一株韩国青霉及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株韩国青霉，命名为韩国青霉Penicillium Koreense GX2，保藏号为CGMCC No.40001。所述韩国青霉GX2或韩国青霉GX2的代谢产物在防治线虫方面的应用。本发明专利技术从土壤中分离筛选出一株韩国青霉Penicillium Koreense GX2，该菌对孢囊线虫有很好的寄生作用，同时其代谢产物对孢囊线虫和根结线虫二龄幼虫及卵有很好毒杀效果，是对植物寄生线虫具有高毒力的生防菌株，不但丰富植物寄生线虫生防菌资源，更重要的是对开发杀线虫绿色农药或药肥具有十分重要的意义。药肥具有十分重要的意义。药肥具有十分重要的意义。

【技术实现步骤摘要】
一株韩国青霉及其应用


[0001]本专利技术涉及微生物
，具体涉及一株韩国青霉及其应用。

技术介绍

[0002]植物寄生线虫引起作物的病害日趋严重，因它的隐蔽性，使其防治困难，同时因为高毒高残留的化学杀线虫剂对人畜健康和环境有很大的为害，因此，生产上亟待寻找化学防治的替代方法。微生物防治资源种类有很多，主要包括：天敌真菌、天敌细菌、天敌放线菌以及其他线虫天敌生物等。线虫天敌真菌分布非常广泛，在植物寄生线虫的生物防治研究中已经有了很多的报道。全世界己报道的线虫寄生真菌150余种，我国报道20余种，主要包括普奇尼亚属(Pochonia)、拟青霉属(Paecilomyces)、钩丝孢属(Harposporium)、被毛孢属(Hirsutella)、毒虫霉属(Nematoctonus)、串孢壶菌属(Myzocytium)和掘氏梅里霉属(Drechmeria)等(李天飞等，2000；李娟等，2013)。以淡紫拟青霉为活性成分研制杀线虫制剂，已应用在生产上防治香蕉、马铃薯、烤烟以及柑橘等重要经济农作物的病原线虫；菲律宾亚州技术中心、美国拜耳公司等将该菌制成商品化制剂Biocon、Paecil(Li et al.,2015)。
[0003]植物寄生线虫病害的防治主要依赖化学杀线剂，但杀线剂多为高毒、高残留药剂，杀死土壤中植物寄生线虫的同时，也杀死了有益生物，严重破坏生态平衡，污染环境，威胁人类的健康。而生物防治被广泛认为是一种有前景的防病途径，因此，获得对植物寄生线虫具有高毒力的生防菌株，对开发新型杀线虫生物源农药具有十分重要的意义。

技术实现思路

[0004]为解决上述技术问题，本专利技术提供一株韩国青霉，本专利技术的韩国青霉为从土壤中分离，对土壤环境适应性强的，该菌的代谢产物具有明显的杀线虫活性物质，可用于根结线虫、孢囊线虫和根腐线虫等的生物防治。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供的技术方案如下：
[0006]一株韩国青霉，命名为韩国青霉Penicillium Koreense GX2，于2021年12月06日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.40001，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
[0007]如上所述韩国青霉GX2在防治线虫方面的应用。
[0008]如上所述韩国青霉GX2的代谢产物在防治线虫方面的应用。
[0009]包含如上所述韩国青霉GX2代谢产物的制剂，用于防治线虫。
[0010]作为优选，所述的线虫为根结线虫、孢囊线虫和根腐线虫。
[0011]作为优选，所述的线虫为南方根结线虫、象耳豆根结线虫、大豆孢囊线虫、玉米孢囊线虫或根腐线虫。
[0012]作为优选，所述韩国青霉GX2的代谢产物制备方法为将韩国青霉Penicillium Koreense GX2在PDA平板上培养5
‑
7天，将培养所得菌落打成菌饼，接种到查彼克培养基中，
接种量为1个菌饼，26℃，150r/min振荡发酵培养1周到3周(即7天至21天)，取发酵滤液原液，即为韩国青霉P.koreense GX2的代谢产物。
[0013]作为优选，将培养所得菌落打成菌饼，接种到查彼克培养基中，接种量为1个菌饼，26℃，150r/min振荡发酵培养2周(即14天)。
[0014]与现有技术相比，本专利技术的有益效果：
[0015]本专利技术从土壤中分离筛选出一株韩国青霉Penicillium Koreense GX2，该菌对孢囊线虫有很好的寄生作用，同时其代谢产物对孢囊线虫和根结线虫二龄幼虫及卵有很好毒杀效果，是对植物寄生线虫具有高毒力的生防菌株，不但丰富植物寄生线虫生防菌资源，更重要的是对开发杀线虫绿色农药或药肥具有十分重要的意义。
[0016]保藏信息说明
[0017]韩国青霉Penicillium Koreense GX2于2021年12月06日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，保藏地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号为CGMCC No.40001。
附图说明
[0018]图1是韩国青霉Penicillium Koreense GX2的形态学特征；其中，A：菌落形态，上排左至右：正面CYA、MEA、YES、OA；下排左至右：反面CYA、MEA、YES、正面PDA；B
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H：分生孢子梗和分生孢子；I：分生孢子；比例尺：B
‑
G＝20μm，H＝100μm。
[0019]图2是韩国青霉Penicillium Koreense GX2基于ITS
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BenA
‑
CaM
‑
RPB2序列构建的ML系统发育树。
[0020]图3是韩国青霉Penicillium Koreense GX2寄生玉米孢囊线虫的孢囊；其中，A
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B：孢囊被Penicillium Koreense GX2寄生情况(表面消毒后孢囊转移到PDA平板培养的第3d)；C：对照组孢囊(没有任何菌寄生)；比例尺＝200μm。
具体实施方式
[0021]下面结合附图具体实施方式进行详细描述，但应当理解本专利技术的保护范围并不受具体实施方式的限制。实施例中采用的原料、试剂若无特殊说明，皆为市售所得。实施例中使用的南方根结线虫、象耳豆根结线虫、大豆孢囊线虫、玉米孢囊线虫均为本实验室培养所得。
[0022]查彼克培养基：NaNO
3 2.00g，KCl 0.50g，FeSO
4 0.01g，K2HPO
4 1.00g，MgSO
4 0.50g，蔗糖30.0g，溶解至水1000ml蒸馏水中，用玻棒不断搅拌，充分溶解后均等分装入10个250ml三角瓶中，高压蒸汽灭菌(121℃)灭菌20分钟，备用。
[0023]20％的查彼克培养基为采用灭菌水将查彼克培养基稀释至质量浓度为20％后所得。
[0024]CYA(查氏酵母膏琼脂)：NaNO
3 3.0g，KH2PO
4 1.0g，KCl 0.5g，MgSO4·
7H2O 0.5g，FeSO4·
7H2O 0.01g，酵母膏5.0g，蔗糖30.0g，琼脂15.0g，蒸馏水1000ml。
[0025]YES(酵母提取物蔗糖琼脂培养基)：酵母膏20g，Sucrose 150g，七水硫酸镁0.5g，迹量盐溶液(FeSO4.7H2O 0.1g MnCl2.4H2O 0.1g)，琼脂20g，蒸馏水885ml，充分混匀高压灭菌121℃，for 15min，pH 6.5
±
0.2。
[0026]MEA(麦芽汁浸膏琼脂培养基)：麦芽浸膏(Oxoid CM0059)50g，迹量盐溶液1ml，蒸馏水1000ml，充分混匀高压灭菌121℃for 10min，pH5.4
±
0.2。
[0027]OA(燕麦琼脂培本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株韩国青霉，其特征在于：韩国青霉命名为韩国青霉Penicillium Koreense GX2，保藏号为CGMCC No.40001。2.一株如权利要求1所述韩国青霉GX2在防治线虫方面的应用。3.一株如权利要求1所述韩国青霉GX2的代谢产物在防治线虫方面的应用。4.根据权利要求2或3所述应用，其特征在于：所述的线虫为根结线虫、孢囊线虫和根腐线虫。5.根据权利要求2或3所述应用，其特征在于：所述的线虫为南方根结线虫、象耳豆根结线虫、大豆孢囊线虫、玉米孢囊线虫和根腐线虫。6.根据权利要求3所述韩国青霉GX2的代谢产物在防治线虫方...

【专利技术属性】
技术研发人员：周勋波，吴海燕，莫意雪，高福坤，
申请(专利权)人：广西大学，
类型：发明
国别省市：