本发明专利技术涉及生物医药领域，涉及一种抗Ctrb1的抗体及其用途。抗Ctrb1的抗体，由重链和轻链组成，所述抗体的重链可变区序列分别为SEQ ID NO.1、SEQ IDNO.2；轻链可变区序列分别为SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5。与现有技术相比，本发明专利技术所述抗体能够结合Ctrb1，杀伤胃癌细胞，从而治疗和/或预防癌症相关疾病，具有广阔的应用前景。具有广阔的应用前景。具有广阔的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
一种抗Ctrb1的抗体及其用途
[0001]本专利技术涉及生物医药领域，尤其是涉及一种抗Ctrb1的抗体及其用途。具体而言，本专利技术涉及抗Ctrb1抗体的制备及其在检测和治疗与胃癌等癌症相关疾病中的用途。
技术介绍
[0002]胃癌是目前世界上死亡率排名第三位的恶性肿瘤。据统计，2018年全球有103.3万新发胃癌和78.3万胃癌死亡患者，其中发病率和死亡率最高的是亚洲东部地区。
[0003]胃肠道肿瘤是异质性非常强的肿瘤，近年来，由于诊断水平的不断提高，早期胃癌发现率的上升，加之外科手术方法的不断改进，其治疗的总体水平有了明显提高。但是，目前各种治疗手段依然面临着化疗药物敏感性差，特异性不高，缺乏有效的二线药物等问题。其中最为关键的因素是胃肠道肿瘤在其早期发展过程中并未能被发现，现有的肿瘤标志物普遍存在敏感性差、特异性低的缺点，使得患者错过了最佳治疗时间。目前胃肠道肿瘤最常检查的血清标准物主要包括CEA、CA19
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9，但由于在多种腺癌中均有水平升高，特异性不高，需多指标联合以提高阳性率。因此，寻找肿瘤早期标志物仍是一项亟待解决且迫在眉睫的国际难题。
[0004]近年来，越来越多的研究表明，分泌蛋白与细胞连接、转移、分化、增殖和肿瘤发生等密切相关，也是筛选肿瘤标志物的重要来源。然而目前缺少足够多的胃癌相关的胞外分泌蛋白的研究。
技术实现思路
[0005]本专利技术的目的在于提供一种抗Ctrb1的抗体及其用途。
[0006]本专利技术的目的可以通过以下技术方案来实现：
[0007]本专利技术首先提供一种抗Ctrb1的抗体，由重链和轻链组成，所述抗体的重链可变区序列分别为SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2；轻链可变区序列分别为SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5。
[0008]本专利技术提供的抗Ctrb1的抗体可以结合Ctrb1。
[0009]在本专利技术的一些实施方式中，所述的抗Ctrb1的抗体还包括选自由IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、IgA2、IgM、IgD和IgE组成的同种型的Fc结构域。
[0010]在本专利技术的一些实施方式中，所述抗Ctrb1抗体为单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体或者双特异性抗体。
[0011]在本专利技术的一些实施方式中，抗Ctrb1的抗体对人Ctrb1的结合通过Elisa或蛋白质印迹法测定法进行测定。
[0012]本专利技术还提供一种抗体制剂，所述抗体制剂包括：
[0013](a)抗Ctrb1的抗体；以及
[0014](b)载体。
[0015]在本专利技术的一个实施方式中，所述载体包括缓冲剂、无菌水或任选的表面活性剂，
或抗Ctrb1的抗体对应核酸的宿主细胞或者表达载体等。
[0016]本专利技术还提供一种抗体药物偶联物，所述的抗体药物偶联物含有：
[0017](a)抗体部分，所述抗体部分选自抗Ctrb1的抗体；
[0018](b)与所述抗体部分偶联的偶联部分。
[0019]在本专利技术的一个实施方式中，所述偶联部分选自下组：可检测标记物、药物、毒素、细胞因子、放射性核素或酶中的一种或几种的组合。
[0020]本专利技术还提供一种试剂盒，所述的试剂盒含有所述的抗体制剂，以及盛装所述抗体制剂的容器。
[0021]本专利技术还提供一种CAR构建物，所述的CAR构建物的抗原结合区域的scFv区段为特异性结合于Ctrb1的结合区。
[0022]本专利技术还提供一种重组的免疫细胞，所述的免疫细胞表达外源的所述的CAR构建物。
[0023]本专利技术还提供一种活性成分的用途，所述活性成分选自下组：抗Ctrb1的抗体、抗体药物偶联物、或其组合、CAR构建物、免疫细胞，所述活性成分用于：
[0024](a)制备检测试剂或试剂盒；
[0025](b)制备预防和/或治疗Ctrb1相关疾病的药物或制剂；和/或
[0026](c)制备预防和/或治疗癌症或肿瘤的药物或制剂。
[0027]本专利技术还提供一种药物组合物，所述药物组合物含有：
[0028](a)活性成分，所述活性成分选自下组：抗Ctrb1的抗体、抗体药物偶联物、或其组合、CAR构建物、免疫细胞，以及
[0029](b)药学上可接受的载体。
[0030]本专利技术还提供抗Ctrb1抗体在制备用于治疗癌症的药物中的用途。
[0031]在本专利技术的一个实施方式中，所述癌症选自乳腺癌、黑色素瘤、B细胞淋巴瘤、头颈癌、结肠癌、胃癌、前列腺癌或肺癌中的一种或几种。
[0032]本专利技术通过文库筛选发现胞外分泌蛋白Ctrb1在胃癌组织微环境中间显著上调。截至目前，以Ctrb1蛋白作为治疗胃肠道肿瘤的靶点，国内外尚无报道。
[0033]本专利技术以重组的人Ctrb1制备获得的单抗对于胃癌细胞具有杀伤作用，在制备用于治疗胃癌的药物中的具有广阔的应用前景。
附图说明
[0034]图1：ELISA检测抗Ctrb1抗体与Ctrb1结合的检测。
[0035]图2：Ctrb1抗体抑制人胃癌细胞系的增殖。
具体实施方式
[0036]下面结合附图和具体实施例对本专利技术进行详细说明。
[0037]实施例1
[0038]抗Ctrb1抗体制备及纯化
[0039]使用重组人Ctrb1蛋白作为免疫原(293F细胞系表达纯化获得)。将免疫抗原溶于PBS，与等体积的弗氏完全佐剂混合均匀，形成油包水乳剂。初次免疫采用皮下多点免疫，免
疫剂量为100μg/只。初次免疫3周后，使用不完全弗氏佐剂与免疫抗原等体积混合乳化，以同样的途径和剂量免疫小鼠。之后三周后加强免疫1次，使小鼠血清的抗体效价达一万以上。在最后一次加强免疫一周之后进行眼球取血，ELISA测定血清效价。若小鼠血清效价未达到一万，必须继续加强免疫数次。效价达一万以上的小鼠，融合前三天进行冲击免疫，取不加佐剂抗原，尾静脉注射。融合前10
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14d,复苏小鼠骨髓瘤细胞SP2/0,用含10％FCS的DMEM培养基培养。融合前24
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36h用新鲜培养基将细胞浓度调整为3x105/m1。融合前将DMEM、PEG溶液置于37℃水浴中预温。收集2x107个生长良好的SP20/细胞，DMEM洗涤2遍后,与(1
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2)x108个脾脏细胞充分混匀于50ml透明塑料离心管中，用DMEM再洗涤一遍,1OO0rPm离心5min后，弃尽上清，轻轻弹松细胞使之成糊状。将离心管置于37℃保温杯中，预热5min后，吸取lml经37℃预温的50％的PGE溶液，将吸管轻轻插入细胞底部,在lmin内匀速加完融合剂，且边加边搅拌，然后静置lmin。再加入40m1 37℃预温的DMME，先慢后快，边加边轻轻搅拌，然后37℃静置5
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10min。800rpm离心10min后弃上清，将细胞重悬于55
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【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种抗Ctrb1的抗体，其特征在于，由重链和轻链组成，所述抗体的重链可变区序列分别为SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2；轻链可变区序列分别为SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5。2.根据权利要求1所述的一种抗Ctrb1的抗体，其特征在于，所述抗体可以结合Ctrb1。3.根据权利要求1中所述的抗Ctrb1的抗体，其特征在于，其还包括选自由IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、IgA2、IgM、IgD和IgE组成的同种型的Fc结构域。4.根据权利要求1中所述的抗Ctrb1的抗体，其特征在于，其中所述抗Ctrb1抗体为单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体或者双特异性抗体。5.一种抗体制剂，其特征在于，所述的抗体制剂包括：(a)如权利要求1所述抗Ctrb1的抗体；以及(b)载体，所述载体选自缓冲剂、无菌水、表面活性剂，或权利要求1所述抗Ctrb1的抗体的核酸的宿主细胞或者表达载体。6.一种抗体药物偶联物，其特征在于，所述的抗体药物偶联物含有：(a)抗体部分，所述抗体部分选自如权利要求1所述所述抗Ctrb1的抗体；(b)与所述抗体部分偶联的偶联部分，所述偶联部分选自下组：可检测标记物、药物、毒素、细胞因子...
【专利技术属性】
技术研发人员：周兆才，焦石，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：
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