假丝酵母二羟基丙酮合成酶的原核表达载体及其构建方法和应用技术

技术编号：3935478 阅读：248 留言：0更新日期：2012-04-11 18:40

本发明专利技术提供一种高效表达假丝酵母二羟基丙酮合成酶蛋白ＤＡＳ的原核表达载体（ｐＥＴ２８ａ－ＤＡＳ），该载体含有Ｔ７启动子和终止子、细菌核糖体结合位点和ＤＡＳ基因及一个组氨酸标签，从假丝酵母中克隆出ＤＡＳ基因，用Ｔ７启动子控制它在大肠杆菌中的表达，利用该载体转化大肠杆菌（ＢＬ２１），可实现ＤＡＳ蛋白的高水平表达，表达的ＤＡＳ蛋白８０％以上形成包涵体，用高浓度的尿素溶解包涵体后，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离ＤＡＳ蛋白，再从凝胶中回收ＤＡＳ蛋白可得到纯度极高的ＤＡＳ蛋白，用于抗体的制备。ＤＡＳ重组蛋白表达量很高，因此不需要大规模培养细菌，纯化ＤＡＳ蛋白的操作相当简单，成本较低，极易重复使用。