骨骼肌中朊蛋白作为分子标志物在制备用于诊断肌病的产品中的应用制造技术

本发明专利技术提供了骨骼肌中朊蛋白作为分子标志物在制备用于诊断肌病的产品中的应用，本申请发现骨骼肌中朊蛋白过量积累可作为肌病早期诊断的潜在标志物。肌病中不完全的肌肉再生发展为肌肉萎缩与朊蛋白PrP

【技术实现步骤摘要】
骨骼肌中朊蛋白作为分子标志物在制备用于诊断肌病的产品中的应用


[0001]本专利技术涉及分子生物学与疾病相关
，特别涉及骨骼肌中朊蛋白作为分子标志物在制备用于诊断肌病的产品中的应用。

技术介绍

[0002]朊病毒蛋白(prion)是一种蛋白质致病因子，它具有在哺乳动物间跨物种传播的能力，能够引起人克雅氏病(CJD)等致死性神经退行性疾病。研究发现，朊蛋白由其正常的细胞型PrP
C
转化为病理型PrP
Sc
，并在大脑内集聚形成淀粉样纤维导致了此类疾病的发生。朊蛋白PrP
C
向PrP
Sc
转化的过程是CJD等疾病发生的关键步骤，对于这一重要的过程，目前有两种模型：其一，模板辅助模型认为PrP
C
向PrP
Sc
自发地构象转变受较高的动力学能阻碍，PrP
Sc
单体与PrP
C
单体结合形成异源二聚体促进了PrP
C
向PrP
Sc
的转变；其二，多聚成核模型认为PrP
C
与PrP
Sc
之间存在可逆的动态平衡，PrP
Sc
种子的加入促进了PrP
C
向PrP
Sc
的转变，同时形成的PrP
Sc
与种子结合成为更稳定的结构进一步促进这一构象转变过程。在PrP的构象转变中，最为关键的步骤就是PrP
C
与PrP
Sc
形成异源二聚体。
[0003]尽管在PrP
C
其错误折叠相关的神经退行性疾病的背景下进行了深入研究，将PrP
C
转化为异常构象的(PrPSc)与朊病毒的产生有关，朊病毒是引起传染性海绵状脑病的传染因子，有研究表明胞内朊蛋白(
Cyto
PrP)以及跨膜朊蛋白(
Ctm
PrP)也可以引起转基因小鼠的神经退行性疾病。但内源性人类PrP
C
的生理功能知之甚少，PrP
C
在神经细胞中具有重要的生理功能，例如一些PrP
C
与NCAM(神经细胞粘附分子)和CAV1(caveolin
‑
1)在脂筏微结构域中的相互作用，它们将PrP
C
与酪氨酸激酶FYN(Fyn原癌基因)偶联。这些复合物调节针对细胞和全身损伤的神经保护作用，参与细胞信号级联反应，促进神经发生，调节神经元可塑性、兴奋性、记忆形成和巩固，并介导突触小泡传递。突触功能紊乱以及突触神经元丧失是prion疾病的前期临床症状，研究者发现PrP
C
可以通过调节突触信号传导以及突触可塑性从而保持突触结构和功能的完整)，如：PrP
C
能与神经突生长抑制因子接触蛋白相关蛋白(Caspr)存在相互作用，随之抑制Reelin介导的Caspr从细胞表面脱落，从而导致细胞表面Caspr浓度升高从而抑制神经突的生长。并且PrP
C
可以与应激诱导蛋白1(stress
‑
inducible protein 1,STI1)发生相互作用，促进神经元的存活和分化。
[0004]最早的肌病表现为肌肉无力，肌肉萎缩，疲乏无力，行走迟缓，呼吸困难，摔倒后不易爬起，随病情发展可导致症状加重。
[0005]因此，有必要开发一种能够早期诊断肌病的产品。

技术实现思路

[0006]本专利技术目的是提供骨骼肌中朊蛋白作为分子标志物在制备用于诊断肌病的产品中的应用，灵敏度达到85％以上，特异度达到66％以上。
[0007]为了解决上述技术问题，本专利技术采用如下技术方案：
[0008]在本专利技术的第一方面，提供了骨骼肌中朊蛋白作为分子标志物在制备用于诊断肌病的产品中的应用。
[0009]进一步地，所述肌病为不完全再生的肌病，包括皮肌炎、神经源性疾病、肌营养不良中的至少一种。
[0010]进一步地，所述用于诊断肌病的产品包括骨骼肌中朊蛋白的检测试剂盒，所述朊蛋白的检测试剂盒包括朊蛋白的ECA免疫组化实验检测试剂或ELISA检测试剂盒或实时荧光定量PCR试剂盒。
[0011]上述人朊病毒蛋白(PV)ELISA试剂盒为市售产品，可购自钦诚生物，型号：QC5748
‑
A。
[0012]在本专利技术的第二方面，提供了朊蛋白与特异性miRNA形成的复合体作为分子标志物在制备用于诊断肌病的产品中的应用。
[0013]进一步地，所述特异性miRNA包括miR
‑
214
‑
3p和miR
‑
204
‑
5p中的至少一种。
[0014]本专利技术实施例中的一个或多个技术方案，至少具有如下技术效果或优点：
[0015]1、本专利技术提供的骨骼肌中朊蛋白作为分子标志物在制备用于诊断肌病的产品中的应用，本申请专利技术人发现病理样本中朊蛋白表达量高，正常样本中朊蛋白表达量少(图2)表明肌病中不完全的肌肉再生发展为肌肉萎缩与朊蛋白PrP
C
抑制肌肉细胞分化有关，骨骼肌中朊蛋白的表达水平可用于区分肌病患者与健康对照者，具有较高的诊断价值，进一步证明了朊蛋白可作为一种有效的诊断肌病的分子标志物。同时本专利技术将朊蛋白的ECA免疫组化实验检测试剂盒用于制备诊断肌病的试剂盒中，检测分子标志物—朊蛋白PrP
C
的表达水平，从而使肌病的诊断更加方便易行。
[0016]2、本专利技术提供的骨骼肌中朊蛋白作为分子标志物在制备用于诊断肌病的产品中的应用，本申请专利技术人发现：并在病理样本中检测到了PrP
C
与特异性miRNA的共定位，PrP
C
与特异性miRNA共定位形成复合体可以作为诊断标志物，只要有两者共定位就可判定具有不完全再生的肌病，如：皮肌炎、神经源性疾病、肌营养不良。
[0017]3、本专利技术将骨骼肌中朊蛋白的表达水平用于辅助诊断具有不完全再生的肌病患者，具体判定方法为：与健康对照者相比，所述标志物骨骼肌中朊蛋白的表达水平升高，提示患者患有不完全再生的肌病，当所述骨骼肌中朊蛋白含量高于正常骨骼肌中朊蛋白含量的1.85倍时，则判断此时处于不完全再生的肌病的状态。单独检测骨骼肌中朊蛋白的表达水平区分肌病患者和正常对照者，灵敏度达到85％以上，特异度达到66％以上。
附图说明
[0018]为了更清楚地说明本专利技术实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作一简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。
[0019]图1为人PrP
C
在具有不完全再生的肌病骨骼肌样本中和miR
‑
214
‑
3p共定位。其中DAPI染细胞核(蓝色)，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.骨骼肌中朊蛋白作为分子标志物在制备用于诊断肌病的产品中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述肌病为不完全再生的肌病，包括皮肌炎、神经源性疾病、肌营养不良中的至少一种。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述用于诊断肌病的产品包括朊蛋白的检测试剂盒，所述朊蛋白的检测试剂盒包括朊蛋白的ECA免疫组化实验检测试剂或ELISA检测试剂盒或实时荧光定量PCR试剂盒。4....

【专利技术属性】
技术研发人员：梁毅，陶菁，戴斌，王利强，陈杰，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：