快速构建猪伪狂犬病毒PRVCH-17gI/gE双基因缺失株重组转移载体的方法技术

本发明专利技术公开了一种快速构建猪伪狂犬病毒PRV CH

【技术实现步骤摘要】
快速构建猪伪狂犬病毒PRV CH
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17 gI/gE双基因缺失株重组转移载体的方法


[0001]本专利技术属于生物技术基因工程领域，具体涉及一种用于快速构建猪伪狂犬病毒PRV CH
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17 gI/gE双基因缺失株重组转移载体的方法。

技术介绍

[0002]伪狂犬病是以伪狂犬病毒(Pseudorabies virus，PRV)为病原引起牛、羊等多种家畜及狐狸、貂等野生动物发生奇痒(猪除外)、繁殖障碍、脑脊髓炎、高热等症状的疾病。
[0003]目前对该病的防控主要通过疫苗接种方式。从2011年底以来，PRV变异株导致的伪狂犬病疫情在国内爆发，接种过经典毒株疫苗的猪场也有发生感染。由于PRV新流行毒株的抗原性已发生变异，其致病力和传播能力显著增强，传统的经典毒株疫苗的免疫效果不佳，已不能有效防控当前PRV变异毒株的感染，因此开发更加安全、免疫效果好的疫苗对于该病的防控显得尤为重要。
[0004]基因缺失疫苗是当前防治伪狂犬病的重要方法之一。通过基因工程技术以同源重组的方法将病毒的毒力有关的基因或基因本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种快速构建猪伪狂犬病毒PRV CH
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17 gI/gE双基因缺失株载体的方法，包括以下步骤：(1)PCR扩增以下特异目的片段：以伪狂犬病毒PRV CH
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17的DNA作为模板，分别PCR扩增gI/gE基因上游同源臂、gI/gE基因下游同源臂和EGFP表达盒；(2)通过连接酶，将回收的PCR产物与经限制酶Hind III和Xba I双酶切线性化的载体pcDNA3.1(+)以各目的片段与载体摩尔比3:1于16℃连接5小时，构建含荧光标记基因的重组转移载体pcDNA
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IEE；(3)通过限制酶Kpn
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将构建好的转移载体pcDNA
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IEE进行单酶切，以去掉EGFP表达盒，酶切产物电泳、胶回收，再用DNA Ligation Kit进行自身环化，16℃连接30min，构建gI/gE双基因缺失转移载体pcDNA
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IE。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)中，PCR扩增所述gI/gE基因上游同源臂所使用的引物如下：IEU
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F：TAGCGTTTAAACTTAAGCTTGCCGGGACCATCGAGACCAACG；IEU
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R：TAATAACTAGGTACCGCTTCATGCCGCAGGGGTAGTC。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)中，PCR扩增所述gI/gE基因下游同源臂所使用的引物如下：IED
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F：TCTTAACGCGGTACCGCGGCTGTTTGTGCTGGCGCTG；IED
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R：GTTTAAACGGGCCCTCTAGACTCGGTGGTGATGTAGAACGGC。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)中，PCR扩增所述EGFP表达盒所使用的引物如下：egfp
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F：...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴春琼，陈芳，邓桦，
申请(专利权)人：佛山科学技术学院，
类型：发明
国别省市：