长链非编码AC092919.1在治疗类风湿关节炎中的应用制造技术

长链非编码AC092919.1在治疗类风湿关节炎中的应用，属于风湿免疫分子生物学领域。根据核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示的长链非编码AC092919.1基因制备特异性过表达序列和小干扰RAN序列，用于在滑膜成纤维细胞中过表达和干扰长链非编码AC092919.1基因；所述特异性过表达序列和小干扰RAN序列的正向、反向核苷酸序列分别如SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5所示，能够通过调控炎性细胞因子，显著抑制滑膜成纤维细胞(FLS)的增殖及炎症反应。本发明专利技术所建立的检测机制，可以应用于类风湿关节炎辅助诊断试剂、分子靶向治疗试剂或者预后评估试剂等多个方面。方面。方面。

【技术实现步骤摘要】
长链非编码AC092919.1在治疗类风湿关节炎中的应用


[0001]本专利技术属于风湿免疫分子生物学领域，具体是一种长链非编码AC092919.1在治疗类风湿关节炎中的应用。

技术介绍

[0002]类风湿关节炎(RA)是一种慢性自身免疫性疾病，其发病部位累及全身大小关节，其特征是周围关节疼痛、僵硬和肿胀，根据疾病发生发展的程度不同，严重者可导致可致残、甚至死亡死亡，造成严重的家庭以及社会负担。
[0003]滑膜成纤维细胞(FLS)的异常增殖和炎性细胞因子的分泌与关节滑膜病变密切相关，是一个主要的病理启动子，在RA的发病中起关键作用。其主要通过产生细胞因子、趋化因子和基质降解来促进关节破坏。FLS在RA中异常增殖并产生炎症因子，从而促进滑膜细胞的活化，而活化的FLS会分泌更多的炎症因子，最终形成恶性循环并导致RA疾病恶化。但是，RA发病机制目前仍不明确。风湿性疾病主要表现为自身抗原免疫反应异常引的局部或全身炎症症状，而且大部分疾病病因和发病机制尚不完全清楚，早期诊断困难，治疗效果不佳。因此，寻找RA早期诊断、靶向治疗和预后评估的生物标记物，对RA的治疗及预后具有重大的意义。
[0004]随着高通量测序技术的发展，长链非编码RNA实际上是参与基因调控的关键因素，长链非编码RNA参与到RNA剪切和RNA修饰等过程。由于lncRNA数量众多，具有广泛的生物学作用，目前的研究仅是冰山一角。LncRNA在类风湿关节炎中还有很多新的作用尚待发现，明确lncRNA的作用机制可以帮助人们更加深人地了解类风湿关节炎的发病机制，使其作为新的诊断标志和治疗靶点应用于临床。

技术实现思路

[0005]针对目前RA缺乏诊断标志物，缺乏治疗药物靶向性、针对性，本专利技术提供了一种长链非编码AC092919.1在治疗类风湿关节炎中的应用。
[0006]本专利技术的所采用的技术方案为：长链非编码AC092919.1在治疗类风湿关节炎中的应用，具体为：根据核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示的长链非编码AC092919.1基因制备特异性过表达序列和小干扰RAN序列，用于在滑膜成纤维细胞中过表达和干扰长链非编码AC092919.1基因；所述特异性过表达序列和小干扰RAN序列的正向、反向核苷酸序列分别如SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5所示。
[0007]与现有技术相比，本专利技术的有益效果主要表现在：
[0008]1、本专利技术通过实验发现长链非编码AC092919.1在类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞中的表达显著降低。长链非编码AC092919.1与RA疾病活动性指标ESR、CRP、RF、CCP、DAS
‑
28呈负相关。RA患者PBMC中长链非编码AC092919.1诊断RA的ROC曲线表明对RA有一定的诊断价值。
[0009]2、本专利技术同时设计并合成特异性过表达长链非编码AC092919.1过表达质粒和小
干扰序列，能够通过调控炎性细胞因子，显著抑制FLS的增殖及TNF
‑
α所诱导的FLS的炎症反应，可成为RA的分子靶向治疗工具。因此，本专利技术可以应用于类风湿关节炎辅助诊断试剂、分子靶向治疗试剂或者预后评估试剂等方面。
附图说明
[0010]图1表示长链非编码AC092919.1在RA患者和正常人PBMCs中表达。
[0011]图2表示RA患者PBMC中长链非编码AC092919.1诊断RA的ROC曲线。
[0012]图3表示长链非编码AC092919.1与RA临床指标相关性分析。
[0013]图4表示过表达长链非编码AC092919.1在FLS中表达升高。
[0014]图5表示干扰长链非编码AC092919.1在FLS中表达降低。
[0015]图6表示长链非编码AC092919.1过表达和干扰状态下滑膜细胞增殖的变化。
[0016]图7表示长链非编码AC092919.1过表达和干扰状态下炎症细胞因子的变化。
具体实施方式
[0017]下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常是按照常规条件或按照厂商所建议的条件进行实施检测。
[0018]实施例1
[0019]RA患者PBMCs中长链非编码AC092919.1基因的表达情况
[0020]申请人在项目通过伦理委员会审核之后，系统研究人RA新的诊断和治疗靶点，通过抽取RA患者的外周血，提取PBMCs，RT
‑
qPCR法检测长链非编码AC092919.1基因的表达。
[0021]本实施例共收集诊断明确的RA患者血液样本30例，对照组健康人(HC)血液样本30例，共60例样本，患者样本特点见下表。
[0022][0023]长链非编码AC092919.1基因的检测方法，包括RA患者PBMCs提取、TRIzol法提取总RNA、RNA浓度和纯度的测定、cDNA合成及PCR扩增，其具体步骤如下：
[0024]第一步：RA患者PBMCs提取
[0025]室温条件下，在50mL离心管中加入6mL Ficoll
‑
Paque PLUS；10mL离心管中加入4mL新鲜的抗凝血和等量的PBS，混匀，将稀释过的血液样本小心铺到Ficoll
‑
Paque分离液上面，然后将离心管置于水平式离心机内，19℃400g离心35min；离心后分4层，从上往下依次为：血浆层、单核细胞层、Ficoll
‑
Paque PLUS、红细胞层，吸掉血浆层，将单核细胞层转移到另一离心管中，加入至少3倍体积的PBS，混匀，19℃400g离心15min，弃上清；加入6mL PBS重悬细胞，19℃100g离心10min，弃上清；再加入1mL PBS重悬细胞，然后转移到1.5mL EP管中，19℃100g离心10min，弃上清，置
‑
80℃冰箱保存。
[0026]第二步：RNA提取
[0027]收取细胞沉淀，加入1ml TRIzol裂解，加入0.2mL氯仿，剧烈振荡15秒，室温放置5
分钟，4℃12000rpm离心10分钟，取上清(约500ul)加入到另一EP管中，加入0.5mL预冷的异丙醇，温和混匀，冰上孵育30分钟，4℃12000rpm离心15分钟，弃去上清，加入1mL预冷的75
℅
乙醇。4℃12000rpm离心5分钟，弃上清，重复步骤上述步骤，室温干燥RNA沉淀，加入20
‑
50μL DEPC水,
‑
80℃保存备用。
[0028]第三步：RT反应
[0029]去除基因组DNA反应：在0.2mL EP管中，加入总RNA(质量为1μg)、5
×
gDNA Eraser Buffer 2.0μL，gDNA Eraser 1.0μL，DEPC水补足至10μL，轻轻混匀、点动离心；PCR仪上42℃加热2min，立即冰浴1min；在上述EP管中加入PrimeS本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.长链非编码AC092919.1在治疗类风湿关节炎中的应用，其特征在于，根据核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示的长链非编码AC092919.1基因制备特异性过表达序列和小干扰RAN序列，用于...

【专利技术属性】
技术研发人员：文建庭，刘健，王帆帆，谌曦，曹云祥，范海霞，
申请(专利权)人：安徽中医药大学第一附属医院安徽省中医院，
类型：发明
国别省市：