表没食子儿茶素没食子酸酯在制备猪链球菌毒力因子抑制剂中的应用制造技术

本发明专利技术公开了表没食子儿茶素没食子酸酯在制备猪链球菌毒力因子抑制剂中的应用，属于生物学技术领域。所述毒力因子为sspA、gapdh、orf2或impdh中的至少一种。本发明专利技术以毒力因子为靶标，采用荧光定量PCR方法研究了表没食子酸儿茶素没食子酸酯对猪链球菌携带率较高的毒力基因sspA、gapdh、orf2、impdh的mRNA相对表达量的影响；并结合动物临床治疗试验，综合分析EGCG对猪链球菌致病性的影响，证明了EGCG可以作为毒力因子抑制剂药物治疗猪链球菌病。以作为毒力因子抑制剂药物治疗猪链球菌病。

【技术实现步骤摘要】
表没食子儿茶素没食子酸酯在制备猪链球菌毒力因子抑制剂中的应用


[0001]本专利技术属于生物学
，具体涉及表没食子儿茶素没食子酸酯在制备猪链球菌毒力因子抑制剂中的应用。

技术介绍

[0002]猪链球菌引起的猪链球菌病是影响生猪养殖业的重要疾病之一。该病原菌能引起猪脑膜炎、肺炎、心内膜炎、关节炎和败血症等，常给养猪业带来巨大的经济损失，同时也对生物安全和公共卫生造成了严重威胁。兽医临床治疗猪链球菌病常使用抗生素，如β
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内酰胺类抗生素和氨基糖苷类抗生素，但随着细菌耐药性的日益严重，许多抗生素的临床治疗效果变差。为了有效防治猪链球菌所引发的动物疾病，有必要研发新型抗猪链球菌感染药物。抗毒力策略是以细菌的毒力因子为靶点，通过干预细菌的致病过程来达到抗感染目的的抗菌措施。
[0003]已有研究证明表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对肺炎链球菌、化脓性链球菌等具有抗菌作用和抑制毒力因子溶血素(PLY)和分选酶A(SrtA)的作用，但尚未见有关EGCG对猪链球菌毒力因子sspA、gapdh、orf2和impdh影响的报道。

技术实现思路

[0004]基于现有技术存在的不足，本专利技术提供了表没食子儿茶素没食子酸酯在制备猪链球菌毒力因子抑制剂中的应用，通过以猪链球菌的毒力因子为靶标，抑制毒力因子的表达，达到治疗猪链球菌病的目的。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术的技术方案为：
[0006]第一方面，本专利技术提供了表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG在制备猪链球菌毒力因子抑制剂中的应用。
[0007]进一步地，所述毒力因子为sspA(枯草杆菌样丝氨酸蛋白酶A)、gapdh(磷酸甘油醛脱氢酶)、orf2(毒力相关序列)或impdh(次黄嘌呤核苷酸脱氢酶)中的至少一种。
[0008]进一步地，所述表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG的应用剂量为25
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100mg/kg b.w.。
[0009]进一步地，所述抑制剂还包括药学上可接受的辅料和载体。
[0010]进一步地，表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG通过靶向所述毒力因子降低猪链球菌对肺、肝和脾的损伤。
[0011]进一步地，表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG通过靶向所述毒力因子降低腹腔中的活菌载量。
[0012]第二方面，本专利技术提供了一种猪链球菌的毒力因子抑制剂，所述毒力因子抑制剂的活性成分包括表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG。
[0013]第三方面，本专利技术提供了一种治疗或预防生物体感染猪链球菌的药物，其特征在
于，所述药物的活性成分包括表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG。
[0014]进一步地，所述生物体为猪。
[0015]有益效果：
[0016](1)猪链球菌的致病性与其携带的毒力因子相关，毒力因子在猪链球菌的致病过程中发挥着重要作用，本专利技术以毒力因子为靶标，采用荧光定量PCR方法研究了表没食子酸儿茶素没食子酸酯(EGCG)对猪链球菌携带率较高的毒力基因sspA、gapdh、orf2、impdh的mRNA相对表达量的影响；并结合动物临床治疗试验，综合分析EGCG对猪链球菌致病性的影响，证明了EGCG可以作为毒力因子抑制剂药物治疗猪链球菌病。
[0017](2)本专利技术证明了EGCG可以通过抑制猪链球菌毒力因子的方式，对猪链球菌感染的小鼠进行治疗，可提高感染猪链球菌小鼠的存活率、延长被感染小鼠的存活时间，降低被感染小鼠腹腔洗液中的活菌载量，并减轻其肺、肝和脾的病理损伤。毒力是病原菌致病的主导因素，在病原菌感染宿主过程中发挥着重要作用。抗毒力策略能够靶向干扰细菌的重要毒力因子活性或抑制毒力因子的表达，从而降低其对宿主的致病性，且不会抑制其他有益菌的活性。此外，抗毒力药物对细菌施加的选择压力较小，能够降低细菌产生耐药性的风险。
附图说明
[0018]图1为EGCG对猪链球菌sspA基因mRNA表达量的影响。
[0019]图2为EGCG对猪链球菌gapdh基因mRNA表达量的影响。
[0020]图3为EGCG对猪链球菌orf2基因mRNA表达量的影响。
[0021]图4为EGCG对猪链球菌impdh基因mRNA表达量的影响。
[0022]图5为不同剂量EGCG治疗组猪链球菌感染的小鼠存活情况。
[0023]图6为不同剂量EGCG治疗组猪链球菌感染的小腹腔灌洗液菌落定植情况。
[0024]图7为不同剂量EGCG治疗组小鼠肺脏组织学观察(200
×
)；图中，A为空白对照组；B为感染模型组；C为高剂量EGCG治疗组；D为中剂量EGCG治疗组；E为低剂量EGCG治疗组；F为氨苄西林治疗组。
[0025]图8为不同剂量EGCG治疗组小鼠肝脏组织学观察(200
×
)；图中，A为空白对照组；B为感染模型组；C为高剂量EGCG治疗组；D为中剂量EGCG治疗组；E为低剂量EGCG治疗组；F为氨苄西林治疗组。
[0026]图9为不同剂量EGCG治疗组小鼠脾脏组织学观察(200
×
)；图中，A为空白对照组；B为感染模型组；C为高剂量EGCG治疗组；D为中剂量EGCG治疗组；E为低剂量EGCG治疗组；F为氨苄西林治疗组。
具体实施方式
[0027]为了更好的解释本专利技术，以便于理解，下面结合附图，通过具体实施方式，对本专利技术作详细描述。
[0028]为了更好的理解上述技术方案，下面将参照附图更详细地描述本专利技术的示例性实施例。虽然附图中显示了本专利技术的示例性实施例，然而应当理解，可以以各种形式实现本专利技术而不应被这里阐述的实施例所限制。相反，提供这些实施例是为了能够更清楚、透彻地理
解本专利技术，并且能够将本专利技术的范围完整的传达给本领域的技术人员。
[0029]实施例1EGCG对猪链球菌毒力基因转录水平的影响
[0030]精确称量0.12755g的EGCG于烧杯中，加入450μL二甲基亚砜(DMSO)将其溶解，转移至10mL容量瓶中，用蒸馏水定容至10mL。使用孔径为0.22μm的水系滤头过滤后备用，储备液需
‑
80℃冻存，避免反复冻融。
[0031]取猪链球菌划线接种于含5％脱纤维兔血的TSA培养基上，37℃恒温细菌培养箱内培养24h。用灭菌的接菌环挑取TSA培养基上长出的典型单菌落，接种于3mL含8％胎牛血清的TSB培养基中，置于37℃恒温摇床培养箱中，180rpm振荡培养18
‑
24h，使菌液OD
600
约为0.6。使用TSB培养基将菌液按1:100的体积比例进行稀释，并添加终浓度为1/4MIC(1/4倍的最小抑菌浓度，625μg/mL)的EGCG，同时设置不加药物处理的对照组；将菌悬液置于37℃恒温摇床，180rpm振荡培养36h。
[0032]收集EGCG处理组和对照组猪链球菌的菌体沉淀，使用液氮研磨法破坏细胞壁，采用Trizol法提取总RNA，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG在制备猪链球菌毒力因子抑制剂中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述毒力因子为sspA、gapdh、orf2或impdh中的至少一种。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述表没食子儿茶素没食子酸酯EGCG的应用剂量为25
‑
100mg/kg b.w.。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抑制剂还包括药学上可接受的辅料和载体。5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，表没食子儿茶素没...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘明春，曲成虎，郭玉茹，郭月婷，王盈予，
申请(专利权)人：沈阳农业大学，
类型：发明
国别省市：