对SARS-CoV-2糖蛋白S具有中和活性的治疗抗体制造技术

本发明专利技术涉及特异性结合SARS

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】对SARS
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CoV
‑
2糖蛋白S具有中和活性的治疗抗体


[0001]本专利技术涉及特异性结合SARS
‑
CoV
‑
2糖蛋白S(突刺)的抗体和抗体的抗原结合片段以及使用那些抗体的诊断和治疗方法。

技术介绍

[0002]冠状病毒疾病2019(COVID
‑
19)是由严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS
‑
CoV
‑
2)所引起的高度传染性疾病。
[0003]COVID
‑
19的常见症状包括发热、咳嗽、疲劳、呼吸急促以及嗅觉和味觉丧失。尽管大部分病例造成轻症，但是一些发展为以细胞因子风暴、多器官衰竭、脓毒性休克和血液凝块为特征的急性呼吸窘迫综合征(ARDS)。从暴露到症状发生的时间通常为约5天，但是可以在2至14天的范围内。
[0004]SARS
‑
CoV
‑
2先前被称为其临时名称“2019新型冠状病毒”(2019
‑
nCoV)。如国立卫生研究院所描述的，它是“SARS
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CoV
‑
1”(或仅“SARS
‑
CoV”)的后继。
[0005]在分类学上，SARS
‑
CoV
‑
2属于冠状病毒科，正义单链RNA病毒。冠状病毒是大型大致球状颗粒，其具有球状表面突起。病毒颗粒的平均直径为约125nm(0.125μm)。包膜直径为85nm并且突刺长20nm。
[0006]病毒包膜由脂质双层组成，其中锚定了膜(M)、包膜(E)和突刺(S)结构蛋白。脂质双层中E:S:M的比率为约1:20:300(wt/wt)。冠状病毒颗粒平均具有74个表面突刺。
[0007]冠状病毒表面突刺是糖蛋白蛋白S的同源三聚体，其由S1和S2亚基组成。
[0008]据信类似于SARS
‑
CoV和MERS，该病毒主要通过特异性结合至受体血管紧张素转化酶2(ACE2)进入人细胞。据信突刺糖蛋白的S1
‑
结构域结合宿主的ACE2
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受体并且S2结构域介导病毒与宿主细胞膜的融合。
[0009]尽管SARS
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CoV和SARS
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CoV
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2之间存在一定相似性，但是已发现SARS
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CoV
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2S蛋白以比SARS
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CoV显著更高的亲和力特异性结合ACE2(10至20倍)。此外，已表明两种病毒S蛋白之间的抗体交叉反应性有限，从而表明其对ACE2的识别不同于SARS
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CoV。
[0010]几种公开的SARS
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CoV Ab对SARS
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CoV
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2S蛋白不具有明显的特异性结合。近期研究(Tian等人，2020)显示SARS
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CoV抗体CR3022，其特异性结合至SARS
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CoV
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2RBD(受体结合结构域)，而且还结合ACE2
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RBD
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相互作用位点外的高度保守区域，并且具有弱中和能力或无中和能力。
[0011]到目前为止，据报道全世界超过5.600.000人感染SARS
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CoV
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2，并且约350.000人死于COVID
‑
19。
[0012]防止病毒进入宿主细胞的具有治疗质量的中和抗体作为初步治疗将是至关重要的，特别是在尚未鉴定出药物或疫苗接种的COVID
‑
19的情况下。
[0013]因此，急需开发处于适合于治疗性使用的质量的预防SARS
‑
CoV
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2感染的中和抗体。
[0014]此外，据报道SARS
‑
CoV
‑
2显示出“逃逸”突变。这些是突变，特别是RBD区中的突变，
其仍能使病毒经由其突刺蛋白结合细胞ACE
‑
2蛋白，但是似乎允许逃逸宿主免疫应答。
[0015]该发现对于估计在成功克服首次SARS
‑
CoV
‑
2感染后被SARS
‑
CoV
‑
2再次感染的概率具有极大的重要性，并且对疫苗开发和抗病毒剂，如单克隆抗体的治疗具有影响。
[0016]克服病毒对某些治疗建立耐受性的危险的现有技术尝试包括多克隆抗体或者两种或更多种单克隆抗体的混合物的使用，所述抗体结合至靶标蛋白的不同表位。
[0017]然而，这些策略包括其它不利后果。例如，多克隆抗体的确显示出广泛的特异性，并因此难以预测它们的效力。因此，基于多克隆抗体的治疗剂难以计量和以恒定质量生产。
[0018]两种或更多种单克隆抗体的混合物立刻使生产成本加倍，并且因为每种抗体的效力和药物动力学性质不同，因此难以配制以维持可靠的施用方案。
[0019]然而，本专利技术提供了对SARS
‑
CoV
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2的S1
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蛋白显示出有利的结合谱的单克隆抗体，从而允许结合迄今为止所报道的7种不同的“逃逸”突变体的SARS
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CoV
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2并中和它们的活性，并且还允许特异性结合至“7
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PM
‑
突变体”，其在一个分子中包含了全部7个已知的“逃逸”突变。

技术实现思路

[0020]在第一实施方式中，本专利技术涉及特异性结合至具有SEQ ID NO：02的氨基酸序列的SARS
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CoV
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2糖蛋白S并且中和SARS
‑
CoV
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2的感染活性的治疗性抗体或其抗原结合片段。
[0021]在第二实施方式中，本专利技术涉及治疗性抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段与包含SEQ ID NO：406中的氨基酸序列的重链可变区和SEQ ID NO：408中的氨基酸序列的轻链可变区的抗体竞争对SARS
‑
CoV
‑
2糖蛋白S的结合。
[0022]在另一个实施方式中，本专利技术涉及治疗性抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段与包含SEQ ID NO：909
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928(YU505
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A02)；SEQ ID NO：349
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368(YU536
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D04)；SEQ ID NO：389
‑
408(YU537
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H11)和/或SEQ ID NO：1305
‑
1312(STE90
‑
C11)的氨基酸序列中的至少一个、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种人源化或人治疗性单克隆抗体或其抗原结合片段或基本类似的变体，所述治疗性单克隆抗体或其抗原结合片段或基本类似的变体特异性结合至具有SEQ ID NO：02的氨基酸序列的SARS
‑
CoV
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2糖蛋白S并且中和SARS
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CoV
‑
2的感染活性。2.根据权利要求1所述的治疗性抗体或其抗原结合片段或基本类似的变体，其中SARS
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CoV
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2的感染活性的中和导致通过感染性SARS
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CoV
‑
2VERO E6中和测定测量的至少95％的汇合得分。3.根据权利要求1或2中任一项所述的治疗性抗体或其抗原结合片段或基本类似的变体，其中所述抗体或抗原结合片段特异性结合至SARS
‑
CoV
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2糖蛋白的S1结构域的受体结合结构域(RBD)(SEQ ID NO：06)内的表位并且特异性结合至选自由以下组成的清单的SARS
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CoV
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2糖蛋白的S1结构域的逃逸突变中的至少一种：S1
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V367F、S1
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N439K、S1
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G476S、S1
‑
V483A、S1
‑
E484K、S1
‑
G485R、S1
‑
F486V、S1
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7PM
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突变体(SEQ ID NO：1730)及它们的任意组合。4.根据权利要求3所述的治疗性抗体或其抗原结合片段或基本类似的变体，其中所述抗体或其抗原结合片段特异性结合至RBD(SEQ ID NO：06)内包含氨基酸400
‑
FVIRGDEVRQIAPQTGKIADDYN
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422的表位以及S1
‑
7PM
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突变体(SEQ ID NO：1730)两者。5.根据权利要求1或2中任一项所述的治疗性抗体或其抗原结合片段或基本类似的变体，其中所述抗体或其抗原结合片段与包含SEQ ID NO：1305中的氨基酸序列的重链可变区；和SEQ ID NO：1309中的氨基酸序列的轻链可变区的抗体，或者与包含SEQ ID NO：926中的氨基酸序列的重链可变区和SEQ ID NO：928中的氨基酸序列的轻链可变区的抗体竞争对RBD(SEQ ID NO：06)内表位的结合；并且其中污染比率小于0.2。6.根据权利要求1或2中任一项所述的治疗性抗体或其抗原结合片段或基本类似的变体，其中所述抗体或其抗原结合片段与包含SEQ ID NO：1305中的氨基酸序列的重链可变区；和SEQ ID NO：1309中的氨基酸序列的轻链可变区的抗体，或者与包含SEQ ID NO：926中的氨基酸序列的重链可变区和SEQ ID NO：928中的氨基酸序列的轻链可变区的抗体竞争对S1
‑
7PM
‑
突变体(SEQ ID NO：1730)内的表位165
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AKRVNCYFPLQSYGFQ
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180的结合。7.根据前述权利要求中任一项所述的治疗性抗体或其抗原结合片段或基本类似的变体，包含具有选自由以下组成的组的氨基酸序列的重链CDR1(H
‑
CDR1)结构域：SEQ ID NO：1306、910、350和390；具有选自由以下组成的组的氨基酸序列的重链CDR2(H
‑
CDR2)结构域：SEQ ID NO：1307、912、352和392；具有选自由以...

【专利技术属性】
技术研发人员：安德烈，
申请(专利权)人：科拉特疗法有限责任公司，
类型：发明
国别省市：