一种易掉片组织的预处理方法及其多重免疫荧光染色方法技术

本发明专利技术提供了一种易掉片组织的预处理方法及其多重免疫荧光染色方法，属于生物医学类实验病理技术领域。本发明专利技术中的易掉片组织的预处理方法采用捞片后直接在紫外照射下进行光敏交联的步骤，结合特定的照射时间，使得所获切片牢固，避免了烤片步骤，同时解决了多重免疫荧光染色中易掉片类组织容易脱落的问题。本发明专利技术的多重免疫荧光染色方法能够缩短程序时间、提升处理效率。提升处理效率。提升处理效率。

【技术实现步骤摘要】
一种易掉片组织的预处理方法及其多重免疫荧光染色方法


[0001]本专利技术属于生物医学类实验病理
，尤其涉及一种易掉片组织的预处理方法及其多重免疫荧光染色方法。

技术介绍

[0002]目前实验病理技术中，石蜡切片免疫学染色都会经历抗原修复过程，该过程通常会导致易掉片类组织，比如软骨、骨、肌腱等组织切片发生脱落的情况，严重影响组织结构完整性。
[0003]近年来兴起的多重免疫荧光染色技术，由于不受抗体种属的限制，可在一张石蜡切片上进行6到8个抗体的共同标记，所以得到广泛应用。该技术主要是源于 Zsuzsanna T
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va Mezey发表的酪氨酸放大技术（Tyramide signal amplification，TSA），其技术流程如图1所示。在多重免疫荧光染色中，抗原修复与微波处理去除抗体的步骤是必须的。随着检测靶点的增加，组织切片就需要多进行一轮的微波处理，在这种处理方式下，软骨、骨、肌腱一类易掉片组织很难保证组织的完整性，所以目前很难开展易掉片组织的多重免疫荧光染色。目前该方法已支持一篇软骨组织研究文章发表（Cellular features of localized microenvironments in human meniscal degeneration: a single
‑
cell transcriptomic study，eLife，2022 Dec 22;11:e79585.doi: 10.7554/eLife.79585），该文章是已查阅的第一篇软骨组织进行mIHC染色的报道。骨组织与肌腱组织也已完成mIHC实验，也未见相关技术文献报道。
[0004]综上，多重免疫荧光染色（mIHC）技术广泛应用于实验病理
，但该技术除了会经历抗原修复过程，还会进行多次微波处理去除抗体，导致易掉片类组织在mIHC中难以应用。因此，如何将易掉片组织应用到多重免疫荧光染色中，成为人们亟待解决的问题。

技术实现思路

[0005]本专利技术的主要目的在于提供一种易掉片组织的预处理方法及其多重免疫荧光染色方法，以克服现有技术中的不足。
[0006]为实现前述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案包括：根据本专利技术实施例的第一方面，提供了一种易掉片组织的预处理方法，包括以下步骤：将组织切片进行捞片，收集切片后用紫外照射1~5min，得到固化切片；将固化切片进行脱蜡，完成易掉片组织的预处理；所述捞片采用的水剂中含有油状光敏交联剂。
[0007]优选的，所述组织切片来源于软骨、骨或肌腱。
[0008]优选的，所述紫外照射的过程中将切片的正反面均进行照射。
[0009]优选的，所述脱蜡包括以下步骤：将固化切片依次采用脱蜡剂、无水乙醇、95~99.99% v/v乙醇、90~95% v/v乙醇和
70~90% v/v乙醇进行浸泡。
[0010]优选的，所述脱蜡剂选自苯类脱蜡剂、甲苯类脱蜡剂、氯化烃类脱蜡剂或精油类脱蜡剂中的一种或几种。
[0011]优选的，所述脱蜡剂的浸泡次数为2~4次；所述无水乙醇、95~99.99% v/v乙醇、90~95% v/v乙醇和70~90% v/v乙醇的浸泡次数为1~3次。
[0012]本专利技术还提供了上述易掉片组织的预处理方法在组织多重免疫荧光染色中的应用。
[0013]本专利技术还提供了一种易掉片组织多重免疫荧光染色方法，包括以下步骤：采用上述方法对易掉片组织进行预处理，得到待染样本；将待染样本依次进行抗原修复、封闭、一抗孵育、二抗孵育、荧光基团孵育、微波处理去除抗体、染色，完成易掉片组织多重免疫荧光染色。
[0014]优选的，所述抗原修复具体包括以下步骤：将待染样本与抗体洗脱液混合，修复2~4min。
[0015]优选的，所述修复采用高火条件；所述高火条件的功率为600~700W。
[0016]与现有技术相比，本专利技术的优点包括：本专利技术提供一种易掉片组织的预处理方法及其多重免疫荧光染色方法，所述预处理方法中采用捞片后直接在紫外照射下进行光敏交联的步骤，结合特定的照射时间，使得所获切片牢固，避免多重免疫荧光染色中易掉片类组织容易脱落的问题。
[0017]此外，本专利技术的多重免疫荧光染色方法在抗原修复过程大大缩短了程序时间、提升了处理效率。
附图说明
[0018]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0019]图1为现有技术中Zsuzsanna T
ó
th 和
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va Mezey发表的酪氨酸放大技术的流程示意图；图2为脱蜡复水后，不同烤片时间的实验组染色结果图，其中：图2（a）为烤片0h、也即未烤片直接染色的结果；图2（b）为烤片4
‑
10h的结果；图2（c）为烤片18
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24h的结果；图3为脱蜡复水后，不同光敏交联时间的实验组染色结果图，其中：图3（a）为光敏交联时间照射0s、也即未照射的结果；图3（b）为光敏交联时间照射20s的结果；图3（c）为光敏交联时间照射40s的结果；图3（d）为光敏交联时间照射1min的结果；图3（e）为光敏交联时间照射2min的结果；图3（f）为光敏交联时间照射3min的结果；图3（g）为光敏交联时间照射4min的结果；图3（h）为光敏交联时间照射5min的结果；图4为首次微波处理后，不同烤片时间的实验组染色结果图，其中：图4（a）为烤片0h、也即未烤片的结果；图4（b）为烤片4
‑
10h的结果；图4（c）为烤片18
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24h的结果；
图5为首次微波处理后，不同光敏交联时间的实验组染色结果图，其中：图5（a）为光敏交联时间照射20s的结果；图5（b）为光敏交联时间照射40s的结果；图5（c）为光敏交联时间照射1min的结果；图5（d）为光敏交联时间照射2min的结果；图5（e）为光敏交联时间照射3min的结果；图5（f）为光敏交联时间照射4min的结果；图5（g）为光敏交联时间照射5min的结果；图6为第2次微波处理后，不同烤片时间的实验组染色结果图，其中：图6（a）为烤片0h、也即未烤片的结果；图6（b）为烤片4
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10h的结果；图6（c）为烤片18
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24h的结果；图7为第2次微波处理后，不同光敏交联时间的实验组染色结果图，其中：图7（a）为光敏交联时间照射20s的结果；图7（b）为光敏交联时间照射40s的结果；图7（c）为光敏交联时间照射1min的结果；图7（d）为光敏交联时间照射2min的结果；图7（e）为光敏交联时间照射3min的结果；图7（f）为光敏交联时间照射4min的结果；图7（g）为光敏交联时间照射5mi本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种易掉片组织的预处理方法，其特征在于，包括以下步骤：将组织切片进行捞片，收集切片后用紫外照射1~5min，得到固化切片；将固化切片进行脱蜡，完成易掉片组织的预处理；所述捞片采用的水剂中含有油状光敏交联剂。2.根据权利要求1所述的易掉片组织的预处理方法，其特征在于，所述组织切片来源于软骨、骨或肌腱。3.根据权利要求1所述的易掉片组织的预处理方法，其特征在于，所述紫外照射的过程中将切片的正反面均进行照射。4.根据权利要求1所述的易掉片组织的预处理方法，其特征在于，所述脱蜡包括以下步骤：将固化切片依次采用脱蜡剂、无水乙醇、95~99.99% v/v乙醇、90~95% v/v乙醇和70~90% v/v乙醇进行浸泡。5.根据权利要求4所述的易掉片组织的预处理方法，其特征在于，所述脱蜡剂选自苯类脱蜡剂、甲苯类脱蜡剂、氯化烃类脱蜡剂或精油类脱蜡剂中的一种或几种。6.根据权利要求4所述的易掉片组织的预处...

【专利技术属性】
技术研发人员：张忆，李越，张宛丽，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：