一种纳米囊泡及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及生物制药技术领域，具体讲，涉及一种纳米囊泡及其制备方法和应用。纳米囊泡的膜为骨髓间充质干细胞细胞膜，纳米囊泡内包裹有如式I所示化合物。本发明专利技术采用式I化合物与骨髓间充质干细胞所制备纳米囊泡对糖尿病具有良好的治疗效果，并且对肝脏的保护作用，具有靶向、缓释的技术效果。缓释的技术效果。

【技术实现步骤摘要】
一种纳米囊泡及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物制药
，具体讲，涉及一种纳米囊泡及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]糖尿病是一种以慢性高血糖为特征的内分泌系统疾病，是全球最常见、增长最快的疾病之一。糖尿病不是一种单一的疾病，长期血糖增高，可引起身体损伤、生理功能障碍和不同器官的衰竭，导致多种并发症，包括糖尿病肾病、心血管疾病、神经病变和糖尿病视网膜病变，其中微血管和大血管并发症是糖尿病患者发病和死亡的主要原因。
[0003]根据病因和病理生理特点的不同，糖尿病的类型主要分为以下几种：1型糖尿病(又称胰岛素依赖型糖尿病)通常发生于儿童和青少年。这种类型的糖尿病是由胰腺内分泌细胞(胰岛素β细胞)的自身免疫性破坏引起的，导致胰岛素分泌不足或完全缺乏。因此，1型糖尿病患者需要依赖胰岛素注射来控制血糖水平。T2DM又称为非胰岛素依赖型糖尿病，通常发生于成年人，尤其是中年和老年人。这种类型的糖尿病与身体细胞的胰岛素抵抗和胰岛素分泌不足有关。在这种情况下，身体细胞对胰岛素的反应变得减弱，从而导致血糖水平升高。T2DM患者的治疗方法包括饮食调节、运动和药物治疗。妊娠期糖尿病是妊娠期间发生的一种糖尿病，通常在妊娠第24周左右开始出现。它是由于孕妇胰岛素抵抗的增加和胰岛素分泌不足引起的。如果不及时治疗，妊娠期糖尿病可能对母亲和胎儿的健康产生不良影响。因此，孕妇应该定期进行糖尿病筛查和监测。除了上述几种常见类型的糖尿病之外，还有一些罕见的糖尿病类型，如遗传性糖尿病、胰岛素抵抗综合征等。这些类型的糖尿病发生的机制和表现方式都有所不同，需要根据具体情况进行治疗。
[0004]针对不同类型的糖尿病，目前已经有多种治疗方法和药物可供选择。其中包括口服药物、胰岛素注射、饮食控制、运动等。近年来，随着生物技术和医疗技术的不断发展，新的治疗方法和手段也在不断涌现。
[0005]近年来，一些新的治疗手段已经开始受到越来越多的关注，许多合成药物已经被开发出来，但是，目前任何一种药物分子都无法完全治愈糖尿病。持续使用一些合成药物也可能会引起严重的副作用，因此副作用小的靶向制剂对于糖尿病的治疗具有深远意义。
[0006]干细胞是一种具有多能性的细胞，可以分化成多种类型的细胞。间充质干细胞(Mesenchymal stem cells，MSCs)是一种成体干细胞，存在于全身的许多组织中，包括脐带、胎盘、脂肪组织和骨髓，在再生医学、自身免疫性疾病和糖尿病方面具有潜在的应用。根据其组织来源和特征，已经鉴定了几种类型的MSCs。脐带来源的间充质干细胞(Umbilical cord
‑
derived mesenchymal stem cells，UC
‑
MSCs)是从脐带中分离培养的多功能干细胞，具有分化成成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞，甚至神经细胞等各种细胞类型的能力。胎盘来源的间充质干细胞(Placenta
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derived mesenchymal stem cells，P
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MSCs)是从胎盘中分离出来的间充质干细胞，具有更高的增殖速率和分化能力。脂肪来源的间充质干细胞(Adiposite
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derived mesenchymal stem cells，AD
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MSCs)是另一种类型的间充质干细胞，可以很容易地从脂肪组织中分离出来，能够分化为脂肪细胞，软骨细胞和骨细胞。骨髓来源
的间充质干细胞(Bone marrow
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derived mesenchymal stem cells，BM
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MSCs)是最早被发现的间充质干细胞，并且被广泛研究。其他类型的MSCs包括牙髓来源的间充质干细胞、滑液衍生的间充质干细胞和羊水衍生的间充质干细胞等。每种类型的间充质干细胞在再生医学和细胞治疗中都有其独特的性质和潜在的应用。
[0007]纳米囊泡(Nanovesicles，NVs)是一种微小的纳米颗粒，可以携带药物到达特定的细胞或组织中，具有精准治疗的优势。尽管文献报道干细胞纳米囊泡，可以携带药物进入肝脏组织，但其作用效果有待于增强。鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0008]为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种纳米囊泡及其制备方法和应用。
[0009]本专利技术提供了一种纳米囊泡，纳米囊泡的膜为骨髓间充质干细胞的细胞膜，纳米囊泡内包裹有如式I所示的化合物：
[0010][0011]可选的，纳米囊泡的直径为100nm～500nm，优选为100nm～300nm。
[0012]本专利技术还提供了上述纳米囊泡的制备方法，至少包括以下步骤：
[0013]S1、分离获得骨髓间充质干细胞；
[0014]S2、将式I化合物与骨髓间充质干细胞共培养18～36小时，式I化合物在共培养溶剂中的浓度为1～20μg/mL；
[0015]S3、调整获得密度为0.5～5
×
106个/mL的细胞悬液；
[0016]S4、使用微型囊泡挤出机将细胞悬液依次挤压通过孔径为5μm、1μm和0.2μm的膜，每种孔径的膜进行12～18次挤压；经离心、过滤、洗涤，得到所述纳米囊泡。
[0017]可选的，S2中，式I化合物在共培养溶剂中的浓度为1～10μg/mL，优选为2.5μg/mL。
[0018]可选的，S2中，在共培养溶剂中，骨髓间充质干细胞的浓度为5
×
106～107个/mL，优选为5
×
106个/mL；
[0019]可选的，S2中，共培养的温度为24～27℃，优选为25℃。
[0020]可选的，S3中，细胞悬液的密度为1
×
106个/mL。
[0021]可选的，S2中，共培养溶剂为DMEM培养基；S3中，采用pH＝7.2的磷酸盐缓冲液进行稀释。
[0022]本专利技术还提供了上述纳米囊泡在用于制备治疗糖尿病或脂肪肝的药物中的应用。
[0023]本专利技术还提供了一种靶向制剂，含有上述纳米囊泡。
[0024]本专利技术实施例提供的技术方案与现有技术相比具有如下优点：
[0025]本专利技术采用特定化合物与骨髓间充质干细胞所制备NVs对糖尿病具有良好的治疗效果，并且对肝脏的保护作用，具有靶向、缓释的技术效果。
附图说明
[0026]图1为小鼠BMSCs的培养及鉴定：A.BMSCs细胞形态，放大倍数＝50
×
；B.油红O染色鉴定脂肪细胞；放大倍数＝100
×
；C.茜素红染色的成骨细胞，放大倍数＝100
×
；D.阿尔新蓝的软骨细胞，放大倍数＝100
×
；
[0027]图2为透射电子显微镜下BMSCs纳米细胞囊泡的形态，比例尺＝200nm；
[0028]图3为Western Blot分析鉴定BMSCs、BMSCs
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NVs和H8<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种纳米囊泡，其特征在于，所述纳米囊泡的膜为骨髓间充质干细胞的细胞膜，所述纳米囊泡内包裹有如式I所示的化合物：2.根据权利要求1所述的纳米囊泡，其特征在于，所述纳米囊泡的直径为100nm～500nm，优选为100nm～300nm。3.如权利要求1～2任一项所述的纳米囊泡的制备方法，其特征在于，至少包括以下步骤：S1、分离获得骨髓间充质干细胞；S2、将式I化合物与骨髓间充质干细胞共培养18～36小时，式I化合物在共培养溶剂中的浓度为1～20μg/mL；S3、调整获得密度为0.5～5
×
106个/mL的细胞悬液；S4、使用微型囊泡挤出机将所述细胞悬液依次挤压通过孔径为5μm、1μm和0.2μm的膜，每种孔径的膜进行12～18次挤压；经离心、过滤、洗涤，得到所述纳米囊泡。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，S2中，式I化合物在共培养溶剂中...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁琦，袁晓环，张蒙，武艳，吴丹，刘洁婷，李鲁新，尹永奎，张春雷，张哲，
申请(专利权)人：牡丹江医学院，
类型：发明
国别省市：