一种抗氧化无腥臭血红素多肽复合物的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种抗氧化无腥臭血红素多肽复合物的制备方法，特点是包括以下步骤：1)将猪血粉溶于水得质量分数为10％的猪血粉溶液，在搅拌条件下调整猪血粉溶液pH值为5

【技术实现步骤摘要】
一种抗氧化无腥臭血红素多肽复合物的制备方法


[0001]本专利技术涉及功能性多肽复合物的制备
，尤其是涉及一种抗氧化无腥臭血红素多肽复合物的制备方法。

技术介绍

[0002]猪血粉是以新鲜猪血为原料，经过脱纤维过滤、雾化干燥形成的细小的血液粉末。猪血粉含有丰富的生物活性物质和营养价值，富含多种蛋白质和氨基酸。我国的猪血粉资源丰富，但目前对于猪血粉的利用主要是将猪血粉作为高蛋白饲料的原料，利用率较低，造成资源浪费和环境污染。将猪血粉进行深度开发，能达到经济效益与生态效益的双赢。然而，猪血粉由于血腥味重、适口性较差等问题，限制了其深度开发。通过添加蛋白水解酶，能够有效地水解血粉中的大分子蛋白，转变成肽和氨基酸，其中大多的小分子肽能与小分子物质发生相互作用，呈现良好的生理活性，极大提升利用率，并能有效改善感官特性。枯草杆菌蛋白酶和中性米曲霉蛋白酶具有来源丰富、活性强的优点，然而尚未在血粉加工中进行开发应用。
[0003]铁作为人类身上不可或缺的重要营养物质，其摄入量不够会引起贫血，进而影响免疫力体系。目前贫血已经成为全球性的疾病，尤其是对儿童、青少年、怀孕以及妊娠哺乳期妇女。为了预防缺铁性贫血，许多药物都被广泛应用于铁的服用。其中，硫酸亚铁、氯化亚铁、葡萄糖酸亚铁等都被广泛使用，它们的铁元素含量较丰富，能够提供一定的营养，但由于其副作用，可能引发铁中毒。
[0004]血红素是一种天然卟啉铁化合物，是肌红蛋白、血红蛋白的主要活性中心。氯化血红素是从血液中提取得到的血红素产品，是天然血红素的体外纯化形式，可作为铁的营养强化剂，和传统补铁剂相比，生物利用度更高，不会引发体内铁蓄积中毒，并对胃肠较为温和，但是氯化血红素的水溶性差，且在体内稳定性较差。

技术实现思路

[0005]本专利技术所要解决的技术问题是提供一种结合率更高、抗氧化性更强，腥臭味降低且具有更好的稳定性和亲和力的抗氧化无腥臭血红素多肽复合物的制备方法。
[0006]本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种抗氧化无腥臭血红素多肽复合物的制备方法，包括以下步骤：(1)将猪血粉溶于水得质量分数为8％的猪血粉溶液，在搅拌条件下调整猪血粉溶液pH值为5
‑
9；(2)将上述猪血粉溶液与枯草杆菌蛋白酶和中性米曲霉蛋白酶中的至少一种混匀，置于恒温水浴锅内酶解；(3)将酶解液离心，离心速率为4000～9000rpm，离心时间为5～30min，离心后取上清液，用3kDa超滤管进行分离，收集透过液，然后用1kDa的超滤管进行分离，取膜上截留物，冷冻干燥得到多肽粉末；
(4)取多肽粉末溶于去离子水配成0.6mg/mL的多肽溶液，将多肽溶液与浓度为0.3～0.6mg/mL氯化血红素溶液按体积比2：1～6：1混合，形成氯化血红素多肽复合物。
[0007]进一步，步骤(1)中加入浓度为0.05～0.2mol/L的食品级碳酸氢钠溶液调整pH值。
[0008]进一步，步骤(1)中所述的pH值为7
‑
7.5。
[0009]进一步，步骤(2)中所述的蛋白酶的用量为3000～10000U/g。
[0010]进一步，步骤(2)中所述的恒温水浴锅温度在25～60℃范围内，酶解时间在2～6h之间，酶解过程包括一步酶解和分步酶解。
[0011]进一步，所述的分步酶解过程具体为：在步骤(1)的猪血粉溶液中添加5500U/g的枯草杆菌蛋白酶混匀，混合液放置于45℃的恒温水浴锅内酶解3h，90℃灭酶10min，冷却至室温，以4000r/min离心10min，收集上清液；将0.1moL/L的食品级碳酸氢钠溶液逐滴滴加至上清液中，控制pH到7.5后，在上清液中添加2500U/g的中性米曲霉蛋白酶，混匀并置于55℃的恒温水浴锅内酶解2h。
[0012]进一步，步骤(3)中离心速率为8000rpm，离心时间为10min。
[0013]进一步，步骤(4)中多肽中能够与氯化血红素稳定结合的肽段包括肽段1AAWGKVGGQAGAHGAEALER、肽段2FLANVSTVLTSK和肽段3AWGKVGGQAGAHGAEALERM。
[0014]进一步，步骤(4)中多肽溶液与浓度为0.5mg/mL氯化血红素溶液按体积比3：1混合，洗脱液与氯化血红素的混合方式包含常温常压和超声。
[0015]与现有技术相比，本专利技术的优点在于：本专利技术首先公开了一种抗氧化无腥臭血红素多肽复合物的制备方法，利用蛋白酶水解猪血粉生成多肽，将多肽与氯化血红素复合，形成稳定的结构，不仅能增强溶解度，还能提高氯化血红素的生物利用率和稳定性。氯化血红素和多肽的结合率较高，制得的复合物具有较好的功能活性。本专利技术利用蛋白酶将猪血粉水解成多肽，去除腥臭味，改善其风味，将多肽与氯化血红素复合，使其具有抗氧化、补铁的功能活性，具有更好的稳定性和亲和力，且能够提高生物利用度、降低毒性和免疫原性。有助于实现猪血粉的高值化应用。
附图说明
[0016]图1为不同实施例中酶解物的肽分子量分布；图2为多肽
‑
氯化血红素复合物的红外光谱图(a)，二级结构含量(b)；图3为多肽
‑
氯化血红素复合物的Zeta电位；图4为多肽与氯化血红素的结合率；图5为多肽
‑
氯化血红素复合物的DPPH清除率和ABTS清除率(a)和还原力(b)示意图；图6为实施例5中多肽溶液Sephadex G
‑
25层析分离色谱图；图7为实施例5中不同洗脱液组分与氯化血红素的结合率；图8为实施例5中A3洗脱液组分的肽段丰度图；图9为实施例5中A3洗脱液组分的肽段与氯化血红素的分子对接图。
具体实施方式
[0017]以下结合附图实施例对本专利技术作进一步详细描述。
[0018]一、实验方法1、多肽和氯化血红素的结合率测定在猪血粉酶解多肽和氯化血红素的混合溶液中，加入1mol/LHCl溶液调节pH，使未完全结合的氯化血红素沉淀。离心取沉淀，冷冻干燥后称重，按照以下公式计算结合率：其中公式中M，M0分别表示氯化血红素与肽段结合前后的质量。
[0019]2、抗氧化性测定(1)DPPH清除率测定将8mL 1
×
10
‑4mol/LDPPH溶液加入2mL多肽
‑
氯化血红素复合物溶液中，混合液避光静置30min后，以4000r/min的速率离心6min，测定517nm波长下的吸光度A1。在相同的条件下测定1mL样品水解液和4mL 95％乙醇的混合液的吸光度，记为A2，4mL DPPH溶液和1mL 95％乙醇混合液的吸光度，记为A3。DPPH清除率按照如下公式计算：
[0020](2)ABTS自由基清除能力测定将0.5mL多肽
‑
氯化血红素复合物溶液与2mLABTS溶液混合、避光静置15min，在734nm波长条件下测定吸光值A，之后将0.5mL95％的乙醇与2mLABTS溶液混合均匀，相同条件下测定吸光值A0。ABTS清除率按照以下公式本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗氧化无腥臭血红素多肽复合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)将猪血粉溶于水得质量分数为8％的猪血粉溶液，在搅拌条件下调整猪血粉溶液pH值为5
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9；(2)将上述猪血粉溶液与枯草杆菌蛋白酶和中性米曲霉蛋白酶中的至少一种混匀，置于恒温水浴锅内酶解；(3)将酶解液离心，离心速率为4000～9000rpm，离心时间为5～30min，离心后取上清液，用3kDa超滤管进行分离，收集透过液，然后用1kDa的超滤管进行分离，取膜上截留物，冷冻干燥得到多肽粉末；(4)取多肽粉末溶于去离子水配成0.6mg/mL的多肽溶液，将多肽溶液与浓度为0.3～0.6mg/mL氯化血红素溶液按体积比2：1～6：1混合，形成氯化血红素多肽复合物。2.根据权利要求1所述的一种抗氧化无腥臭血红素多肽复合物的制备方法，其特征在于：步骤(1)中加入浓度为0.05～0.2mol/L的食品级碳酸氢钠溶液调整pH值。3.根据权利要求1所述的一种抗氧化无腥臭血红素多肽复合物的制备方法，其特征在于：步骤(1)中所述的pH值为7
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7.5。4.根据权利要求1所述的一种抗氧化无腥臭血红素多肽复合物的制备方法，其特征在于：步骤(2)中所述的蛋白酶的用量为3000～10000U/g。5.根据权利要求1所述的一种抗氧化无腥臭血红素多肽复合物的制备方法，其特征在于：步...

【专利技术属性】
技术研发人员：王颖，曹锦轩，张月美，王金鹏，滕雯迪，
申请(专利权)人：北京工商大学，
类型：发明
国别省市：