基于内镜引导下的公鸡睾丸注射模型的建立方法和应用技术

本发明专利技术属于生物技术领域，涉及基于内镜引导下的公鸡睾丸注射模型的建立方法和应用，包括以下步骤：将公鸡全身麻醉，术部选择最后肋骨的肋弓后缘与脊柱交界的凹陷处，术部消毒后，划开术部皮肤，直至腹腔，将内镜镜头操作鞘沿打开的切口深入腹腔，前斜式内镜插入操作鞘内并卡紧；打开膨宫加压器，使腹腔膨起，通过内镜显示器观察公鸡腹腔内结构，将内镜向脊柱侧缓慢移动，直至视野中出现睾丸组织；注射器在操作鞘上方与之平行方向进针，缓慢深入腹腔内；在内镜观察下，将注射器缓慢扎入公鸡睾丸内，边退针边推注。本发明专利技术方法采取新的手术通路，切口更小，对实验动物损伤小，成功率高，操作时间短，术后感染概率低，可提高动物术后的存活率。存活率。存活率。

【技术实现步骤摘要】
基于内镜引导下的公鸡睾丸注射模型的建立方法和应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及基于内镜引导下的公鸡睾丸注射模型的建立方法和应用。

技术介绍

[0002]随着科学技术的进步与发展，转基因技术日益成熟，成为发育生物学、行为生物学、内分泌学、动物遗传育种及其他相关领域研究的重要工具。鸡作为常见的实验动物，因其卵生、饲养周期短、生产性能高及胚胎易获得等优点成为理想的基因改造模型，而禽类特殊的生殖解剖结构，使转基因鸡的生产较为困难。采用睾丸注射慢病毒的方法生产转基因鸡，是目前基因转载率高，操作简单可行的试验方法。但成年公鸡睾丸位于腹腔内，需通过手术方式打开腹腔才可完全暴露，术部多选最后肋骨后缘、腿肌前缘。但该处覆盖肌肉层厚，肌群分布多，血管分布错综复杂，导致手术操作难度大，易割伤腿部的缝匠肌，损伤腰神经，导致鸡无法站立。同时，公鸡睾丸发育完善，长度可达5cm，重量约85
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100g，小切口下难以完全暴露睾丸。因此亟需一种安全有效、对实验动物损伤小的公鸡睾丸注射手术方案。

技术实现思路

[0003]为解决上述技术问题，本专利技术提供一种基于内镜引导下的公鸡睾丸注射模型的建立方法和应用，本专利技术所述方法在内镜引导下，从公鸡大腿内侧最后肋骨后缘方向进入，刺破腹膜进入腹腔，在内镜观察下使用注射器刺入睾丸，完成注射。本专利技术方法采取新的手术通路，切口更小，对实验动物损伤小，成功率高，操作时间短，术后感染概率低，可提高动物术后的存活率。
[0004]为达到上述目的，本专利技术提供了如下技术方案：
[0005]基于内镜引导下的公鸡睾丸注射模型的建立方法，包括以下步骤：
[0006]将公鸡全身麻醉，公鸡采用左侧卧保定于手术台，将后肢向上向前抬起，术部选择最后肋骨的肋弓后缘与脊柱交界的凹陷处，术部消毒后，划开术部皮肤，将切口两侧向上提起，手术刀沿切口向下垂直刺入，直至腹腔，将内镜镜头操作鞘沿打开的切口深入腹腔，前斜式内镜插入操作鞘内并卡紧；打开膨宫加压器，使腹腔膨起，通过内镜显示器观察公鸡腹腔内结构，将内镜向脊柱侧缓慢移动，直至视野中出现睾丸组织；注射器在操作鞘上方与之平行方向进针，缓慢深入腹腔内；在内镜观察下，将注射器缓慢扎入公鸡睾丸内，边退针边推注；注射完成后，撤出注射器及内镜，闭合腹腔及皮肤并消毒。
[0007]进一步的，手术前公鸡的麻醉方法为：麻醉前20min，腿部肌肉注射阿托品和氟尼辛葡甲胺；腿部肌肉注射舒泰进行全身麻醉。
[0008]进一步的，膨宫加压器压力设置为5KPa，使腹腔膨起。
[0009]进一步的，将注射器缓慢扎入公鸡睾丸内，深度为1
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2cm。
[0010]进一步的，采用多位点注射，每个睾丸的注射点为3
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4个，每次推注液体量为0.5mL。
[0011]进一步的，术后将术部先进行碘伏消毒，再涂抹红霉素软膏。
[0012]进一步的，术后将试验鸡安置在独立鸡笼中，每日更换垫料，保持环境干净；术部每日碘伏消毒后，涂抹红霉素软膏，腿部肌肉注射青霉素；术后14d视创部愈合情况，拆除缝合线。
[0013]进一步的，在公鸡睾丸内推注荧光标记物。
[0014]进一步的，手术前1d，公鸡禁食禁水。
[0015]本专利技术还提供上述基于内镜引导下的公鸡睾丸注射模型的建立方法在转基因鸡生产中的应用。
[0016]有益效果
[0017]与传统方法相比，本专利采取全新的手术通路，术部选取在最后肋骨后缘，此处皮肤松弛，脏器少，术部创口小，对机体损伤小，术后恢复快，提高动物福利；本专利技术所述方法操作简单，手术时间短，可成功实现对公鸡睾丸注射，重复性高，术后动物存活率高，创部感染率低，恢复快。本方法采用内镜引导下进行睾丸注射，操作简单，准确度高，具有可视、针对性强的优势。
附图说明
[0018]图1为试验鸡保定方式及手术部位A：试验鸡左侧卧保定；B：右后肢向上向前牵拉；C：手术部位；
[0019]图2为术部隔离及内镜探入腹腔A：术部铺设创巾：B：分离术部皮肤及肌肉，暴露腹腔；C：内镜经切口探入腹腔内；D：注射器于操作鞘上方平行进针；
[0020]图3为睾丸注射及皮肤缝合A：内镜观察下的睾丸结构；B：注射器出现在视野内；C：注射器扎入睾丸内；D：缝合皮肤；
[0021]图4为精液荧光观察结果。
具体实施方式
[0022]1 材料与方法
[0023]1.1 主要仪器与设备
[0024]手术台，常规手术器械，4
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0#医用可吸收缝合线，无影灯(HyLED 580Vet，南京迈瑞生物电子医疗有限公司，中国)，粘附载玻片(世泰，中国)，鸡用采精杯，倒置荧光显微镜(AXIOVERT A1，Zeiss，德国)，显示器(Philips)，导光束，DG
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1型膨宫加压器(沈阳沈大内窥镜有限公司，中国)，Telecam DXⅡ摄像系统、Xenon nova 175冷光源系统、BETTOCCHI操作鞘(5.4mm)、HOPKINSⅡ前斜式内镜(30度视角)均购自KARL STORZ ENDOSKOPE，德国。
[0025]1.2主要药品和试剂
[0026]舒泰(Zoletil 50，Virbac，法国)、碘伏、75％酒精、青霉素、荧光标记物、生理盐水、硫酸阿托品、氟尼辛葡甲胺、青霉素、红霉素软膏。
[0027]1.3实验动物
[0028]试验鸡为30只16周龄体重相近、健康的公鸡，来自中国农科院家禽研究所。随机将试验鸡分为对照组和手术组，每组15只。
[0029]1.4动物模型构建
[0030]1.4.1术前准备
[0031]手术前1d，公鸡禁食禁水。麻醉前20min，腿部肌肉注射阿托品(0.03mg/kg体重)和氟尼辛葡甲胺(2.2mg/kg体重)。腿部肌肉注射舒泰进行全身麻醉(0.1mL/kg体重)。公鸡采用左侧卧保定于手术台(图1A)，将后肢向上向前抬起，清除大腿内侧和腹壁羽毛(图1B)。术部选择最后肋骨的肋弓后缘与脊柱交界的凹陷处，此处肌群较少，没有骨骼覆盖，便于手术操作(图1C)，且不易割伤缝匠肌。术部碘伏消毒，2min后酒精脱碘。
[0032]1.4.2内镜探入腹腔
[0033]术部铺设创巾(图2A)，使用16号刀划开术部皮肤，长度约0.5cm(图2B)。将切口两侧向上提起，手术刀沿切口向下垂直刺入，直至腹腔，刺入过程中避免损伤内脏器官。将内镜镜头操作鞘沿打开的切口深入腹腔，前斜式内镜插入操作鞘内并卡紧(图2C)。
[0034]1.4.3睾丸注射
[0035]打开膨宫加压器，压力设置为5KPa，使腹腔膨起，增加Tennon nova 175系统光强度，通过内镜显示器观察公鸡腹腔内结构。将内镜向脊柱侧缓慢移动，公鸡睾丸位于腹腔背中线两侧，最后两椎肋骨上部，肾的前端、肾上腺的后方，腹侧与腹气囊、腺胃、肝和肠相邻。睾丸呈白色，上分本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.基于内镜引导下的公鸡睾丸注射模型的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：将公鸡全身麻醉，公鸡采用左侧卧保定于手术台，将后肢向上向前抬起，术部选择最后肋骨的肋弓后缘与脊柱交界的凹陷处，术部消毒后，划开术部皮肤，将切口两侧向上提起，手术刀沿切口向下垂直刺入，直至腹腔，将内镜镜头操作鞘沿打开的切口深入腹腔，前斜式内镜插入操作鞘内并卡紧；打开膨宫加压器，使腹腔膨起，通过内镜显示器观察公鸡腹腔内结构，将内镜向脊柱侧缓慢移动，直至视野中出现睾丸组织；注射器在操作鞘上方与之平行方向进针，缓慢深入腹腔内；在内镜观察下，将注射器缓慢扎入公鸡睾丸内，边退针边推注；注射完成后，撤出注射器及内镜，闭合腹腔及皮肤并消毒。2.根据权利要求1所述的基于内镜引导下的公鸡睾丸注射模型的建立方法，其特征在于，手术前公鸡的麻醉方法为：麻醉前20min，腿部肌肉注射阿托品和氟尼辛葡甲胺；腿部肌肉注射舒泰进行全身麻醉。3.根据权利要求1所述的基于内镜引导下的公鸡睾丸注射模型的建立方法，其特征在于，膨宫加压器压力设置为5KPa，使腹腔膨起。4.根据权利要求1所述的基于内镜引导下的公鸡睾丸注射...

【专利技术属性】
技术研发人员：王亨，王志浩，李碧春，李建基，郭龙，袁长宁，靳锴，左其生，孟霞，朱国强，刘康军，崔璐莹，董俊升，李俊，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：