期受油茶根腐病、白绢病、炭疽病、软腐病、茶苞病、叶枯病和煤污病等病害的严重制约，并且随着油茶种植面积的逐年扩大，油茶病害的问题日益凸显。
[0003]油茶炭疽病是严重威胁油茶生产的主要叶片和果实病害，可引起落果、落蕾、枝梢枯死等症状。各地油茶常年因该病减产10％
‑
30％，发病重灾区可使油茶减产超过50％，造成严重的经济损失(刘小玉et al.,2018)。通过对来自不同产地的油茶炭疽病株的果实和叶片进行病原菌的分离与鉴定，目前共分离到了Colletotrichum camelliae，Colletotrichum gloeosporioides，Colletotrichum siamense和Colletotrichum fructicola等炭疽菌属的四个种及Neopestalotiopsis，Pestalotiopsis和Alternaria等三个属的植物病害相关真菌。进一步通过致病力测试确定了油茶果生炭疽菌(Colletotrichumfructicola)为油茶炭疽病的主要致病菌(Wang et al.,2020)。分离到的四个油茶炭疽病相关的炭疽菌亲缘关系极近，都属于的炭疽菌属胶孢炭疽菌复合群(Colletotrichum gloeosporioides species complex)。目前尚缺少简便有效的果生炭疽菌鉴定、检测及定量方法，只能通过常规的致病物分离、纯化并结合测序及同源序列比对方法对油茶果生炭疽菌进行鉴定。

技术实现思路

[0004]本专利技术通过比较从油茶炭疽病斑上分离到的Colletotrichumcamelliae，Colletotrichum gloeosporioides，Colletotrichumsiamense和Colletotrichum fructicola等四个炭疽菌种的全基因组序列，从果生炭疽菌基因组中的16731个编码序列中筛选到了965个果生炭疽菌特异性编码序列(图1)。根据NCBI提供的序列注释及功能预
测，筛选出115个具有重要功能的基因编码序列，其中22个不含内含子的基因序列作为备选分子标记。最终选定了其中一个作为鉴定果生炭疽菌的非核糖体多肽合成酶dtxS1分子标记。
[0005]本专利技术的首要目的是提供一种鉴定果生炭疽菌的非核糖体多肽合成酶dtxS1分子标记，是以基因编号CGGC5_v013293的非核糖体多肽合成酶dtxS1中的一段，具体序列为：
[0006]>ANPB02000008.1_cds_KAF4477563.1_13293
[0007]ATGGCAAAATCCGTCTCTGACGTAGATGGCCGGGGCCGCATATGGGAGCAGAACTCATCAGTGCAGCAAGGGGTCGAGGGTCGCA
[0008]TGGATGTCATGATATCGAGGGTAGTCGCCGCACAGCCAGACGCCCCGGCCGTTTGTGCCTGGGATGGTGATCTATCCTACCGGGA
[0009]ACTCGACGAGTTGGCCTCGCGACTCGCCGTCCGGCTTCAGTCTCTCGGCACCGGGCCCGGTGACATCGTGCCGCTGTGCTTCGAG
[0010]AAGTCGCAGTGGACGGTCGTTTCCGTCGTCGCCGTCGTCAAGACCGGAGCGGCTTTCCTCCTGCTGGACCCTCTGTTGCCCACGG
[0011]ATCGTCTCAGAGTCATCATCCAGCAATGCGAGTCCAACCTGATCCTCACGTCGCTCTCCCACGGCGCCATGGGTGAGCAGCTTCA
[0012]ACTCCCGGTAACCGTCGTCACGGTCGGTCACTCTCTTCGCCAGGAACCCCTACCTCGACCGCCGTCGTCACCCCTGGACGAGCAT
[0013]CCGAAGCTCAAGCCACCAACACTGCGCCCCGAGTCCCTGCTGTACGTCGTCTTCACCTCCGGCAGCACCGGGATGCCCAAGGGAT
[0014]GCATGCTATCCCACGGAAACCTGTGCTCGGCCATGCACTACCAGAACAAATCGCTGGGCTTCCGTCCCGCCTCGAGAGTCTTCGA
[0015]CTTCGCCTCCTACAGCTTCGACGTGGCCGTGCACAACCTCTTCGCGACGCTGACCACGGGGGCCTGCCTGTGCATCCCCAGCGAC
[0016]GCCGACCGGAAAGACAGCCTCGAGGGCTCCATGGCGCGCATGGGCGCCACGCTCGCCAACCTGACCCCGACCGTGGCCCGCCTCC
[0017]TCAACCCCGACGCGCTGCCCGCGCTGGAGACGTTGCTCCTCCTGGGCGAGCAGGTGACGGACCTGGAAACCACGCTCTGGTGCGG
[0018]GAAAGCCCAGGTCGTCAACTCCTACGGCCCGGCCGAGTGCACCCCGATCAGCACGGCCAACTGCGCCGCCTCGACCGTGACCGGG
[0019]CTCCGTCACAGCGGCAGAGGCATCGGCTCCGTCGCGTGGATTGTCGACCCCGCGGACCACGACGTGCTGTTGCCGTGGGGCGAGA
[0020]CCGGCGAGCTGCTGATCGAAGGGCCCATCGTCGGCCAGGGCTAT本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鉴定果生炭疽菌的非核糖体多肽合成酶dtxS1分子标记，其特征在于，是以基因编号CGGC5_v013293的非核糖体多肽合成酶dtxS1中的一段，具体序列为：ATGGCAAAATCCGTCTCTGACGTAGATGGCCGGGGCCGCATATGGGAGCAGAACTCATCAGTGCAGCAAGGGGTCGAGGGTCGCATGGATGTCATGATATCGAGGGTAGTCGCCGCACAGCCAGACGCCCCGGCCGTTTGTGCCTGGGATGGTGATCTATCCTACCGGGAACTCGACGAGTTGGCCTCGCGACTCGCCGTCCGGCTTCAGTCTCTCGGCACCGGGCCCGGTGACATCGTGCCGCTGTGCTTCGAGAAGTCGCAGTGGACGGTCGTTTCCGTCGTCGCCGTCGTCAAGACCGGAGCGGCTTTCCTCCTGCTGGACCCTCTGTTGCCCACGGATCGTCTCAGAGTCATCATCCAGCAATGCGAGTCCAACCTGATCCTCACGTCGCTCTCCCACGGCGCCATGGGTGAGCAGCTTCAACTCCCGGTAACCGTCGTCACGGTCGGTCACTCTCTTCGCCAGGAACCCCTACCTCGACCGCCGTCGTCACCCCTGGACGAGCATCCGAAGCTCAAGCCACCAACACTGCGCCCCGAGTCCCTGCTGTACGTCGTCTTCACCTCCGGCAGCACCGGGATGCCCAAGGGATGCATGCTATCCCACGGAAACCTGTGCTCGGCCATGCACTACCAGAACAAATCGCTGGGCTTCCGTCCCGCCTCGAGAGTCTTCGACTTCGCCTCCTACAGCTTCGACGTGGCCGTGCACAACCTCTTCGCGACGCTGACCACGGGGGCCTGCCTGTGCATCCCCAGCGACGCCGACCGGAAAGACAGCCTCGAGGGCTCCATGGCGCGCATGGGCGCCACGCTCGCCAACCTGACCCCGACCGTGGCCCGCCTCCTCAACCCCGACGCGCTGCCCGCGCTGGAGACGTTGCTCCTCCTGGGCGAGCAGGTGACGGACCTGGAAACCACGCTCTGGTGCGGGAAAGCCCAGGTCGTCAACTCCTACGGCCCGGCCGAGTGCACCCCGATCAGCACGGCCAACTGCGCCGCCTCGACCGTGACCGGGCTCCGTCACAGCGGCAGAGGCATCGGCTCCGTCGCGTGGATTGTCGACCCCGCGGACCACGACGTGCTGTTGCCGTGGGGCGAGACCGGCGAGCTGCTGATCGAAGGGCCCATCGTCGGCCAGGGCTATCTTCACGATCCGAAGAAGACGGCCGACGTCTTCGTCCGAGACCCGGCTTGGCTGGTCCGTGGCGGACCGGGCGTTCCCGGACGGACCGGCAGGCTGTACAAGACGGGGGATCTCGCGCATTATGACGCCGACGGAAATGTCGTCGTCACCGGCCGGAAAGACACCCAGGTCAAGATCCGCGGGAACCGGATCGAACTCGGCGAGGTCGAGCATCACGTGTCGGCCTGCATGCCGGACGTGACGCGAGTCGTGGCGGAGGCCATCCTGCCGGCCGGTGCGGAAACCGGTCACCTCCTGGCCGTTTTCTTGCAGACGGACGACGATCAGACCTACGGCATCAGGCTCGTGCACTTGGAGGACGAGGTGGCGTCGGGGCTCGCGAGGCATCTACCGCCCTACATGATCCCCACGCTCTTCTTCGCCATGCCCCAGATACCGCTCACCCTGACCGGGAAGACCAACCGGAAACTCCTGCGCGAGATGGGCTCGTCTTTCTTCATGGATCGAATTGCTTCGCAAACGGGGGGCGGCGAACGAGCAGCCCGGAGGGCGCCCCGGACCGAGACGGAACGCACCTTGCAAACTCTCTGGGCTCGCGTCCTCGGCATCGACGGCGACTCCATCGGCCTGGACGACAACTTCTTTCGTCTCGGCGCCGACTCCATCACCGCTATGAAACTCGTCGCCGAGGCGCGAAAAGTCGACGTCCAAATATCCGTTGCGGATATCTTTCGGCACCCGGTGCTCTCTGGACTCGCCGTGCTCACGACCTCTGCGAAGCCGCGCAACGAGACCGATCGCAACGGTGTGGAGGATCAACATCATCCGTCGACAAATGGCGCTCTCGACGTCATCT...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹凌雪，马利松，董文统，闫文德，
申请(专利权)人：中南林业科技大学，
类型：发明
国别省市：