C3ORF80基因抑制剂在制备肝癌药物中的应用制造技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，公开了一种C3ORF80基因抑制剂在制备肝癌药物中的应用。本发明专利技术中肝癌药物为肝癌细胞耐药逆转剂，C3ORF80基因抑制剂为抑制C3ORF80基因表达的siRNA分子，通过抑制C3ORF80基因的表达，可显著提高阿霉素耐药型肝癌细胞对阿霉素的敏感性。因此，C3ORF80基因抑制剂在阿霉素耐药型肝癌治疗及预后改善方面具有重要应用价值。癌治疗及预后改善方面具有重要应用价值。癌治疗及预后改善方面具有重要应用价值。

【技术实现步骤摘要】
C3ORF80基因抑制剂在制备肝癌药物中的应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，涉及一种C3ORF80基因抑制剂在制备肝癌药物中的应用。

技术介绍

[0002]肝癌是一种危害性很大的肿瘤，其发病率逐年增加。主要发病原因包括长期饮酒、慢性肝炎、肝硬化等，其中慢性肝炎是最主要的诱因。肝癌的主要临床表现包括肝区疼痛、体重下降、黄疸等。目前，化疗是肝癌的常规治疗方式，但疗效并不十分理想，主要原因是肝癌细胞对化疗药物的耐药。化疗耐药通常表现为肿瘤细胞对化疗药物的反应减弱或完全失效。肝癌化疗耐药的发生机制复杂，可能与肝癌细胞的基因突变、药物代谢和排泄的改变等因素有关。
[0003]肝癌常用的化疗药物包括阿霉素、顺铂、依托泊苷、吉西他滨等，其中阿霉素是肝癌化疗的一线用药，但是，阿霉素耐药已成为限制其疗效的一个主要问题，影响肝癌患者的生存质量和预后。因此，逆转肝癌细胞阿霉素耐药对于肝癌患者的临床治疗具有重要的意义。通过逆转肝癌细胞阿霉素耐药可以恢复肝癌患者对于化疗的敏感性，提高化疗的疗效，延长患者的生存期和提高生活质量。目前，尚未出现有效的逆转肝癌细胞阿霉素耐药的逆转剂，需要进一步的研究和探索。
[0004]C3ORF80基因是一种编码蛋白质的基因，在人类基因组中位于3号染色体上。目前对其功能的了解还比较有限，但已有研究表明它可能与一些疾病的发生有关，比如孤独症。此外，C3ORF80基因也被认为可能参与了一些细胞生物学过程和免疫调节。然而，C3ORF80基因在癌细胞耐药中的可能作用还未见研究报道。
专利
技术实现思路

[0005]为了克服现有技术的不足，本专利技术所要解决的技术问题是提供了C3ORF80基因抑制剂在制备肝癌细胞阿霉素耐药逆转剂中的应用。本专利技术的研究表明，C3ORF80基因在阿霉素耐药型肝癌细胞HepG2中的表达明显高于正常HepG2细胞。而且，C3ORF80基因的高表达与肝癌患者的不良预后有关。抑制阿霉素耐药型肝癌细胞HepG2中C3ORF80基因的表达能够有效逆转阿霉素的耐药，显著增强肝癌细胞对阿霉素的敏感性。
[0006]本专利技术提供了一种C3ORF80基因抑制剂在制备肝癌药物中的应用，肝癌药物是指肝癌细胞耐药逆转剂。
[0007]进一步的，所述肝癌细胞为HepG2细胞。
[0008]本专利技术中，所述C3ORF80基因抑制剂是指通过各种靶向C3ORF80的基因沉默技术，包括腺病毒介导的shRNA干扰技术或者慢病毒介导的Crispr Cas9技术。
[0009]进一步的，所述C3ORF80抑制剂为C3ORF80 siRNA、C3ORF80 shRNA、shRNA的编码DNA或C3ORF80sgRNA。其中，C3ORF80 siRNA为能够抑制肝癌细胞中C3ORF80基因表达的siRNA分子，是靶向C3ORF80的小分子干扰RNA，能够导致mRNA的降解，使C3ORF80基因沉默。
C3ORF80 shRNA是靶向C3ORF80的短发夹RNA，其可以克隆到表达载体并表达短的干扰RNA，从而实现C3ORF80基因的沉默。C3ORF80sgRNA是靶向C3ORF80基因的向导RNA，sgRNA是基于Crispr基因敲除系统的重要组成部分，能够与Cas9蛋白结合，引导Cas9酶靶向基因组DNA对C3ORF80基因进行剪切。
[0010]进一步的，采用的C3ORF80基因抑制剂为针对C3ORF80的siRNA，即能够抑制肝癌细胞中C3ORF80基因表达的siRNA分子，由互补的正义链和反义链组成。
[0011]进一步的，C3ORF80的siRNA为siRNA1#，正义链为如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，反义链为如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。
[0012]进一步的，C3ORF80的siRNA为siRNA2#，正义链为如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列，反义链为如SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列。
[0013]本专利技术还提供了一种肝癌细胞阿霉素耐药逆转剂，所述肝癌细胞阿霉素耐药逆转剂包含以降解C3ORF80的mRNA为靶向的能够抑制C3ORF80基因表达的siRNA分子。
[0014]进一步的，上述以降解C3ORF80的mRNA为靶向的能够抑制C3ORF80基因表达的siRNA分子为：
[0015]正义链为SEQ ID NO.1，反义链为SEQ ID NO.2的序列；
[0016]和/或，正义链为SEQ ID NO.3，反义链为SEQ ID NO.4的序列。
[0017]本专利技术提供肝癌细胞阿霉素耐药逆转剂中还包括阳离子脂质体。本专利技术中，采用阳离子脂质体Lipofectamine 3000作为转染试剂。
[0018]本专利技术还提供了一种肝癌治疗药物，所述肝癌治疗药物包括权利要求4或5所述的肝癌细胞阿霉素耐药逆转剂。
[0019]本专利技术还提供了一种改善肝癌预后的药物，所述药物包括权利要求4或5所述的肝癌细胞阿霉素耐药逆转剂。
[0020]本专利技术所述的药物还包含其他治疗剂，所述其他治疗剂选自其他用于治疗肝癌的药物。所述药物的剂型为注射液剂或注射用粉针剂。
[0021]本专利技术的优点和有益效果：
[0022]本专利技术首次发现在阿霉素耐药型肝癌细胞中，C3ORF80基因呈现特异性高表达，并与肝癌患者总体生存时间短、预后差相关。本专利技术发现，运用siRNA可高效沉默肝癌细胞中C3ORF80基因表达，显著提高其对阿霉素的敏感性。因此，C3ORF80基因抑制剂在阿霉素耐药型肝癌治疗方面具有重要应用价值。
附图说明
[0023]图1为阿霉素对不同类型HepG2细胞活力的影响；
[0024]图2为C3ORF80在阿霉素耐药型HepG2细胞的表达；
[0025]图3为显示C3ORF80的表达对肝癌患者生存率的影响；
[0026]图4为显示不同siRNA对肝癌细胞中C3ORF80基因表达的影响；
[0027]图5为显示利用siRNA抑制C3ORF80基因的表达对阿霉素耐药肝癌细胞的增敏作用；
[0028]图6为显示利用siRNA抑制C3ORF80基因的表达对阿霉素诱导HepG2/ADR细胞凋亡的影响。
具体实施方式
[0029]下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步详细的说明。以下实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照试剂制造厂商所建议的条件。
[0030]实施例1阿霉素耐药型肝癌HepG2细胞株的制备
[0031]通过采用低剂量梯度逐步加压诱导的方法，取对数生长期的HepG2细胞进行处理。首先选择20nM的阿霉素作为初始诱导浓度，并在细胞贴壁后加入药物。随后，持续给药，直至细胞能在含有该剂量药物的培养基中稳定生长。随着时间的推移，逐渐提高剂量，直至达到50nM。经过6个月的诱导处理，一旦细胞能够在含有50nM阿霉素的全培养基中稳定生长，即可认为细本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.C3ORF80基因抑制剂在制备肝癌药物中的应用，所述肝癌药物为肝癌细胞耐药逆转剂。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述C3ORF80基因抑制剂为能够抑制肝癌细胞中C3ORF80基因表达的siRNA。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述C3ORF80基因抑制剂为siRNA1#和/或siRNA2#，siRNA1#的正义链为SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，反义链为SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列；siRNA2#的正义链为SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列，反义链为SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列。4.一种肝癌细胞阿霉素耐药逆转剂，其特征在于，所述肝癌细胞阿霉素耐药逆转剂包含以降解...

【专利技术属性】
技术研发人员：陆亚鹏，朱俐，王丹，
申请(专利权)人：南通大学，
类型：发明
国别省市：