基于金属有机骨架封装鸡新城疫活病毒（LaSota）纳米疫苗及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种基于金属有机骨架（Metal

【技术实现步骤摘要】
基于金属有机骨架封装鸡新城疫活病毒(La Sota)纳米疫苗及其制备方法


[0001]本专利技术涉及一种基于金属有机骨架封装鸡新城疫活病毒(La Sota)纳米疫苗的制备方法。

技术介绍

[0002]鸡新城疫是由鸡新城疫病毒(Newcastle Disease Virus，NDV)引起的一种感染禽消化道、呼吸道、生殖道的急性和高度接触性的传染病，被OIE列为A类疫病，我国农业部将其列为一类疫病。疫苗的免疫接种是防控鸡新城疫的最有效方法之一，且鸡新城疫弱毒活疫苗IV系(La Sota株)是最常用的优良疫苗制品。这主要是由于La Sota株对鸡的保护力强，但是其耐热性能较差，不易保存和运输，常常因“冷链”断裂，疫苗失活而导致免疫失败。为了保证此类疫苗的有效性，在制备、运输、使用和保存过程中都需要冷链，这导致经济成本巨大。因此，迫切需要一种新型纳米疫苗对鸡新城疫活病毒(La Sota)进行保护。
[0003]金属有机骨架(Metal
‑
Organic Frameworks，MOFs)具有大孔容、高比表面积、多样性结构组成等优势使其可作为固定生物活性物质的平台，使生物活性物质免受外界不良条件的影响，包括高温、高压、有机溶剂等。目前已经广泛应用在酶、抗体、细胞、病毒、细菌上，MOFs
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生物复合物优势有以下几点：(i)生物活性增强；(ii)稳定性增强；(iii)可生物降解；(iv)保留了MOFs的多孔性。这些优势有助于MOFs
‑
生物复合物在生物传感、生物催化、生物制药等领域有更加广阔的应用前景。因此，MOFs技术在动物活疫苗生产具有广阔的应用前景。
[0004]但是，目前MOFs作为鸡新城疫活病毒(La Sota)载体制备纳米疫苗的应用尚未见报道，主要面临一些关键性的问题亟待解决，如：(i)为了减少杂蛋白对试验结果的影响，需要去除鸡胚尿囊液中的细胞核、线粒体、溶酶体和过氧化物酶等，为此需要找到合适的病毒纯化方式，满足后续合成；(ii)装载活病毒的过程中往往涉及有机试剂、极端pH、高温等剧烈条件，很可能会破坏抗原的结构和活性，导致病毒效价下降或失活；(iii)MOFs
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生物复合物的尺寸太大容易沉降不利于注射，难以在体内溶解且尺寸太大不利于进入细胞。因此，亟需合成尺寸合适且制备条件温和、低毒高效的基于MOFs封装的鸡新城疫活病毒(La Sota)纳米疫苗。

技术实现思路

[0005]专利技术的目的：本专利技术的目的在于提供一种能更好的保留NDV的生物活性的基于金属有机骨架封装鸡新城疫活病毒(La Sota)纳米疫苗及其制备方法，该方法条件温和、低毒，能有效保证活病毒包封在金属有机骨架中。
[0006]本专利技术通过如下技术方案实现：一种基于金属有机骨架封装鸡新城疫活病毒(La Sota)的纳米疫苗，所述纳米疫苗包括病毒载体和封装的生物物质，所述病毒载体为金属有机骨架(MOFs)，所述封装的生物物质为鸡新城疫活病毒(La Sota)。
[0007]其中，所述金属有机骨架选自MIL，HKUST，ZIF类材料中的至少一种，例如选自MIL或ZIF；作为优选地，所述MOFs选自合成条件温和的ZIF类，例如ZIF
‑
8。
[0008]其中，进一步地，所述纳米疫苗NDV@MOFs的尺寸可以进入细胞。作为优选，所述纳米疫苗的尺寸为120
‑
600nm。
[0009]根据本专利技术的纳米疫苗，其中所述金属有机骨架被配置为在体内分解的形式，以释放包封的鸡新城疫活病毒(La Sota)。
[0010]本专利技术的纳米疫苗制备方法，所述的合成方法选择鸡新城疫活病毒(La Sota)在MOFs合成过程中被封装；所述的鸡新城疫活病毒(La Sota)周围被MOFs覆盖。
[0011]本
技术实现思路
还包括所述的基于金属有机骨架封装鸡新城疫活病毒(La Sota)纳米疫苗的制备方法，包括以下步骤：
[0012]1)向有机配体溶液中滴加鸡新城疫活病毒(La Sota)病毒液，磁力搅拌均匀，获得溶液A；
[0013]2)将金属化合物溶液与溶液A磁力搅拌混合均匀，静置过夜，获得溶液B；
[0014]3)将溶液B用去离子水洗涤多次，收集沉淀，得纳米疫苗。
[0015]本专利技术所述纳米疫苗的制备方法，其中所述合成过程在无菌条件下进行。
[0016]其中，步骤1)中所述有机配体溶液选自咪唑类配体中的一种或几种。
[0017]其中，步骤1)所述鸡新城疫活病毒(La Sota)病毒液为经过差速离心法处理的La Sota株鸡新城疫病毒液，蛋白含量为5.36mg/mL，病毒含量为10
9.8
EID
50
/mL。
[0018]本专利技术所述纳米疫苗的制备方法，通过调控合成条件控制纳米疫苗NDV@MOFs的尺寸，优选通过反应温度、反应时间、NDV的投入体积或金属化合物与有机配体的比例调控NDV@MOFs的尺寸。其中，所述反应温度为4
‑
50℃，优选为4℃、25℃；所述反应时间为10min
‑
16h，例如10min、30min、1h、4h、8h、16h；所述反应中NDV的投入体积为100
‑
300μL，优选150μL；所述金属化合物选自第一过渡系金属化合物，优选锌金属化合物，例如Zn(AC)2·
2(H2O)；所述配体选自咪唑类配体，优选2
‑
甲基咪唑；所述有机配体与金属化合物的摩尔比为4∶1
‑
160∶1，优选摩尔比为20∶1，40∶1。
[0019]本专利技术的有益效果：与现有技术相比，本专利技术具备以下优点：
[0020]1、本专利技术对比了蔗糖密度梯度离心法和差速离心法纯化鸡新城疫活病毒(La Sota)得到的蛋白浓度以及血凝效价，以及对后续合成NDV@MOFs纳米疫苗的影响，说明了具有较高蛋白浓度以及血凝效价的鸡新城疫活病毒(La Sota)有利于合成NDV@MOFs纳米疫苗。
[0021]2、本专利技术制备的NDV@MOFs纳米疫苗，首次将MOF用于鸡新城疫活病毒(La Sota)的载体，并进行了病毒效价的测定，结果表明该纳米疫苗成功保留了NDV的生物活性。
[0022]3、本专利技术成功调控NDV@MOFs纳米疫苗的尺寸，且制备条件温和、没有表现出明显的生物毒性、制备工艺简单、易实现规模化生产。
[0023]术语定义与说明：
[0024]1)本文所涉及的英文缩写具有如下含义：
[0025]“MOFs”与术语“金属有机骨架”可互换使用，是指由金属离子/簇和有机配体通过配位键连接而形成的晶体网状结构材料。所述金属离子包括主族元素、过渡元素、镧系元素等，所述有机配体包括含氮或含氧的有机配体，羧酸类配体等；其中，金属有机骨架MIL
(Materialsof Institute Lavoisier)是指用三价金属如铝、铁等金属与对本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1. 一种基于金属有机骨架封装鸡新城疫活病毒（La Sota）的纳米疫苗，其特征在于，所述纳米疫苗包括病毒载体和封装的生物物质，所述病毒载体为金属有机骨架，所述封装的生物物质为鸡新城疫活病毒（La Sota）。2.根据权利要求1所述的基于金属有机骨架封装鸡新城疫活病毒（La Sota）的纳米疫苗，其特征在于，所述金属有机骨架选自MIL，HKUST，ZIF类材料中的至少一种。3.根据权利要求1或2所述的基于金属有机骨架封装鸡新城疫活病毒（La Sota）的纳米疫苗，其特征在于，所述金属有机骨架为ZIF类材料。4.根据权利要求1
‑
3任一项所述的基于金属有机骨架封装鸡新城疫活病毒（La Sota）的纳米疫苗，其特征在于，所述纳米疫苗的尺寸为120
‑
600 nm。5.根据权利要求1
‑
3任一项所述的基于金属有机骨架封装鸡新城疫活病毒（La Sota）纳米疫苗，其特征在于，所述鸡新城疫活病毒病毒液为经过差速离心法处理的La Sota株鸡新城疫病毒液。6.权利要求1
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5任一项所述的基于金属有机骨架封装鸡新城疫活病毒...

【专利技术属性】
技术研发人员：王军宁，卢宇，吕芳，周宇杰，赵艳红，左晓昕，揭鸿英，邓碧华，侯继波，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院，
类型：发明
国别省市：