一种调节植物开花及生长周期的小RNA序列及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种调节植物开花及生长周期的小RNA序列及其应用。所述小RNA序列包含如SEQ ID No：1所示的序列及其具有14个以上连续或不连续的相同碱基。该小RNA序列最初是从富含有机肥料的土壤中鉴定而得到，是一种自然存在的成分，并已经证明对拟南芥的生长和开花具有良好的调控效果，无须添加佐剂即可获得效果，对环境没有污染。可通过叶面喷施或预埋土壤中进行应用。本申请的小RNA序列除可以进行化学合成外，还可以在植物体中进行绿色生产，对减碳减排具有重要意义。对减碳减排具有重要意义。对减碳减排具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
一种调节植物开花及生长周期的小RNA序列及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，特别涉及一种小RNA序列，以及该小RNA序列在调节植物的开花及生长周期中的应用。

技术介绍

[0002]植物的所有生理活动，如种子萌发、生根、生长、开花、结实、衰老、脱落、休眠等，都离不开植物生长物质的调控。这类物质在植物体内含量很少，但却具有重要的生理作用，是植物一切生命活动的关键。植物生长调节剂是一类人工合成或从微生物中提取的物质，具有类似或相同于植物内源激素的功能，对作物的生长发育起到与内源激素相同的调节、控制、指挥、诱导作用。
[0003]目前，已经有数百种植物生长调节剂通过人工合成或提取自微生物，其中有近百余种在农业生产中得到了广泛的应用。例如多效唑、烯效唑、矮壮素、乙烯利、甲哌鎓、氯吡脲、苄氨基嘌呤、抑芽丹、胺鲜酯、芸苔素内酯、三十烷醇、赤霉酸、丁酰肼、萘乙酸、吲哚乙酸、激动素、复硝酚钠、对氯苯氧乙酸钠等。植物生长调节剂具有使用成本低、见效快、用量微、效果显著、投入产出比高的特性。
[0004]目前使用的生物调节剂大多通过化学合成并含有多种佐剂。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种环境土壤中存在的具有调节植物开花及生长周期的小RNA序列及其应用，可以增加人力控制植物营养生长及开花时间，可以作为一种新型的生物调节剂。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0007]一种调节植物开花及生长周期的小RNA序列，其特征在于：包含如SEQ ID No：1所示的序列中的14个及以上连续或不连续的碱基。
[0008]优选的，所述调节植物开花及生长周期的小RNA序列如SEQ ID No：1所示。
[0009]一种含有权利要求1所述的小RNA序列的生物制剂。
[0010]优选的，所述生物制剂为单剂或复合剂。
[0011]优选的，所述生物制剂为植物生长调节剂、生物肥料或土壤改良剂。
[0012]所述的小RNA序列在调节植物开花及生长周期中的应用。
[0013]优选的，所述小RNA序列能够增加花序数量及延长植物生长周期。
[0014]优选的，所述植物为南芥。
[0015]优选的，将含有所述小RNA序列的植物生长调节剂喷施于植物，喷施频率为每两天一次。
[0016]优选的，所述植物生长调节剂的浓度为10
‑
200μg/mL。
[0017]有益效果：本专利技术的小RNA序列是从富含有机肥料的土壤中最先鉴定到，属于自然存在的成分，并证明有很好的调控拟南芥生长和开花的效能，无须添加佐剂即可获得效果，
可以叶面喷施也可预埋土壤中。另外，也可以根据具体需求制成复合制剂，延长制剂的药效时间或与其它农药混合施用。本申请的小RNA序列除可以进行化学合成外，也可以在植物体中绿色生产，对减碳减排具有重要意义。
附图说明
[0018]图1为过表达sR1序列的拟南芥表型，其中，a为过表达小RNA(sR1)序列的拟南芥在不同时期的表型，并显示营养期增长的性状(直视图)；b为过表达小RNA(sR1)序列的拟南芥在开花初期的表型(俯视图)；c为过表达小RNA(sR1)序列的拟南芥在生殖期的表型，表现出延缓衰老的特征(俯视图)；d为过表达小RNA(sR1)序列的拟南芥株系内的sR1的相对表达量；
[0019]图2为外施sR1序列的拟南芥表型。
具体实施方式
[0020]下面结合实施例对本专利技术做更进一步的解释。
[0021]本专利技术的一种调节植物开花及生长周期的小RNA序列，其序列如下：
[0022]5’‑
TGGACGGAGAACTGATAAGGGC
‑3’
。
[0023]本专利技术还提供了一种该小RNA序列的生物制剂，生物制剂为由该小RNA序列通过水稀释制成的单剂，或者为由该小RNA序列与其它有效组分组成的复合剂。
[0024]生物制剂为植物生长调节剂、生物肥料或土壤改良剂。
[0025]本专利技术的小RNA序列能够用于调节植物开花及生长周期，能够增加花序数量及延长植物生长周期。使用方法是将含有所述小RNA序列的植物生长调节剂喷施于植物，植物生长调节剂的浓度为10
‑
200μg/mL。
[0026]根据下述实施例，可以更好的理解本专利技术。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本专利技术，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本专利技术。
[0027]实施例1
[0028]以植物为生物反应器表达干扰小RNA序列
[0029]利用重叠PCR方法，以小RNA表达骨架(已在公开号为CN104394892B的专利技术专利中公开)为模板将干扰小RNA的正反义序列置换到表达单元中，替换好的表达骨架纯化后克隆到pBlueScript sk(
‑
)载体上，测序确定序列的正确性。接着利用酶切和亚克隆方法将目的片段构建到双元表达载体上并转入到农杆菌中，准备侵染植株。
[0030]重叠PCR方法构建siRNA表达质粒
[0031]第一轮扩增
[0032]Template 1μL
[0033]10
×
ExTaq buffer 2μL
[0034]dNTP mixture(10mM)0.4μL
[0035]primer1(10μM)0.5μL
[0036]primer2(10μM)0.5μL
[0037]ExTaq Enzyme 0.2μL
[0038]ddH2O 15.6μL
[0039]反应程序：
[0040]Step 1:94℃5min
[0041]Step 2:94℃10s；55℃5s；72℃30s；35cycles；
[0042]Step 3:72℃7min
[0043]Step 4:4℃∞
[0044]引物组合：(1)A+P1(2)P2+P3(3)P4+B
[0045]将第一轮中扩增产物回收，检测后，进行第二轮扩增
[0046]Template(1+2+3)1.4μL
[0047]10
×
ExTaq buffer 2μL
[0048]dNTP mixture(10mM)0.4μL
[0049]primer1(10μM)0.5μL
[0050]primer2(10μM)0.5μL
[0051]ExTaq Enzyme 0.2μL
[0052]ddH2O 15.0μL
[0053]反应程序：
[0054]Step 1:94℃5min
[0055]Step 2:94℃10s；55℃5s；72℃40s；35cycles；
[0056]Step 3:72℃7min
[0057]Step 4:4℃∞本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种调节植物开花及生长周期的小RNA序列，其特征在于：包含如SEQ ID No：1所示的序列中的14个及以上连续或不连续的碱基。2.根据权利要求1所述的调节植物开花及生长周期的小RNA序列，其特征在于：其序列如SEQ ID No：1所示。3.一种含有权利要求1所述的小RNA序列的生物制剂。4.根据权利要求3所述的生物制剂，其特征在于：所述生物制剂为单剂或复合剂。5.根据权利要求3所述的生物制剂，其特征在于：所述生物制剂为植物生长调节剂、生物肥料或土壤改良剂。6....

【专利技术属性】
技术研发人员：洪治，张辰宇，张硕，
申请(专利权)人：南京大学，
类型：发明
国别省市：