一种基于制造技术

一种基于

【技术实现步骤摘要】
一种基于CRISPR
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Cas14a1系统快速检测弓形虫核酸的方法及检测弓形虫病的试剂盒


[0001]本专利技术属于基因
，具体涉及一种基于CRISPR
‑
Cas14a1系统快速检测弓形虫核酸的方法及检测弓形虫病的试剂盒。

技术介绍

[0002]弓形虫病是由一种专性细胞内寄生的刚地弓形虫引起的人兽共患疾病，呈世界性分布。弓形虫以猫为终宿主，可感染包括人在内的所有温血动物。免疫功能正常者感染弓形虫通常是温和的"流感样"症状，持续数周到数月后消失。当患者免疫功能低下时，如艾滋病病人、老人、免疫抑制剂使用者等，感染弓形虫会引致其他严重的病变，甚至死亡。孕妇在怀孕期间如果感染弓形虫，造成胎儿先天性弓形虫症，甚至造成流产、畸形胎或死胎。在家畜中，感染弓形虫会导致母畜流产和死胎，养殖场会出现爆发性感染，死亡率极高。
[0003]弓形虫严重威胁着人类和动物的健康，以及畜牧业的发展，但由于弓形虫病缺乏特异的临床症状，诊断较为困难，因此建立有效的弓形虫检测方法显得尤为重要。常规的弓形虫病原学检测如组织切片染色和显本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于CRISPR
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Cas14a1系统快速检测弓形虫病的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括：一组RAA扩增弓形虫保守靶基因的引物：RAA上游引物：5
’‑ꢀ
gtgttcgtctccattccgtacagtcttcaa
‑3’
；RAA下游引物：5
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ttcgtgatggcgcgttttgccttctctttg
ꢀ‑3’
；一种特异性检测弓形虫保守靶基因的sgRNA序列：5
’‑
TAATACGACTCACTATAGGGCTTCACTGATAAAGTGGAGAACCGCTTCACCAAAAGCTGTCCCTTAGGGGATTAGAACTTGAGTGAAGGTGGGCTGCTTGCATCAGCCTAATGTCGAGAAGTGCTTTCTTCGGAAAGTAACCCTCGAAACAAATTCATTTgaaaGAATGAAGGAATGCAACgcctcaatagcaggatgacg
‑3’
；DNA荧光探针：5
’‑
FAM
‑
TTTTTTTTTTTT
‑
BHQ1
‑3’
；Cas14a1蛋白。2.根据权利要求1所述的基于CRISPR
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Cas14a1系统快速检测弓形虫病的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括：buffer A缓冲液、Buffer B缓冲液、蛋白酶冻干粉和CRISPR
ꢀ‑
Cas14a1系统检测的反应体系。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括：5
×
MMLV RT buffer和miRNA RT primers。4.一种非诊断目的的基于CRISPR
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Cas14a1系统快速检测弓形虫核酸的方法，其特征在于：包括下列步骤：步骤1：使用DNA提取试剂盒对待检测样本进行核酸提取，得到待检核酸；步骤2：首先将41.5μL的 buffer A缓冲液、4μL的RAA上游引物和RAA下游引物混合物加入装有冻干粉的反应管中，然后向反应管管盖内加入2.5μL的Buffer B缓冲液，最后将2μL的待检核酸加入到反应管中；反应管盖上管盖，混匀后对待检核酸进行RAA扩增...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜忆南，王小凤，程苗，李倩，邢晨，杨树起，祝亚亭，
申请(专利权)人：安徽医科大学，
类型：发明
国别省市：