一种脱细胞基质材料及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种脱细胞基质材料及其制备方法和应用，所述制备方法包括：对小肠粘膜下层进行前处理，对前处理后小肠粘膜下层依次进行溶胀处理、冻融处理、氧化酶浸泡处理和表面活性剂处理，得到所述脱细胞基质材料。本发明专利技术采用物理溶胀、物理冻融、化学洗脱相结合，保证了较高的脱细胞效率，并且在脱细胞处理过程中适时加入了氧化酶，使氧化酶充分渗透到脱细胞基质中，从而在使用表面活性剂时氧化酶在组织中起到缓冲作用，保证了细胞外基质中胶原结构的完整。构的完整。构的完整。

【技术实现步骤摘要】
一种脱细胞基质材料及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物
，涉及一种脱细胞基质材料及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]随着组织工程的进一步发展和生物补片内源性再生机制的深入研究，生物补片在组织损伤修复中开始崭露头角。生物补片主要结构是由胶原、弹性纤维、糖蛋白、粘连蛋白、蛋白多糖构成的细胞外基质纤维状支架，而正是这种结构为组织再生提供了理想的支架。
[0003]生物补片植入机体后会引导组织进行内源性组织再生，主要是补片快速再血管化，循环中的干细胞进入并分化、填充、产生新的细胞外基质，从而修复组织缺损。其中，生物补片的多孔结构便于上述干细胞的生长和贴附，同时，生物补片完全可吸收，不侵蚀临近组织器官，具有较好的耐受感染能力，不增加术后感染的风险，这也是生物补片优于一些传统高分子材料的优势。可用于吻合器加固片、疝补片、硬脑膜补片等。
[0004]生物材料需要经过严格的除菌灭活及脱细胞处理后，才能用作合格的补片产品。目前脱细胞技术有物理反复多次冻融、物理溶胀、化学脱细胞、酶解法等，单纯物理反复冻融和溶胀不仅耗时耗力，同时会对胶原结构造成极大的破坏；化学脱细胞法由于化学试剂浓度高，对胶原结构产生破坏，同时会有试剂残留；酶解法的脱细胞效率极低；如CN103272275A公开了一种硬脑膜生物修补片的制备方法，包括分离出小肠粘膜下层、病毒灭活以及脱细胞，脱细胞在清洗槽可振荡的恒温超声波清洗器中进行，将小肠粘膜下层置于氢氧化钠溶液中处理。
[0005]综上所述，如何开发全新脱细胞基质材料的制备方法，以获得更优质的脱细胞材料，仍是组织工程领域亟需解决的问题之一。

技术实现思路

[0006]针对现有技术的不足和实际需求，本专利技术提供一种脱细胞基质材料及其制备方法和应用，加工得到的脱细胞基质材料生物相容性较好、孔隙率大且组织胶原结构完整，制备方法可有效减少外源性致敏抗原且过程相对温和。
[0007]为达上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0008]第一方面，本专利技术提供一种脱细胞基质材料的制备方法，所述制备方法包括：
[0009]对小肠粘膜下层进行前处理，对前处理后小肠粘膜下层依次进行溶胀处理、冻融处理、氧化酶浸泡处理和表面活性剂处理，得到所述脱细胞基质材料。
[0010]本专利技术中，采用物理溶胀、物理冻融、化学洗脱相结合，保证了较高的脱细胞效率，并且在脱细胞处理过程中适时加入了氧化酶，使氧化酶充分渗透到脱细胞基质中，从而在使用表面活性剂时氧化酶在组织中起到缓冲作用，保证了细胞外基质中胶原结构的完整。
[0011]可以理解，哺乳动物如猪、牛、羊、等的小肠组织下层均适用于本专利技术，可采用本领域通用方式处理小肠组织获取小肠组织下层。
[0012]优选地，所述前处理包括清洗和干燥处理。
[0013]优选地，所述前处理还包括细菌和病毒灭活处理。
[0014]优选地，所述细菌和病毒灭活处理包括：对小肠粘膜下层进行紫外光照射，然后使用抗生素溶液进行孵育处理，清洗并使用过氧乙酸进行孵育处理。
[0015]优选地，所述抗生素溶液含有庆大霉素、万古霉素、青霉素、链霉素、头孢西丁或氯霉素中任意一种或至少两种的组合。
[0016]优选地，所述抗生素溶液总浓度为1～100mg/L，包括但不限于2mg/L、3mg/L、4mg/L、5mg/L、6mg/L、7mg/L、8mg/L、20mg/L、50mg/L、60mg/L、80mg/L、90mg/L、92mg/L、95mg/L、97mg/L或99mg/L。
[0017]优选地，所述溶胀处理包括：将小肠粘膜下层与高渗溶液混合并孵育。
[0018]优选地，所述高渗溶液包括ZnCl2溶液、NaCl溶液、CaCl2溶液、KCl溶液或MgCl2溶液等溶液中任意一种或至少两种的组合。
[0019]优选地，所述孵育的时间2～5小时，温度为20～40℃(例如可以是21℃、22℃、25℃、26℃、27℃、28℃、37℃、38℃或39℃)。
[0020]本专利技术中，使用高渗ZnCl2溶液进行溶胀，能膨胀到较大的体积，从而导致孔隙结构更大，增大组织孔隙率，并且ZnCl2具有一定的氧化性，可以去除组织中的脂肪或者未清理干净的表皮结构，进一步提高孔隙率和净化效果。
[0021]优选地，所述ZnCl2溶液的浓度为3～6M，包括但不限于4M或5M。
[0022]优选地，所述冻融处理包括：将小肠粘膜下层置于
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80℃～
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20℃(例如可以是
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79℃、
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75℃、
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70℃、
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60℃、
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50℃、
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40℃、
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35℃、
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30℃、
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25℃、
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24℃、
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23℃、
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22℃或
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21℃)中孵育2～24小时(例如可以是3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、15小时、20小时、21小时、22小时或23小时)，随后置于20～30℃(例如可以是21℃、22℃、23℃、25℃、26℃、27℃、28℃或29℃)生理盐水中融化，重复3～5次。
[0023]优选地，所述氧化酶包括脂肪氧化酶、尿酸氧化酶、D
‑
氨基酸氧化酶、L
‑
氨基酸氧化酶或L
‑
α
‑
羟基酸氧化酶中任意一种或至少两种的组合。
[0024]本专利技术中，使用氧化酶渗透到基质组织中对组织起到缓冲作用，有利于保护基质的胶原蛋白结构不被破坏。
[0025]优选地，所述氧化酶工作浓度为0.05～10mg/mL，包括但不限于0.06mg/mL、0.07mg/mL、0.08mg/mL、0.1mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL、3mg/mL、4mg/mL、5mg/mL、6mg/mL、7mg/mL、8mg/mL或9mg/mL。
[0026]优选地，所述表面活性剂包括皂化物、聚乙二醇或吐温中任意一种或至少两种的组合。
[0027]优选地，所述聚乙二醇包括PEG400～PEG2000等。
[0028]优选地，所述吐温包括吐温60～吐温80等。
[0029]优选地，所述表面活性剂工作浓度为0.05～5mg/mL，包括但不限于0.06mg/mL、0.07mg/mL、0.08mg/mL、0.1mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、1.5mg/mL、2mg/mL、2.5mg/mL、3mg/mL、4mg/mL、4.5mg/mL、4.8mg/mL或4.9mg/mL。
[0030]优选地，小肠粘膜下层与各处理液(如生理盐水、抗生素溶液、高渗溶液和氧化酶溶液等等)的比例均在1:(50～200)(v/v)之间，包括但不限于1:100、1:150、1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种脱细胞基质材料的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：对小肠粘膜下层进行前处理，对前处理后小肠粘膜下层依次进行溶胀处理、冻融处理、氧化酶浸泡处理和表面活性剂处理，得到所述脱细胞基质材料。2.根据权利要求1所述的脱细胞基质材料的制备方法，其特征在于，所述前处理包括清洗和干燥处理；所述前处理还包括细菌和病毒灭活处理；所述细菌和病毒灭活处理包括：对小肠粘膜下层进行紫外光照射，然后使用抗生素溶液进行孵育处理，清洗并使用过氧乙酸进行孵育处理；所述抗生素溶液含有庆大霉素、万古霉素、青霉素、链霉素、头孢西丁或氯霉素中任意一种或至少两种的组合；所述抗生素溶液总浓度为1～100mg/L。3.如权利要求1所述的脱细胞基质材料的制备方法，其特征在于，所述溶胀处理包括：将小肠粘膜下层与高渗溶液混合并孵育，所述高渗溶液包括ZnCl2溶液、NaCl溶液、CaCl2溶液、KCl溶液或MgCl2溶液中任意一种或至少两种的组合；所述孵育的时间2～5小时，温度为20～40℃；所述高渗溶液的浓度为3～6M。4.如权利要求1所述的脱细胞基质材料的制备方法，其特征在于，所述冻融处理包括：将小肠粘膜下层置于
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80℃～
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20℃中孵育2～24小时，随后置于20～30℃生理盐水中融化，重复3～5次。5.如权利要求1所述的脱细胞基质材料的制备方法，其特征在于，所述氧化酶包括脂肪氧化酶、尿酸氧化酶、D
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氨基酸氧化酶、L
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氨基酸氧化酶或L
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α
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羟基酸氧化酶中任意一种或至少两种的组合；所述氧化酶工作浓度为0.05～10mg/mL。6.如权利要求1所述的脱细胞基质材料的制备方法，其特征在于，所述表面活性剂包括皂化物、聚乙二醇或吐温中任意一种或至少两种的组合；所述表面活性剂工作浓度为0.05～5mg/mL。7.如权利要求1所述的脱细胞基质材料的制备方法，其特征在于，所述表面活性剂处理后还包括固定成型和真空冷冻干燥的步骤；所述固定成型包括：...

【专利技术属性】
技术研发人员：张金童，张鹏，刘鹏飞，
申请(专利权)人：江苏博朗森思医疗器械有限公司，
类型：发明
国别省市：