卷浪草离体繁殖的方法技术

本发明专利技术公开了一种卷浪草离体繁殖的方法，其技术要点是以卷浪草的嫩芽作外植体，诱导产生愈伤组织和丛生芽，将带丛生芽的愈伤组织切成小块，接种在固体培养基或液体培养基中作继代培养，获得大量的丛生芽，将丛生芽切成单芽，转入生根培养基中诱导生根，得到大量健壮的完整植株并出瓶移栽。本发明专利技术通过固体培养或液体培养方法，既提高了卷浪草幼芽繁殖系数，缩短了培养时间，又保证了植株的质量，为加快卷浪草优质苗的繁殖速度提供了新的途径。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及植物组织培养方法，特别是一种用固体培养或液体培养以提高卷浪草繁殖速度的方法。
技术介绍
随着人们生活水平的提高，观赏水草走进了千家万户，成为一种时尚，在玻璃水箱中种上各种形态优美的水草，配上各种各样色彩艳丽的热带鱼在其中穿梭游弋，这动态画面为居室带来了大自然的气息。卷浪草(Aponogeton uvaceus)是属于卷浪草类的观赏性大型水草，原产于马来西亚，植株较大，叶片长30cm左右，具有球状块茎，从茎的顶部长出数片半透明状的浅绿色叶片，呈带状螺旋型向上伸展。用卷浪草来造景，螺旋型的叶片在水中伴随着鱼摇曵的姿态成为水箱中亮丽的风景线，展示了东南亚海域的特色风景。目前我国卷浪草是由台湾、日本、新加坡等地引进，其常规繁殖方式是以块茎长出的侧芽繁殖，繁殖系数较低，且受环境和季节的制约，不能满足市场的需求。
技术实现思路
本专利技术的目的就是提供一种操作简便，繁殖速度快的卷浪草离体繁殖的方法。本专利技术可以由以下方式来实现以卷浪草的嫩芽作外植体，诱导产生愈伤组织和丛生芽，将长有丛生芽的愈伤组织切成小块，接种在固体或液体培养基中作继代培养，获得丛生芽，将丛生芽切成单芽，转入生根培养基中诱导生根，得到完整植株并出瓶移栽。第一，诱导卷浪草产生嫩芽作为外植体，将切去顶芽的块茎半浸泡在以MS基本培养基为基础，由配制1L培养基大量元素用量是原来MS用量1/10～1/4，微量元素和铁盐用量是原来MS用量的1/6～1/2和含0.1～0.5mg/L的KT组成的营养液中，块茎顶部切口处长出芽，将嫩芽切下，消毒后，获得无菌材料作外植体；第二，将外植体接种在MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+青霉素钠8～10万个单位/L(以下单位相同，省略)、琼脂0.75％、白糖3％、pH5.8的培养基上作初始培养，培养温度23～27℃，光照12h.d-1，光照度1500Lux，培养时间30～40天，诱导产生愈伤组织和丛生芽；第三，将带有丛生芽的愈伤组织切成小块，接种在MS+6-BA0.5～3.5+IAA0.2～0.4+活性炭1g/L、琼脂0.75％、白糖3％、pH5.8的固体培养基上作继代培养，培养时间20～30天，或者接种在1/3～1/2MS+6-BA0.5～1.5+IAA0.05～0.2、白糖2％、pH5.8液体培养基中作继代培养，液体培养中培养瓶放置在120rpm的旋转摇床上培养，培养时间15～20天，两者的培养温度23～27℃，光照12h·d-1，光照度1500Lux，均产生丛生芽；第四，将丛生芽切成单芽，转入生根培养基MS+IAA0.2～0.4+活性炭1g/L或MS+IBA0.1～0.3+NAA0.05～0.2+活性炭1g/L、琼脂0.75％、白糖2％、pH5.8的培养基上诱导生根，培养温度23～27℃，光照12h·d-1，光照度1500Lux，培养时间15～25天，得到完整植株。1/3～1/2MS是指配制1L培养基以MS基本培养基为基础，大量元素用量为原来MS用量的1/3～1/2，微量元素、铁盐和有机物用量是原来MS用量的1/2，其中肌醇用量不变。本专利技术通过固体培养或液体培养方法，既提高了卷浪草幼芽繁殖系数，缩短了培养时间，又保证了植株的质量，为加快卷浪草优质苗的繁殖速度开辟了新的途径。具体实施例方式下面结合实施例，对本专利技术作进一步的描述。实施例一1、诱导卷浪草嫩芽作外植体本专利技术采用卷浪草的嫩芽作外植体，将切去顶芽的块茎半浸泡状放置于以MS基本培养基为基础，由配制1L培养基大量元素用量是原来MS用量1/10～1/4，微量元素和铁盐用量是原来MS用量的1/6～1/2和含0.1～0.5mg/L的KT组成的营养液中，20天后，长出了4～6个芽，高约0.2～1.5cm，具有1～2片叶。将高约0.8～1.5cm的嫩芽切下，首先用加有少许洗衣粉和1滴吐温80的自来水冲洗5min，然后用清水冲洗干净；其次，在无菌条件下，用70％的酒精消毒10～15s，然后用0.1％升汞溶液浸泡振荡消毒5～8min；最后用无菌水冲洗4～5次，获得无菌材料作外植体。2、初始培养将获得的无菌嫩芽作外植体接种在MS+6-BA2.0+NAA0.2+青霉素钠8～10万个单位/L、琼脂0.75％、白糖3％、pH5.8的培养基上作初始培养，培养温度23～27℃，光照12h·d-1，光照度1500Lux，培养30～40天后，嫩芽的基部产生了愈伤组织，上面长有幼芽，诱导率达85％左右。3、继代培养3.1、在固体培养基上继代培养将带有丛生芽的愈伤组织块切成0.5×0.5mm小块，接种在MS+6-BA0.5～3.5+IAA0.2～0.4+活性炭1g/L、琼脂0.75％、白糖3％、pH5.8的固体培养基上作继代培养，培养温度23～27℃，光照12h·d-1，光照度1500Lux，培养时间20～30天，其结果见表一，其中有30～40％的芽长成完整植株，并可出瓶移栽。表一 卷浪草嫩芽在固体培养基上继代培养的结果 繁殖系数＝出芽数/接种数3.2、液体培养中继代培养将带有丛生芽的愈伤组织块切成0.5×0.5mm小块，接种在1/3～1/2MS+6-BA0.5～1.5+IAA0.05～0.2、白糖2％、pH5.8液体培养基中作继代培养，培养瓶放置在100～140rpm的旋转摇床上培养，培养温度23～27℃，光照12h·d-1，光照度1500Lux，培养时间15～20天，其结果见表二，其中60～80％的芽长出了3～5条根，形成完整植株，可出瓶移栽。表二 卷浪草嫩芽在液体培养基上继代培养的结果 繁殖系数＝出芽数/接种数4、生根培养将继代培养中产生的高约1.5cm以上的嫩芽，转入生根培养基MS+IAA 0.2～0.4+活性炭1g/L或MS+IBA0.1～0.3+NAA0.05～0.2+活性炭1g/L、琼脂0.75％、白糖2％、pH5.8的培养基上诱导生根，培养温度23～27℃，光照12h·d-1，光照度1500Lux，培养时间15～25天，其结果见表三。表三 卷浪草嫩芽在生根培养基上诱导生根的结果 生根率＝生根数/接种数×100％5、出瓶移栽幼苗出瓶移栽前炼苗3天，取出后洗净根部培养基，然后种植在以细砂为基质并加有淹没砂面15～20cm的净水池中，在常温，强光照和通气良好的条件下培养，成活率达100％，当植株高10～15cm，球茎直径达0.5～1.0cm时，可作为商品苗出售。以上试验结果表明，采用固体培养基MS+6-BA0.5～3.5+IAA0.2～0.4+活性炭1g/L繁殖卷浪草幼苗，繁殖周期20～30天，繁殖系数为3.87～4.62，若作连续培养，一年可培养12～13代，则由一个芽可产生新芽1.129×107～4.369×108个，采用液体培养基1/3～1/2MS+6-BA 0.5～1.5+IAA0.05～0.2繁殖卷浪草幼苗，繁殖周期15～20天，繁殖系数为4.2～5.03，作连续培养，一年可培养18～24代，则由一个芽可产生新芽1.65×1011～6.881×1016个。而采用常规的分株繁殖方法，一年只能繁殖10株左右。与常规繁殖方法相比较，本专利技术采用固体培养方法和液体培养方法，能大大提高卷浪草的繁殖速度，而且能在短时间内获得成批优本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种卷浪草离体繁殖的方法，其特征在于：（１）以卷浪草的嫩芽为外植体，接种在ＭＳ＋６－ＢＡ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ＋青霉素钠８～１０万个单位／Ｌ、琼脂０．７５％、白糖３％、ｐＨ５．８的培养基上作初始培养，诱导产生愈伤组织和 丛生芽；（２）将带有丛生芽的愈伤组织切成小块，接种在ＭＳ＋６－ＢＡ０．５～３．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ０．２～０．４ｍｇ／Ｌ＋活性炭１ｇ／Ｌ、琼脂０．７５％、白糖３％、ｐＨ５．８的固体培养基上作继代培养或接种在１／３～１／２ＭＳ＋６－ＢＡ ０．５～１．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ０．０５～０．２ｍｇ／Ｌ、白糖２％、ｐＨ５．８液体培养基中作继代培养，均产生丛生芽；（３）将（２）中获得的丛生芽切成单芽，转入ＭＳ＋ＩＡＡ０．２～０．４＋活性炭１ｇ／Ｌ或ＭＳ＋ＩＢＡ０．１～０．３ｍｇ／ Ｌ＋ＮＡＡ０．０５～０．２ｍｇ／Ｌ＋活性炭１ｇ／Ｌ、琼脂０．７５％、白糖２％、ｐＨ５．８的培养基上诱导生根，得到完整植株。

【技术特征摘要】
1.一种卷浪草离体繁殖的方法，其特征在于(1)以卷浪草的嫩芽为外植体，接种在MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+青霉素钠8～10万个单位/L、琼脂0.75％、白糖3％、pH5.8的培养基上作初始培养，诱导产生愈伤组织和丛生芽；(2)将带有丛生芽的愈伤组织切成小块，接种在MS+6-BA0.5～3.5mg/L+IAA0.2～0.4mg/L+活性炭1g/L、琼脂0.75％、白糖3％、pH5.8的固体培养基上作继代培养或接种在1/3～1/2MS+6-BA0.5～1.5mg/L+IAA0.05～0.2mg/L、白糖2％、pH5.8液体培养基中作继代培养，均产生丛生芽；(3)将(2)中获得的丛生芽切成单芽，转入MS+IAA0.2～0.4+活性炭1g/L或MS+IBA0.1～0.3mg/L+NAA0.05～0.2mg/L+活性炭1g/L、琼脂0.75％、白糖2％、pH5.8的培养基上诱导生根，得到完整植株。2.根据权利要求1所述的卷浪草离体繁殖的方法，其特征在于初始培养的温度23～27℃，光照12h·d-1，光照度1500Lux，培养时间30～40天。3.根据权利要求1所述的卷浪草离体繁殖的方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：饶秋容，罗玉明，何伟强，张芬，侯嵩生，李志良，
申请(专利权)人：梅县梅雁生物工程研究所，
类型：发明
国别省市：44[中国|广东]