本发明专利技术公开了一种用于肾癌诊疗的生物标志物，具体的该标志物为LINC02539。本发明专利技术首次发现LINC02539的差异表达与肾癌的发生发展相关，在肾癌患者中，LINC02539的表达上调，提示干预LINC02539基因表达可能成为肾癌治疗的新途径。为了进一步验证，通过抑制剂降低LINC02539的表达发现可以显著降低肾癌细胞的增殖和细胞形成克隆集落数。增殖和细胞形成克隆集落数。增殖和细胞形成克隆集落数。
【技术实现步骤摘要】
LINC02539在肾癌诊断和治疗中的应用
[0001]本专利技术涉及生物医药
，特别涉及LINC02539在肾癌诊断和治疗中的应用。
技术介绍
[0002]肾细胞癌(RCC)是一类常见的起源于肾小管上皮细胞的泌尿系统恶性肿瘤。在男性和女性癌症新发病例中，肾细胞癌的比例分别为3％和5％。透明细胞肾细胞癌(ccRCC)是最常见和最具侵袭性的肾癌，占RCC新病例的80％，死亡率很高。其他亚型包括乳头状癌、嫌色性癌和集合管癌。由于其转移率高，诊断困难，预后不良是肾细胞癌的典型特征。目前，手术切除是局部肾细胞癌的一线治疗手段。但即使在根治性肾切除术后，约30％的患者仍会出现局部复发或远端复发。肾恶性肿瘤的治疗是一个持续的挑战，因此揭示肾细胞癌的发病机制、探寻有效的治疗方式是目前肾细胞癌研究领域的焦点。
[0003]LncRNA是一类长度超过200个核苷酸不能编码蛋白质或多肽的转录本。近年来，随着高通量测序技术的广泛应用，原本被认为是基因组转录“噪音”的长链非编码RNA被证明在许多疾病中发挥重要的生物学作用。大量研究发现，LncRNA通过与染色质修饰蛋白结合并改变其状态，同时与转录因子、RNA结合蛋白和miRNA结合，参与肿瘤的癌变和蛋白编码基因表达失调。其在肿瘤的生物学行为上越来越被人重视，为诊断治疗肿瘤提供了一种新的途径。目前已发现有多种LncRNA与肾细胞癌相关，如LncRNA HIF1A
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AS2、LncRNA 00312、LncRNA SNHG12等。目前关于LncRNA在肾细胞癌调控机制中的研究还未被阐明，探寻LncRNA，对肾细胞癌的诊断、预防和治疗起着重要作用，并且能为肾细胞癌的基因靶向治疗提供新的方向。
技术实现思路
[0004]为了弥补现有技术的不足，本专利技术的目的在于，提供一种与肾癌发生发展相关的生物标志物，通过检测生物标志物，从而实现肾癌的早期诊断以及肾癌的精准分子靶向治疗。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0006]本专利技术提供了检测LINC02539的试剂在制备诊断肾癌的产品中的应用。
[0007]所述试剂包括用RT
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PCR、实时定量PCR、原位杂交、northern blotting、芯片或高通量测序平台检测LINC02539表达水平的试剂。
[0008]进一步，用实时定量PCR检测LINC02539的试剂至少包括一对特异性扩增LINC02539的引物。
[0009]进一步地，所述试剂包括：
[0010]特异性识别LINC02539的探针；或
[0011]特异性扩增LINC02539的引物。
[0012]进一步地，所述特异性扩增LINC02539的引物序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。
[0013]本专利技术提供了一种诊断肾癌的产品，所述产品包括检测样本中LINC02539表达水平的试剂。
[0014]所述产品包括芯片、制剂或试剂盒。其中，所述芯片包括固相载体以及固定在固相载体的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括用于检测LINC02539转录水平的针对LINC02539的寡核苷酸探针；所述试剂盒包括用于检测LINC02539转录水平的引物或芯片。
[0015]固相载体可采用基因芯片领域的各种常用材料，例如但不限于尼龙膜，经活性基团(如醛基、氨基等)修饰的玻片或硅片、未修饰的玻片、塑料片等。
[0016]本专利技术中基因检测试剂盒或基因芯片可用于检测包括LINC02539基因在内的多个基因(例如，与肾癌相关的多个基因)的表达水平，将肾癌的多个标志物同时进行检测，可大大提高肾癌诊断的准确率。
[0017]进一步，所述检测样本中LINC02539的水平的试剂包括：
[0018]特异性识别LINC02539的探针；或
[0019]特异性扩增LINC02539的引物。
[0020]进一步，特异性扩增LINC02539的引物序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。
[0021]本专利技术提供了LINC02539在制备治疗肾癌的药物组合物中的应用。
[0022]进一步地，所述的药物组合物包括LINC02539的抑制剂，和/或与所述抑制剂配伍的其他药类以及药学上可接受的载体和/或辅料，所述抑制剂能够抑制LINC02539或涉及LINC02539上游或下游途径的物质的表达。所述抑制剂可以在DNA水平或RNA(即基因产物)水平上起作用。
[0023]进一步地，所述抑制剂为针对LINC02539的siRNA。
[0024]本专利技术在筛选有效的siRNA序列时，通过大量的比对分析，从而找出最佳的有效片段。在本专利技术的具体实施方式中，专利技术人设计合成了多种siRNA序列，并将它们分别通过转染试剂转染肾癌细胞系进行验证，结果检测出干扰效果较好的干扰分子，它们分别具有SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10所示的序列，进一步地在细胞水平实验，结果证明对于细胞实验而言抑制效率非常高。
[0025]本专利技术的核酸抑制物如siRNA可以化学合成，也可以通过一个重组核酸结构里的表达盒转录成单链RNA之后进行制备。siRNA等核酸抑制物，可通过采用适当的转染试剂被输送到细胞内，或还可采用本领域已知的多种技术被输送到细胞内。
[0026]本领域技术人员将认识到，本专利技术的实用性并不局限于对本专利技术的标志物基因的任何特定变体的基因表达进行定量。在具体的实施方案中，作为非限制性的实例，标志物基因LINC02539具有目前国际公共核酸序列数据库GeneBank中LINC02539基因(NC_000001.11)所示的序列。
[0027]在本专利技术中，术语“探针”指能与另一分子的特定序列或亚序列或其它部分结合的分子。除非另有指出，术语“探针”通常指能通过互补碱基配对与另一多核苷酸(往往称为“靶多核苷酸”)结合的多核苷酸探针。根据杂交条件的严谨性，探针能和与该探针缺乏完全序列互补性的靶多核苷酸结合。探针可作直接或间接的标记，其范围包括引物。杂交方式，包括，但不限于：溶液相、固相、混合相或原位杂交测定法。
[0028]在本专利技术中，药学上可接受的载体包括(但并不限于)：稀释剂、赋形剂如乳糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、淀粉、水等、填充剂如淀粉、蔗糖等；粘合剂如单糖浆、葡萄糖溶液、淀粉
溶液、纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；湿润剂如甘油；崩解剂如干淀粉、海藻酸钠、海带多糖粉末、琼脂粉末、碳酸钙和碳酸氢钠；吸收促进剂季铵化合物、十二烷基硫酸钠等；表面活性剂如聚氧化乙烯山梨聚糖脂肪酸酯、十二烷基硫酸钠、硬脂酸单甘油酯、十六烷醇等；致湿剂如甘油、淀粉等；吸附载体如淀粉、乳糖、斑脱土、硅胶、高岭土和皂粘土等；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙和镁、聚乙二醇、硼酸粉末等。
[0029]在本专利技术中，药物组合物可以使用不同的添加剂进行制备，例如缓冲剂、稳定剂、抑菌剂、等渗剂、螯合剂、pH控制本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.检测LINC02539的试剂在制备诊断肾癌的产品中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述试剂包括：特异性识别LINC02539的探针；或特异性扩增LINC02539的引物。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述特异性扩增LINC02539的引物序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。4.一种诊断肾癌的产品，其特征在于：所述产品包括检测样本中LINC02539表达水平的试剂。5.根据权利要求4所述的产品，其特征在于：所述产品包括芯片、制剂或试剂盒。6.LINC02539在制备治疗肾癌的药物组合物中的应用。7...
【专利技术属性】
技术研发人员：李叶平，叶晓丽，郑建建，李鑫淼，
申请(专利权)人：温州医科大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：
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